Электронно-микроскопическое исследование ультраструктуры Salmonella Pullorum-Gallinarum под воздействием дезинфицирующего средства «Натопен»

При разработке дезинфицирующих средств значительное место принадлежит изучению механизма действия их на микробную клетку, электронномикроскопическим методом [1, 6]

Предыдущими исследованиями [3, 5] показана высокая бактерицидная, фунгицидная, вирулицидная активность препарата «Натопен», а также его эффективность в качестве биоцидной, пролонгирующей добавки к побелочному материалу [4].

Цель данной работы - изучение влияния препарата «Натопен» на ультраструктуру Salmonella pullorum-gallinarum.

Материалы и методы. Для электронной микроскопии использовали взвесь микроорганизма Salmonella pullorum-gallinarum плотностью 2 млрд. микробных тел в 1 мл физиологического раствора, которую подвергали воздействию препаратом «Натопен». Экспозиция контакта препаратов с микроорганизмами продолжалась 30 минут. После окончания сроков экспозиций проводили нейтрализацию воздействующих растворов общепринятыми методами [2]. Пробы подвергали 3 кратному отмыванию путем центрифугирования при 6000 об /мин в течение 30 минут. Полученную бактериальную массу использовали для электронной микроскопии. В качестве контроля была взята культура Salmonella pullorum- gallinarum, обработанная физиологическим раствором.

Для электронно-микроскопических исследований применяли негативное контрастирование. Для этого использовали 2%-ный раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты. Полученные препараты рассматривали в электронном микроскопе просвечивающего типа с минилинзами ПЭМ-100 при инструментальном увеличении 15-45 тыс.

Результаты исследования .

Электронно-микроскопические исследования Salmonella pullorum-gallinarum (контроль) показали, что сальмонеллы имели типичную для грамотрицательных бактерий ультраструктуру - палочки с закругленными краями, размеры которых колебались от 2 до 4 мк в длину; 0,2-0,8 мк в ширину и представлены хорошо выраженными поверхностными структурами. Клеточная стенка толщиной до 130 А° состояла из трехслойной извилистой мембраны и подлежащего слоя низкой электроннооптической плотности с неравномерной толщиной. За клеточной стенкой следовала трехслойная цитоплазматическая мембрана толщиной до 80 А0, которая плотно прилегала к гранулярной цитоплазме, заполненной рибосомами и полисомами. Тонкофибриллярный нуклеоид располагался в центральной части клеток (рис. 1).

КС

Рис. 1 - Ультраструктура Salmonellapullorum-gallinarum. (контроль) х 15тыс.

КС - клеточная стенка;ЦПМ - цитоплазматическая мембрана;ЦП- цитоплазма;П - пространство, отделяющее клеточную стенку от ЦПМ

После воздействия 0,5%-ного раствора препарата «Натопен» в течение 15 минут на Salmonella pullorum-gallinarum происходило изменение поверхностных структур. При этом наблюдается разрыв клеточной стенки, отдельные участки размыты, происходит незначительное отхождение клеточной стенки от протопласта. Цитоплазма сохраняет свою электронную плотность, уплотняясь к периферии в виде тяжей (рис 2).

Рис. 2 - Ультраструктура Salmonella pullorum-gallinarum после воздействия 0,5% раствора препарата «Натопен», экспозиция 15 минут.

РКС - разрыв клеточной стенки;ОКС - отхождение клеточной стенки от протопласта; Т - тяжи.

Наружная мембрана клеточной стенки заметно разрыхлена, местами размыта; подлежащий слой разрежен. Цитоплазматическая мембрана фрагментарно разрушена. Внутренние компоненты представлены уплотненным и размытым гранулярным материалом.

Рис.3 -                                                              Ультраструктура

Salmonella pullorum-gallinarum после воздействия 0,5 % раствора препарата «Натопен» , экспозиция 30 минут.

РКС - разрыхление клеточной стенки; ЦСР - цитоплазма в стадии разрыхления гранулярного компонента.

Изучение клеточной стенки Salmonella pullorum-gallinarum после воздействия той же концентрации препарата «Натопен» в течение 30

Внутренние структуры подверглись распаду (рис. 3).

Заключение.         Проведенные минут показало, что поверхностная структура не дифференцируется, наблюдается выход содержимого клетки, характеризующейся пустотами и обширными участками коагуляции. Цитоплазма полностью размыта и имеет неоднородную структуру – конгломерирована на участки с различной электронно-оптической плотностью, что связано с денатурацией белков.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Морозов К.Н.,

исследования показали, что дезинфицирующее средство «Натопен» в минимальных концентрациях влияет на структурно-морфологическую картину микробной клетки, разрушая морфологический покров, клеточную стенку и цитоплазматическую мембрану.

Электронная микроскопия в цитологических исследованиях, Новосибирск, 2013-85с. 2. Поляков А.А., Ветеринарная дезинфекция. М.: Колос, 1975-560с. 3. Равилов А.З., Угрюмова В.С., Савельчев А.П. и др., Натопен-дезинфектант широкого спектра антимикробного действия, //Ветеринария, 12.2010 c.8-12. 4. Равилов А.З., Угрюмова В.С., Савельчев А.П., Беластар-униврсальное побелочное средство с биоцидным пролонгированным эффектом, //Ветеринария, 2011, .37-39. 5. Угрюмова В.С., Равилов А.З., Гайфулин М.Г., и др., Эффективность дезинфицирующие средство Натопен в бройлерном производстве птицеводства, //Ветеринария, 2012, №6, c.15-17. 6. Griffiths G. The Use of Electron Microscopy in Cell Biology. MCB, 2004, 68p.

ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ УЛЬТРАСТРУКТУРЫ SALMONELLA PULLORUM- GALLINARUM ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩЕГО СРЕДСТВА «НАТОПЕН»

Гайфуллин Р.М. Резюме

Установлено, что дезинфицирующее средство «Натопен» в минимальных концентрациях влияет на структурно-морфологическую картину микробной клетки.

ELECTRON MICROSCOPIC STUDIES ULTRASTRUCTURE SALMONELLA PULLORUM-GALLINARUM UNDER DISINFECTANTS "BOOST"

Gaifullin R.M.