Экспрессия антигена ВЗН в легких мышей при экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила
Автор: Смирнов А.В., Бутенко А.М., Снигур Г.Л., Быхалов Л.С., Хуторецкая Н.В., Ларичев В.Ф.
Журнал: Волгоградский научно-медицинский журнал @bulletin-volgmed
Рубрика: По материалам научно-практической конференции
Статья в выпуске: 1 (33), 2012 года.
Бесплатный доступ
При проведении иммуногистохимического исследования с использованием моноклональных антител к вирусу Западного Нила отмечена ядерная и цитоплазматическая экспрессия антигенов, которая была наиболее выражена в альвеолярных макрофагах и эндотелии кровеносных капилляров межальвеолярных перегородок легких в группе животных с клиническими проявлениями лихорадки Западного Нила на 7 сутки от момента инфицирования.
Лихорадка, иммуногистохимия, антиген, экспрессия, альвеолярные макрофаги
Короткий адрес: https://sciup.org/142148970
IDR: 142148970 | УДК: 616.91-092.9:616.24
WNV antigen expression in the lungs of mice in experimental modeling of West Nile fever
An immunohistochemical study using monoclonal antibodies to West Nile virus showed nuclear and cytoplasmic expression of antigens, which was most pronounced in alveolar macrophages and the endothelium of blood capillaries in the pulmonary interalveolar septa group of animals with clinical signs of West Nile fever on the 7th day from the moment of infection.
Текст научной статьи Экспрессия антигена ВЗН в легких мышей при экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила
Появление многочисленных случаев ЛЗН, начиная с 1999 года, в Западном полушарии резко актуализировали обозначенную проблему [Бутенко А. М., 2007; Petersen L. R., Hayes E. B., 2008; Bataille A., et al., 2009; Levi M.E., et al., 2010]. Антигены вируса Западного Нила (ВЗН) с регулярным постоянством обнаруживаются в пробах комаров и клещей на территории Волгоградской области [Фёдорова М. В., 2007; Львов Д. К. с соавт., 2008].
В работах отечественных ученых показано наличие вируса в тканях легких умерших от ЛЗН пациентов (Писарев В. Б. c соавт., 2004; Григорьева Н. В., 2005), однако особенности экспрессии антигена в легких в зависимости от стадии заболевания остаются мало изученными.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Выявить особенности экспрессии антигена вируса Западного Нила в легких в различные периоды инфекционного процесса при экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Иммуногистохимическое исследование с целью определения экспрессии антигенов вируса Западного Нила проводили с использованием моноклональ- ных антител предоставленных лабораторией биологии и индикации арбовирусов НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН. Визуализацию проводили с помощью непрямого иммунопероксидазного метода с высокотемпературной демаскировкой антигенов на базе лаборатории морфологии и иммуногистохимии Волгоградского медицинского научного центра [Григорьева Н. В., 2005; Белик Т. А., 2006].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯИ ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
На пятые-шестые сутки эксперимента у большинства животных наблюдалось появление парезов и параличей, то есть обнаруживались клинические проявления западнонильского энцефалита, которые связаны с обратимыми и необратимыми повреждениями нейронов различных отделов ЦНС (Глухов В. А., 2009), поэтому седьмые сутки эксперимента у заболевших животных рассматривались нами как период разгара заболевания.
При иммуногистохимическом исследовании легких заболевших животных определялась выраженная экспрессия антигенов вируса ЗН по наличию иммунореактивного материала в ядрах и цитоплазме эндотелиоци-тов кровеносных капилляров межальвеолярных перегородок, альвеолярных макрофагов, ядерная экспрессия в больших и респираторных эпителиоцитах (рис. 1). При исследовании бронхиального дерева отмечено наличие иммунореактивного материала в ядрах и цитоплазме реснитчатых эпителиоцитов многорядного реснитчатого эпителия мелких бронхов и бронхиол, а также ядер-ная экспрессия в эндотелии капилляров, отдельных соединительнотканных и гладкомышечных клетках мышечной и адвентициальной оболочек бронхиол (рис. 2).
Рис. 1. Наличие иммунореактивного материала в ядрах клеток респираторных отделов легкого мыши, инфицированной ВЗН с клинической симптоматикой ЛЗН
(7-е сутки заболевания). Иммунопероксидазный метод с использованием двойных антител с докраской гематоксилином. Ув. х 400
Рис. 2. Наличие иммунореактивного материала в ядрах и цитоплазме клеток многорядного реснитчатого эпителия бронхиолы мыши, инфицированной ВЗН с клинической симптоматикой ЛЗН (7-е сутки заболевания). Иммунопероксидазный метод с использованием двойных антител с докраской гематоксилином.
Ув. х 400
При исследовании мышей с клиническими проявлениями ЛЗН, выведенных из эксперимента на 14-е сутки (период реконвалесценции) у животных отмечается значительное уменьшение неврологической симптоматики по сравнению с предыдущим сроком эксперимента.
При иммуногистохимическом исследовании срезов легких животных, инфицированных ВЗН с клинической симптоматикой ЛЗН (14-е сутки заболевания)
определялась менее выраженная экспрессия антигенов вируса ЗН в ядрах клеток респираторного эпителия, выстилающего альвеолы. Иммунореактивный материал накапливался в части ядер респираторных эпителиоцитов, больших эпителиоцитов, альвеолярных макрофагов, а также в ядрах эндотелиоцитов кровеносных капилляров межальвеолярных перегородок (рис. 3). В цитоплазме вышеуказанных клеток экспрессия антигенов вируса ЗН низкая. При исследовании бронхиального дерева отмечено меньшее количество иммунореактивного материала в ядрах и цитоплазме клеток многорядного реснитчатого эпителия мелких бронхов и бронхиол по сравнению с предыдущим сроком исследования (рис. 4).
Рис. 3. Наличие иммунореактивного материала в ядрах и цитоплазме респираторных эпителиоцитов мыши, инфицированной ВЗН с клинической симптоматикой ЛЗН (14-е сутки заболевания).
Иммунопероксидазный метод с использованием двойных антител с докраской гематоксилином.
Ув. х 400
Рис. 4. Наличие иммунореактивного материала в ядрах и цитоплазме клеток многорядного реснитчатого эпителия бронхиолы мыши, инфицированной ВЗН с клинической симптоматикой ЛЗН (14-е сутки заболевания). Иммунопероксидазный метод с использованием двойных антител с докраской гематоксилином. Ув. х 400.
При исследовании животных (инфицированные животные с клинической симптоматикой ЛЗН, умер- шие в ходе эксперимента) умерших на 6— 9-е сутки эксперимента при нарастании неврологической симптоматики, с развитием глубокой мозговой комы.
При иммуногистохимическом исследовании легких заболевших животных определялась менее выраженная экспрессия антигенов вируса ЗН в ядрах клеток респираторного эпителия, выстилающего альвеолы. Иммунореактивный материал накапливался в части ядер респираторных эпителиоцитов, больших эпителиоцитов, альвеолярных макрофагов, а также в ядрах эндотелиоцитов кровеносных капилляров межальвеолярных перегородок (рис. 5). В цитоплазме вышеуказанных клеток экспрессия антигенов вируса ЗН низкая. При исследовании бронхиального дерева отмечено меньшее количество иммунореактивного материала в ядрах и цитоплазме клеток многорядного реснитчатого эпителия мелких бронхов и бронхиол по сравнению с предыдущим сроком исследования (рис. 6).
Рис. 5. Наличие иммунореактивного материала в ядрах и цитоплазме респираторных эпителиоцитов мыши, с клиникой ЛЗН, умершей на 7-е сутки. Иммунопероксидазный метод с использованием двойных антител с докраской гематоксилином. Ув. х 400
Рис. 6. Наличие иммунореактивного материала в ядрах и цитоплазме клеток многорядного реснитчатого эпителия бронхиолы мыши, с клиникой ЛЗН, умершей на 7-е сутки. Иммунопероксидазный метод с использованием двойных антител с докраской гематоксилином.
Ув. х 400.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
При проведении иммуногистохимического исследования с использованием моноклональных антител к вирусу Западного Нила отмечена ядерная и цитоплазматическая экспрессия антигенов, которая была наиболее выражена в альвеолярных макрофагах и эндотелии кровеносных капилляров межальвеолярных перегородок легких в группе животных с клиническими проявлениями заболевания на 7-е сутки от момента инфицирования.
