Эндогенная интоксикация в динамике острого подпеченочного холестаза у крыс

Введение. Увеличение заболеваний гепатобилиарной системы заставляет искать новые способы диагностики и лечения. Наиболее часто встречаемой патологией данной системы является желчнокаменная болезнь, от которой страдают 10-15% взрослого населения экономически развитых стран (Калинин, Хазанов, 2007). Это делает данную патологию не только медицинской, но и социальной проблемой (Konikof, 2003; Рекомендации..., 2005) Желчекаменная болезнь часто сопровождается нарушением оттока желчи - холестазом, приводящим к расстройствам функций печени, обмена веществ, полиорганной патологии (Кизюкевич, 2005; Иванченкова, 2006). При этом одним из главных моментов в патогенезе последней отводят эндогенной интоксикации.

Определение эндогенной интоксикации весьма актуально, поскольку дает возможность установить определенные звенья патогенеза данного синдрома. Выбор определения тирозинсодержащих пептидов (ТСП) продиктован соображением, что именно тирозин входит в состав уремического токсина, определяемого при почечной недостаточности (Владыка, 1987), которая может возникнуть при подпеченочном холестазе и стать причиной гибели организма (Кизюкевич, 2005). Исследований ТСП как проявления эндогенной интоксикации в тканях и органах в суточной динамике острого подпеченочного холестаза у крыс ранее не проводилось. В связи с этим

Вестник ТвГУ. Серия "Биология и экология". 2015. № 1 мы задались целью определить содержание тирозинсодержащих пептидов как показателя эндогенной интоксикации в плазме крови и мозге, а также билирубина крови (показатель степени тяжести), в динамике острого полного подпеченочного холестаза у крыс.

Методика. Исследование проведено на 135 беспородных белых крысах-самцах массой 225±25 г. Опытным животным операционным путём перевязывали общий желчный проток на 4-5 мм ниже места слияния долевых протоков с полным пересечением его между двумя шёлковыми лигатурами. Крысам контрольной группы (45 крыс) проводили все те же манипуляции, только проток не перевязывали; в течение всего эксперимента у них имел место физиологический отток желчи. Спустя 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 суток животных (по 10 крыс в каждой группе) выводили из эксперимента с соблюдением требований международных конвенций о гуманном обращении с животными в условиях лабораторных исследований.

Из гепаринизированной крови получали плазму, определение билирубина проводили общепринятыми методами лабораторной диагностики (в мкмоль/л) (Камышников, 2002). Кусочки печени и мозга после извлечения быстро помещали в жидкий азот, где хранили до момента исследования. В образцах крови и органов по методу Н.Ф. Лобко и соавт. (2003) определяли содержание ТСП. Данный метод является высокочувствительным по сравнению с аналогичными, проводимыми спектрофотометрически (спектрофотометр СФ-2000) по ультрафиолетовому поглощению (методы определяющие: молекулы средней массы; вещества низкой и средней молекулярной массы; олигопептиды; пептиды, содержащие остатки ароматических аминокислот). Кроме того, предложенный упрощенный вариант способа легко исполним: авторами предложена формула расчета концентрации ТСП при значениях максимального поглощения (Дх = 290 нм). Полученные данные выражали в единицах оптической плотности на один грамм белка (ед. опт. пл. г"1 белка). Количество белка находили микробиуретовым методом (Плехан, 1961). Статистическую обработку полученных результатов проводили методами непараметрической статистики (U-критерий Манна-Уитни, по тексту - медиана и интерквартильный ранг (Me±lQR) с использованием программы Statistica 6.0). Значимыми считали различия между сравниваемыми группами при р<0,05.

Результаты и обсуждение. Установлено, что через 2 суток холестаза в сыворотке крови животных появляется прямой билирубин, при этом непрямой билирубин возрастает на 64% и общий - на 156%. Через 3 суток непрямой билирубин возрастает еще более - в 2,2 раза, и соответственно, общий билирубин - в 3,4 раза. Максимальные отличия определены на 5 сутки, когда дальнейший рост фракции прямого билирубина, по сравнению со вторыми сутками увеличивается в 3,2

Вестник ТвГУ. Серия "Биология и экология". 2015. № 1

раза. При этом непрямой билирубин увеличивается по сравнению с контролем в 5,5 раза, а общий - в 8,3 раза. Затем имеет место некоторое снижение всех показателей - на б сутки холестаза в сыворотке крови животных непрямой билирубин увеличен в 4,2 раза, а общий билирубин - в 7,4 раза. Через 8 суток от начала эксперимента - непрямой билирубин увеличен в 3,4 раза и общий - в 4,8 раза. Спустя 9 суток холестаза непрямой билирубин составляет 220%, и общий билирубин -272%. Через 10 суток холестаза имеет место наличие прямого билирубина, повышенное содержание непрямого билирубина в крови животных составляет 160%, и соответственно, общего билирубина - в 204% сравнению с контрольными значениями. Наблюдаемые большие значения 1QR в опыте можно объяснить высокими колебаниями сугубо индивидуальных повышений этого показателя у каждой крысы (повышения колеблются от 2,8 до 14,3 мкмоль/л). Таким образом, у крыс в эксперименте имел место холестаз.

Таблица

Количество тирозинсодержащих пептидов в плазме крови и тканях крыс в динамике подпеченочного холестаза в ед. опт. пл. г'¹ белка, (Me ± IQR)

Примечание. *- р<0,05; **- р<0,01 - по сравнению с контролем.

Как видно из таблицы, ТСП в плазме крови имеют следующую тенденцию: на вторые сутки их содержание снижается на 15,6% (Р<0,035; Z=2,10), так что к 5 суткам отмечен их минимум - снижение

Вестник ТвГУ. Серия "Биология и экология". 2015. № 1

на 42,4% (Р<0,006; Z=2,75), затем отмечено постепенное увеличение ТСП; на 10 сутки оно составило 25,1% (Р<0,025; Z=-2,24).

В ткани мозга только на 2 сутки отмечено увеличение содержания ТСП на 5,4% (Р<0,035; Z=2,10), на 3 сутки - примерное равенство, а, далее, постепенное уменьшение до 8 суток, а затем на 9-10 сутки некоторое увеличение, но это только 92,5% от контрольных значений. В ткани печени отмечено увеличение содержания на 2-4 сутки, а затем, с 6 суток - их уменьшение.

Таким образом, уровень ТСП плазмы крови имеет тенденцию к снижению на 2 и более процентов на 5 сутки холестаза, а на 10 сутки достигает максимума. Подобное явление можно объяснить связыванием токсинов эритроцитами, при насыщении которых наблюдается рост ТСП. Всасывание токсических продуктов из кишечника приводит к снижению детоксикационной функции печени, что согласуется с литературными данными (Ведунова и др., 2008), а это непременно отражается на росте ТСП в крови, и как следствие - ткани организма насыщаются продуктами метаболизма. Исключение составляет головной мозг, гематоэнцефалический барьер которого препятствует прохождению пептидов в ткань мозга.

Выводы: 1. Повышенный уровень билирубина (особенно его прямой фракции) сыворотки крови свидетельствует о неблагоприятных последствий холестаза начиная уже со 2 суток. Максимальное содержание его отмечено на 5 сутки.

• 2.    Содержание ТСП в плазме крови как показателя эндогенной интоксикации после некоторого уменьшения на 2-5 сутки, возрастает к 10 суткам эксперимента.

• 3.    Содержание ТСП в мозге крыс во все периоды после перевязки общего жёлчного протока, за исключением 2 суток, понижено.