Эффективность использования биологических микрочипов в исследовании специфических химерных онкогенов опухолевых кроветворных клеток

Анализ хромосомных транслокаций и генных мутаций опухолевых клеток на биочипе включал следующие этапы: изоляция РНК из лейкоцитов периферической крови, проведение двухэтапной “гнездной” (nested) ПЦР введение флуоресцентной метки в продукт ПЦР второго этапа с помощью флуоресцентно меченных праймеров, гибридизация меченого продукта ПЦР на биочипе, анализ изображения на приборе с программным обеспечением Imageware. Для исследования был выбран набор «ЛК-биочип»,состоящий из 13 наиболее значимых химерных онкогенов при остром лимфобластном лейкозе (ОЛЛ): t(12;21) ETV6-RUNX1, t(1;19) TCF3-PBX1, t(9;22) BCR-ABL1 t(4;11) MLL-AF4, и при остром миелобластном лейкозе (ОМЛ): t(15;17) PML-RARA, t(8;21) RUNX1-RUNX1T1, inv(16) CBFB-MYH11, t(9;11) MLL–MLLT3, t(10;11) MLL–MLLT10.

Результаты . Из 40 больных у 13 были выявлены различные мутации,что позволило генетически точно верифицировать диагноз «острый лейкоз». У 5 больных были выявлены структурные перестройки гена AML/ETO t(8;21). Данный химерный ген сам по себе не способен вызвать лейкоз,поэтому для полного подтверждения диагноза необходимо исследовать дополнительные (вторичные) мутации. У 4 больных были выявлены структурные перестройки гена MLL/AF10 t(10;11), в результате данной транслокации появляется онкобелок UPN9610I. У 4 больных были выявлены структурные перестройки гена BCR/ABL t(9;22).

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019

Результаты анализа биологического микрочипирования был подтвержден путем исследований химерного онкогена t(9;22) BCR/ABL p190 в ПЦР. При этом результаты тестирования контрольных и диагностических образцов показали полное совпадение. Все остальные образцы возможно, содержали другие соматические мутации, которые возможно идентифицировать с помощью других молекулярных методов (ПЦР FISH иммунофенотипирование, секвенирование и т. д.), что подтверждает гетерогенность соматических мутаций опухолевых клеток при ОЛ.

Выводы . Применение технологии биологического микрочипа с использованием набора «ЛК-биочип» является наиболее высокопродуктивной технологией исследования специфических химерных онкогенов опухолевых кроветворных клеток, заметно сокращающей время анализа, по сравнению с другими методами, снижающей его себестоимость, и, самое главное, позволяющей одномоментно анализировать не менее 13 «горячих» химерных онкогенов у больных острыми лейкозами.