Энтеробиоценоз поросят с симптомокомплексом диареи

Массовые желудочно-кишечные заболевания поросят, проявляющиеся диарей-ным симптомокомплексом, – значительная проблема, причиняющая большой экономический ущерб крупным промышленным свиноводческим комплексам. Основная гибель поросят приходится на первые две-три недели жизни и 15–20 дней после отъема [1]. Смертность молодняка от заболеваний, проявляющихся диареей, варьирует от 41,3 до 81,9% [2]. От условий кормления и содержания животных зависит возникновение кишечных патологий, особую роль играют молозивный период и состояние здоровья свиноматки, а также воздействие патогенных агентов, циркулирующих в популяции животных [3].

Этиологическая структура возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят представлена условно-патогенными микроорганизмами, все чаще встречающимися в виде различных и весьма разнообразных ассоциаций. Повышение роли условнопатогенной микрофлоры обусловлено влиянием различных факторов, в результате она приобретает агрессивность и способность, проникая в организм животного, вызывать патологические изменения в органах и тканях [4; 5]. Наиболее частые сочлены энтеробиоценоза – представители энтеробактерий, энтерококков и стафилококков [6]. Они широко распространены в окружающей среде и представляют нормофлору тела животного [7].

Сложная этиологическая структура желудочно-кишечных болезней поросят с симптомокомплексом диареи, быстрое распространение и массовый характер затрудняют раннюю диагностику этой патологии [8; 9]. Для обеспечения высокого лечебного эффекта и предотвращения циркуляции в свиноводческих хозяйствах антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов необходимо не только своевременное выделение возбудителя и подтверждение его патогенности, но и установление спектра чувствительности к антибактериальным препаратам [10].

В связи с вышеизложенным цель исследования – изучение энтеробиоценоза желудочно-кишечного тракта поросят с симптомокомплексом диареи и определение чувствительности выделенной микрофлоры к антибактериальным препаратам.

Материалы и методы

Объектом исследования являлись поросята (n = 50) в возрасте от рождения до двух месяцев крупной белой породы и ландрас с диарейным симптомокомплексом. Материалом для исследований служили пробы фекалий, полученные стерильным тупфе-ром из прямой кишки. Пробы помещали в транспортную среду и в сумке-холодильнике доставляли в лабораторию.

Выделение и идентификацию изолированных культур микроорганизмов проводили в соответствии с методическими указаниями: «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных» (Минсельхоз России № 13-5-02/1043 2004 г.); «Методические указания по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями», (Минсельхозпрод России № 13-7-2/1759, 1999 г.) и «Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных» (Минсельхоз России № 13-7-2/2117, 2000 г.).

Vestnik of Omsk SAU, 2022, no. 2(46)                                                VETERINARY AND ZOOTECHNY

Серотипировали выделенные культуры E. coli согласно «Наставлению по применению агглютинирующих О-коли-сывороток» (1980 г.).

Патогенность выделенных культур микроорганизмов определяли при посеве на кровяной агар и постановке биопробы на лабораторных животных, которым внутрибрюшинно вводили 0,5 мл бактериальной суспензии в концентрации 0,5×109 м.т./мл. Культуру считали патогенной при гибели двух и более лабораторных животных в течение трех суток после заражения. Контрольным животным вводили 0,5 мл стерильного 0,9%-ного физиологического раствора, срок наблюдения – 5 сут.

Определение чувствительности выделенных микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам проводили диско-диффузионным методом с использованием агара Гивенталя-Ведьминой (АГВ) и стандартных бумажных дисков, пропитанных антимикробными препаратами, руководствуясь клиническими рекомендациями по определению чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (Москва, 2015) и в соответствии с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».

Результаты исследований

У поросят с симптомокомплексом диареи клинические признаки варьировали. У большинства больных животных (82%) температура была в пределах физиологической нормы (38,5–39,5°С). Отмечали усиление перистальтики кишечника, сопровождалось это частой дефекацией, фекалии были желтого или желтовато-белого цвета, жидкой консистенции с пузырьками газа или без них. У некоторых поросят (18%) регистрировали более тяжелое течение: угнетение, отказ от корма, повышение температуры (40,5– 41°С); фекалии желтого цвета, пенистые, с комочками свернувшегося молока.

В результате проведенных бактериологических исследований установлено: ассоциации микроорганизмов, представленные двумя, тремя видами, превалируют над монокультурой. Микробные ассоциации выделены из 38 проб (76%) фекалий, полученных от больных поросят. Всего выделено восемь разных сочетаний микроорганизмов. Так, ассоциация микроорганизмов Escherichia coli + Proteus vulgaris изолирована из 11 проб фекалий (28,9%), Escherichia coli + Enterobacter aerogenes – из 9 (23,7%), такие ассоциации, как Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis + Enterococcus fecalis и Klebsiella pneumoniae + Citrobacter freundii, выделены из четырех проб каждая (10,5%) и Escherichia coli + Enterococcus fecalis – из трех (7,9%). Реже всего изолировали сочетания, представленные тремя видами условно-патогенных микроорганизмов: Proteus mirabilis + Klebsiella pneumonia + Citrobacter freundii и Escherichia coli + Proteus vulgaris + Enterococcus fecalis 5,3% и 2,6% соответственно (табл. 1).

Таблица 1

Ассоциации микроорганизмов, выделенные из фекалий поросят с симптомокомплексом диареи

№ п/п	Ассоциация микроорганизмов	Количество изолированных ассоциаций микроорганизмов	Частота выделения, %
1	Escherichia coli + Proteus vulgaris	11	28,9
2	Escherichia coli + Enterobacter aerogenes	9	23,7
3	Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae	4	10,5
4	Proteus mirabilis + Enterococcus fecalis	4	10,5
5	Klebsiella pneumoniae + Citrobacter freundii	4	10,5
6	Escherichia coli + Enterococcus fecalis	3	7,9
7	Proteus mirabilis + Klebsiella pneumonia + Citrobacter freundii	2	5,3
8	Escherichia coli + Proteus vulgaris + Enterococcus fecalis	1	2,6

Vestnik of Omsk SAU, 2022, no. 2(46)

VETERINARY AND ZOOTECHNY

В монокультуре преобладала Escherichia coli среди других видов микроорганизмов, частота ее выделения – 41,7%. Кроме кишечной палочки, основные этиологические факторы диареи у поросят – Proteus vulgaris (25%), Klebsiella pneumoniae (25%) и Citrobacter freundii (8,3%) (табл. 2).

Таблица 2

Микроорганизмы, выделенные из фекалий поросят с симптомокомплексом диареи, в монокультуре

№ п/п	Микроорганизмы	Количество изолированных микроорганизмов	Частота выделения, %
1	Escherichia coli	5	41,7
2	Proteus vulgaris	3	25
3	Klebsiella pneumoniae	3	25
4	Citrobacter freundii	1	8,3

Анализируя полученные данные можно сделать вывод: в энтеробиоценозе желудочно-кишечного тракта поросят с симптомокомплексом диареи ведущая роль принадлежит кишечной палочке и протею как в монокультуре, так и в ассоциации с другими условно-патогенными микроорганизмами. В большинстве случаев от поросят выделяли ассоциации микроорганизмов, представленные двумя видами; три ассоциации включали по три вида микроорганизмов. Такие микроорганизмы, как Enterobacter aerogenes, Enterococcus fecalis и Proteus mirabilis, выделены у поросят реже остальных и только в виде ассоциаций с другими энтеробактериями (табл. 3).

Таблица 3

Энтеробиоценоз желудочно-кишечного тракта поросят с симптомокомплексом диареи

Вид микроорганизма	Кол-во выделенных культур	Частота выделения, %	Всего микроорганизмов
			в монокультуре		в ассоциации
			кол-во	%	кол-во	%
Escherichia coli	33	36,3	5	15,1	28	84,9
Proteus vulgaris	15	16,5	3	20,0	12	80,0
Klebsiella pneumoniae	13	14,3	3	23,0	10	67,0
Enterobacter aerogenes	9	9,9	–	–	9	100,0
Enterococcus fecalis	8	8,8	–	–	8	100,0
Citrobacter freundii	7	7,7	1	14,3	6	85,7
Proteus mirabilis	6	6,5	–	–	6	100,0
Всего	91	–	12	–	79

Энтеропатогенные культуры кишечной палочки серотипированы и по своей антигенной структуре представлены серовариантами: О26 (15 культур), О8 (11 культур) и О33 (7 культур).

Для изучения патогенных свойств отобраны семь культур микроорганизмов: Escherichia coli, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes, Enterococcus fecalis, Citrobacter freundii и Proteus mirabilis.

При патолого-анатомическом вскрытии трупов мышей, зараженных культурой E. coli, обнаружены кровоизлияния в подкожной клетчатке и кишечнике, увеличение печени и селезенки, острое расширение сердца, абсцессы в месте введения суспензии и в паренхиматозных органах.

У погибших лабораторных мышей, зараженных Proteus vulgaris и Proteus mirabilis, отмечены кровоизлияния в подкожной клетчатке и кишечнике, наличие крови в брюшной полости, увеличение селезенки, единичные абсцессы в кишечнике и почках.

Vestnik of Omsk SAU, 2022, no. 2(46) VETERINARY AND ZOOTECHNY

При вскрытии трупов мышей, зараженных культурой Klebsiella pneumoniae, в печени, легких и кишечнике обнаружены единичные абсцессы. Также отмечены расширение сердца, увеличение селезенки и дистрофия печени.

У мышей, зараженных Enterobacter aerogenes, при вскрытии выявлены кровоизлияния в подкожной клетчатке и под эпикардом, абсцессы в стенке кишечника, печени, в легких и селезенке.

При патолого-анатомическом вскрытии трупов мышей, зараженных культурой Enterococcus fecalis, обнаружены серозный перитонит, дистрофия печени, увеличение селезенки и почек.

У лабораторных животных, зараженных Citrobacter freundii, регистрировали кровоизлияния в кишечнике в месте введения суспензии, в стенке кишечника и печени – абсцессы.

Все изолированные культуры Escherichia coli, Enterobacter aerogenes и Klebsiella pneumoniae при посеве на кровяной агар вызывали гемолиз эритроцитов. Proteus vulgaris и Citrobacter freundii, выделенные в монокультуре, также обладали гемолитической активностью.

Определяли чувствительность изолированных микроорганизмов к антибактериальным препаратам, принадлежащим восьми различным фармакологическим группам: цефалоспорины (цефазолин), фторхинолоны (энрофлоксацин), нитрофураны (фуразо-лидон), аминогликозиды (стрептомицин), тетрациклины (доксициклин), сульфаниламиды (сульфадимезин), макролиды (тилозин) и препараты пенициллинового ряда (амоксициллин).

В результате проведенных исследований установлено: большинство (98,9%) выделенных культур энтеробактерий чувствительны к энрофлоксацину и цефазолину. Высокую активность показали и препараты пенициллинового ряда (амоксициллин) и нитрофураны (фуразолидон), чувствительность изолированных культур микроорганизмов к ним составила 72,4% и 78,2% соответственно.

Все изоляты (100%) Proteus vulgaris и Proteus mirabilis проявили устойчивость к тилозину, большинство выделенных энтерококков (69,9%) резистентны к тетрациклину, а Citrobacter freundii – к стрептомицину (71%). Также выявлена высокая устойчивость (80%) у большинства представителей семейства Enterobacteriacea к сульфадимезину.

Заключение

По проведенным исследованииям установлена ведущая роль энтеробактерий в энтеробиоценозе желудочно-кишечного тракта поросят с диарейным симптомокомплек-сом. Среди выделенных культур микроорганизмов преобладают Escherichia coli (О26, О8, О33) и Proteus vulgaris, как в монокультуре, так и в различных сочетаниях с другими условно-патогенными микроорганизмами. Кроме того, микробные ассоциации превалируют над монокультурами. Большинство изолированных микроорганизмов проявляли высокую чувствительность к антибактериальным препаратам из групп цефалоспоринов и фторхинолонов.