Экспрессия каспазы 32 и каспазы 8 в яичниках у самок крыс при различных дозах йодида калия

В литературе имеются данные о том, что йодиды стимулируют в щитовидной железе процессы апоптоза [2]. Некоторые исследователи считают, что йодиды влияют на митохондриальный путь программированной гибели клеток как в тканях щитовидной железы [1], так и в экстратиреоидных тканях [4].

Имеются также экспериментальные данные о влиянии йодида калия на выраженность экспрессии каспазы 32 и каспазы 8 в тканях щитовидной железы, гипофиза и яичников [5]. При дальнейших исследованиях было выявлено, что выраженность этого процесса в гипофизе и щитовидной железе дозозависима – активация каспаз возникает только при определенных дозах йодида калия, индивидуальных для гипофиза и щитовидной железы [3]. Оставался открытым вопрос, справедливо ли это утверждение для яичников.

Исходя из вышеизложенного целью настоящего исследования стало изучение влияния различных доз йодида калия на экспрессию каспазы 32 и каспазы 8 в яичниках у эутиреоидных самок крыс.

Материалы и методы. В эксперименте, выполненном на кафедре анатомии и гистологии Уральской академии ветеринарной медицины Минсельхоза России (зав. кафедрой – проф. В.К. Стри-жиков), были использованы 32 беспородные крысы-самки 6-месячного возраста со средней массой 250 ± 30 г. Животные содержались в виварии со стандартным световым режимом (12 ч света : 12 ч темноты (дневная фаза – с 7:00 до 19:00 летнего времени)) и получали стандартный корм и воду. Эксперимент проводился в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к Приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 775). Самки были взяты на опыт в фазы диэструса и метаэструса. 8 животных составили контрольную группу, 24 – 1, 2, 3 и 4-ю груп- пы (от 6 до 8 крыс в каждой). Крысам 1–4-й групп однократно через желудочный зонд вводили йодид калия из расчета соответственно 1 мкг/100 г, 4 мкг/100 г, 8 мкг/100 г и 25 мкг/100 г массы животного (м. ж.).

Анализ цикличности функционирования гонад проводился на основании определения гормонов репродуктивной сферы в сыворотке крови и исследования вагинальных мазков.

Все животные были подвержены эвтаназии под эфирным наркозом в период с 11 до 13 ч дневной фазы экспериментальных суток через 48 ч после введения йодида калия. Предварительно у животных проводился забор крови из яремной вены. У всех крыс были изъяты яичники.

Морфологический раздел работы был выполнен в Областном патологоанатомическом бюро Министерства здравоохранения Челябинской области (начальник – канд. мед. наук Г.В. Сычугов) и на кафедре анатомии и гистологии Уральской академии ветеринарной медицины Минсельхоза России (зав. кафедрой – профессор В.К. Стрижиков).

Определение экспрессии каспазы 32 и каспазы 8 в тканях яичников осуществляли стрепта-видин-биотиновым методом с помощью моноклональных антител к каспазе 32 (clone GHM62, 1:50 v/v) и каспазе 8 (clone 11 B6, 1:30v/v) (Novo-castra, Newcastle upon Tyne, UK). Было исследовано 32 образца (по 8 образцов в контрольной и второй группах, и по 6 – в первой, третьей и четвертой). Для визуализации антигенреактивных клеток использовали тест-систему «Novostain Universal Detection Kit» (Novocastra, Newcastle upon Tyne, UK).

Препараты исследовались с помощью светового микроскопа Axiostar plus (Carl Zeiss Jena, Germany), оснащенного 35-мм фотоаппаратом (Cannon Power Shot A520). Подсчет числа клеток с позитивным (коричневым) иммуногистохимическим окрашиванием проводился при увеличении

Серия «Образование, здравоохранение, физическая культура», выпуск 32

Проблемы здравоохранения

× 400 по проценту окрашенных клеток (positive area % (PA%)). Результаты подвергались автоматизированному количественному анализу с использованием программного обеспечения BioVision Professional 3.0 (West Medica Handels GmbH, Vienna, Austria).

Комплексный статистический анализ был выполнен с использованием пакета прикладных программ Statistica for Windows 6.0. Достоверность различий между группами вычисляли с помощью t -критерия Стьюдента. Достоверными считали значения при p ≤ 0,05.

экспрессия каспазы 32 в щитовидной железе изменялась только при 8 мкг/100 г м. ж. [3]. В яичнике реакция каспазы 8 была с более широким диапазоном – достоверный рост был как после 8, так и после 25 мкг/100 г м. ж.

Понимание деталей процессов регуляции каспаз тесно связано с возможностью рационально манипулировать апоптозом с целью получения терапевтических выгод.

По результатам проведенного нами исследования можно предположить, что реакция каспаз на введение йодида калия не только дозозависима, но

Динамика изменений экспрессии каспазы 8 и каспазы 32 в яичниках при различных дозах йодида калия. * – p ≤ 0,05 – различия с контрольной группой

Результаты исследования и обсуждение. Экспрессия каспазы 8 (см. рисунок). Уровень экспрессии каспазы 8 достоверно повышался с 1,7 ± 0,8 % PA в контроле до 4,0 ± 0,9 % PA после дозы йодида калия 8 мкг/100 г м. ж. ( p < 0,05) и до 4,2 ± 0,3 % PA после 25 мкг/100 г м. ж. ( p < 0,05).

Экспрессия каспазы 32 (см. рисунок). Повышение экспрессии каспазы 32 было недостоверным при всех дозах йодида калия: от 1,5 ± 0,5 % PA в контроле до 3,0 ± 0,7 % PA ( p > 0,05), 3,9 ± ± 1,2 % PA ( p > 0,05), 2,5 ± 0,2 % PA ( p > 0,05), 3,4 ± 0,6 % PA ( p > 0,05) после доз йодида калия 1, 4, 8 и 25 мкг/100 г м. ж. соответственно. Однако пик экспрессии каспазы 32 наблюдался после дозы 4 мкг/100 г м. ж.

При сравнении влияния различных доз йодида калия на экспрессию каспаз 32 и 8 в тканях яичника, гипофиза и щитовидной железы определяется, что реакция яичника на KI ближе к изменениям в щитовидной железе, чем к гипофизу. В гипофизе экспрессия каспаз 32 и 8 достоверно вырастает при всех исследуемых дозах йодида калия (с 1 до 25 мкг/100 г м. ж.) [3]. В щитовидной железе, как и в яичнике, – только после дозы 8 мкг/100 г м. ж. [3].

Было выявлено и отличие в реакции каспаз между щитовидной железой и яичником: в тканях щитовидной железы повышалась экспрессия эффекторной каспазы 32, а в тканях яичника – инициаторной каспазы 8. Также можно отметить, что и органоспецифична, причем каспазы в тканях экстратиреоидных органов изменяются активнее, чем в тканях щитовидной железы.