Экзосомы как межклеточные переносчики химерного транскрипта BCR-ABLР210 и потенциальные маркеры минимальной остаточной болезни у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом

24 часа при 37ºС с 5 % CO2. После этого вносили 300 мкл бессывороточной питательной ростовой среды с экзосомами (выделенных с порядка 70 х 106 клеток на лунку) и инкубировали клетки в течение 24 часов при тех же условиях. Кокультивирование К-562 и МСК проводили в 24-луночном планшете с полу-непроницаемыми перегородками (диаметр пор — 0,4 мкм) при аналогичных условиях.

Результаты . Наибольшее количество везикул в пробе соответствует размерам экзосом. Результаты исследования 15-ти образцов показали, что распределение среднего размера проб по диаметру находится в диапазоне 51,8÷107,0 нм со средним значением 78,96±20,03 нм. Дзета-потенциал соответствует стабильным частицам и в среднем равен –29,3±7,4 мВ. По результатам Real-Time ПЦР содержание химерного транскрипта BCR-ABL в экзосомах колебалось в интервале 44,42–863,79 копий/мл кондиционной среды со значением медианы 154,42 копий. После кокультивирования К-562 и МСК относительный уровень экспрессии транскрипта BCR-ABL в клетках-реципиентах составило от 0,03 до 11,4 %. Контроль проницаемости мембраны для клеток проводили

V Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ —

ОТДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»

Санкт-Петербург 26–27 апреля 2019 г.

с помощью проточной цитометрии по CD45. В результате трансфекции экзосомами относительное содержание химерного транскрипта в МСК здоровых доноров (n=9) находилось в интервале от 0,01 до 15,88 % с медианой 0,11 %, что соответствует положительному результату при определении МОБ и указывает на их непосредственное участие в горизонтальном переносе in vitro.

Выводы . Показана возможность горизонтального переноса мРНК гена BCR-ABL (р210) тирозинкиназы в клетки стромального микроокружения in vitro посредством экзосомальной фракции.