Эколого-эпизоотологическая характеристика и лабораторная диагностика лихорадки Ку крупного рогатого скота по материалам изучения в Омской области

Инфекции, общие для человека и животных, на протяжении всей истории человечества были существенной проблемой общественного здоровья. Это, в первую очередь, относится к убиквитарным инфекциям с длительной персистенцией возбудителей в организме животных [1]. Коксиеллез (лихорадка Ку) – недостаточно контролируемая зоонозная инфекция с природной очаговостью, распространенная практически во всех регионах мира, а также более чем в 50 субъектах Российской Федерации [2; 3]. Особенно очевидным становится значение данной проблемы c учетом выраженной резистентности коксиелл в различных условиях существования, многообразных механизмов и путем передачи и возможности образововать длительно существующие очаги лихорадки Ку сельскохозяйственных животных [4].

У сельскохозяйственных животных болезнь имеет энзоотическое течение, протекает часто бессимптомно с выработкой антител и аллергизацией организма [5; 6]. Крупный рогатый скот достаточно чувствителен к лихорадке Ку [7]. В период болезни и продолжительный период после нее животные выделяют коксиеллы Бернета с мочой, калом, слюной,

секретом молочных желез и отделяемых слизистых оболочек верхних дыхательных путей. Длительная персистенция возбудителя наблюдается у части животных после перенесенной инфекции.

Болезнь отличается медленным развитием, зачастую со скрытым накоплением специфических антител в крови животных. Коксиеллы, обладая выраженной избирательностью, размножаются в селезенке, легких, лимфатических узлах, молочной железе, матке. Накапливаясь в больших количествах, они вызывают общие изменения септикотоксического характера, раздражение ретикулоэндотелиальной и лимфатической системы, гиперплазию фолликулов селезенки, а также дегенеративные изменения в печени, почках, миокарде, центральной нервной системе, в матке, молочных железах, семенниках и других органах; образование микронекротических фокусов, впоследствии преобразующихся в соединительную ткань. В некоторых случаях образуются абсцессы в паренхиме (молочная железа и региональные лимфатические узлы). Также возможно повторное внедрение возбудителя в кровяное русло из регионарных лимфоузлов [5].

Отсутствие современных данных по региональной эпизоотологии лихорадки Ку является одним из существенных недостатков в ее изучении, а отсутствие лабораторной базы существенно тормозит профилактику и ликвидацию этой болезни. РСК с антигеном из возбудителя фазы I, которая на сегодняшний день получила наиболее частое использование в качестве лабораторного теста для диагностики лихорадки Ку крупного рогатого скота, не всегда дает возможность выявлять все случаи заболевания [5; 6].

Лихорадка Ку повышает восприимчивость скота к вторичным инфекциям, что делает ее течение более тяжелым, в некоторых случаях приводя к летальному исходу. Отсутствие специфической клинической картины и лабораторной верификации диагнозов в значительной мере определяет сложившуюся ситуацию, при которой коксиеллезная инфекция выявляется далеко не в полной мере, оставаясь в большинстве административных территорий вне эпизоотологического контроля. В связи с этим, наряду с развитием лабораторных диагностических тестов, важна оптимизация эпизоотологического надзора за коксиеллезом.

Принимая во внимание особенности течения и патогенез болезни, необходимо проводить своевременную диагностику лихорадки Ку крупного рогатого скота, в том числе в совокупности с другими инфекционными патологиями с помощью современных и рациональных методов.

Объекты и методы

С целью совершенствования лабораторной диагностики и оценки эпизоотической ситуации по лихорадке Ку крупного рогатого скота разработаны и испытаны коксиеллезный антигенный эритроцитарный диагностикум для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) и гипериммунные сыворотки для реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). Апробация этих методов проведена в хозяйствах Омской области.

Применен способ получения коксиеллезной иммунной сыворотки с помощью антигена из штамма Coxiella burnetii М-44 путем гипериммунизации кроликов по схеме D. Schimmel в модификации [8] с дополнительным подкожным введением иммуностимулятора левамизо-ла при первых двух внутривенных инъекциях антигена. Гипериммунизация кроликов данным методом позволяет получить активную и специфичную в РНИФ антикоксиеллезную сыворотку [9]. Был сконструирован коксиеллезный антигенный эритроцитарный диагности-кум для реакции непрямой гемагглютинации [10]. Диагностикум изготовливали по методу Фили в модификации, которая заключается в более щадящем способе воздействия формалина на эритроциты и одновременном обеспечении хорошей их фиксации. В качестве сенсити-на использовали коксиеллезный антиген также из штамма Coxiella burnetii М-44.

Результаты исследования и обсуждение

Как известно, для постановки серологических реакций необходимо иметь соответствующие специфические антисыворотки и антигены. При этом наиболее эффективным методом гипериммунизации животных является разработанная модификация, суть которой состоит в дробном внутривенном введении антигена кроликам. Достоинство данного метода состоит в возможности получать антисыворотки с высокими титрами антител. Для сравнения диагностической ценности реакции классического метода флюоресцирующих антител (МФА) с меченой флюорохромом коксиеллезной сывороткой производства НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи и РНИФ с полученной кроличьей гипериммунной сывороткой проведено исследование проб молока и цервико-вагинальной слизи от коров дойного стада, принадлежащих двум хозяйствам Омской области. В результате определено, что полученная кок-сиеллезная сыворотка обладает достаточной специфичностью и чувствительностью, а по активности не только не уступает меченной коксиеллезной сыворотке для МФА, но и позволяет выявлять больше животных с низкой концентрацией антигена в РНИФ. Используя коксиеллезный антиген, можно исследовать сыворотку крови на наличие антител, при этом в РНИФ дополнительно к МФА выявляется на 5 % больше реагирующих животных.

Для выявления антител к коксиеллам сконструирован коксиеллезный эритроцитарный антигенный диагностикум для реакции непрямой гемагглютинации (патент № 2410698, 2011). Полученный диагностикум специфичен и обладает достаточной активностью в РНГА при выявления антител при лихорадке Ку сельскохозяйственных животных.

В производственных условиях для сопоставления диагностической ценности РНГА и РНИФ проведено исследование 681 пробы сывороток крови от коров и телок из 16 хозяйств. В РНГА выявлено 8,6 %, а в РНИФ ‒ 9,8 % положительных результатов. Результаты испытания свидетельствуют, что методы близки по чувствительности, при комплексном исследовании скота позволяют своевременно выявлять больных, носителей и проводить лечебно-профилактические мероприятия при кок-сиеллезной патологии.

Результаты проведенного серологического мониторинга выявили значительное распространение коксиеллеза крупного рогатого скота в хозяйствах Омской области. Из 29 обследованных хозяйств лихорадка Ку выявлена в 17 (59 %), при этом серопозитивность скота составляла от 3 до 65 % (в среднем 10,6 %), что существенно не отличается от результатов исследований в предшествующий период 1997‒2006 гг. (9,3 %).

Как показали результаты комплексного лабораторного обследования животных на ряд патогенов, лихорадка Ку крупного рогатого скота часто является микст-инфекцией. Наиболее часто в ассоциации с коксиеллами выявляют хламидии (59 %), листерии (48 %), лептоспиры (44 %), микоплазмы (33 %), а наибольший процент в ассоциации принадлежит хламидиям – 59 %.

Заключение

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о широком распространении в Омской области лихорадки Ку крупного рогатого скота в современный период, несмотря на отсутствие официальной регистрации этой инфекции. Учитывая, что лихорадка Ку в Омской области у людей и сельскохозяйственных животных выявлена еще в 50-е годы прошлого века [2], можно отметить длительную (более 60 лет) энзоотичность региона по данной инфекции. Очаги лихорадки Ку носят выраженный сочетанный характер, однако если ранее наиболее часто сочетались очаги лихорадки Ку и бруцеллеза, то в настоящее время при отсутствии (или резком снижении) распространения бруцеллеза крупного рогатого скота, инфекционный процесс при лихорадке Ку сочетается с хламидиями, микоплазмами, листериями и рядом других зоонозных патогенов с общими механизмами и путями заражения.

Разработанные препараты для выявления антигенов коксиелл в патологических материалах от животных (РНИФ) и серологического обследования на лихорадку Ку (РНГА, РНИФ) обладают достаточной чувствительностью и специфичностью и могут быть использованы для лабораторной верификации диагнозов.

С учетом длительного неблагополучия хозяйств региона по лихорадке Ку крупного рогатого скота необходимо внедрение эффективной системы эпизоотолого-эпидемио-логического надзора и мер борьбы с этой инфекцией на федеральном и региональном уровнях.

A.P. Krasikov 1, M.V. Zabolotnykh 1, N.V. Rudakov 2

1Omsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin, Omsk

2Omsk Research Institute of Natural Focal Infections of Rospotrebnadzor, Omsk

Ecological and epizootological characteristics and laboratory diagnostics of Q-fever in cattle on the materials of Omsk region