К вопросу антигенной идентичности полевых изолятов и эталонного штамма «52/70-М» вируса болезни Гамборо

Инфекционная бурсальная болезнь ( ИББ ) или болезнь Гамборо вызывается небольшим безоболочечным вирусом с двуспиральной РНК , относящимся к семейству Birnaviridae.

Хотя прошло более 40 лет с тех пор , как болезнь впервые была описана в 1962 году в США , она до сих пор вызывает серьезные экономические потери в птицеводческой отрасли всего мира .

В конце 80- х годов пошлого столетия в вакцинированных стадах птиц в США появились антигенные варианты , а в Европе и России - высоковирулентные штаммы вируса ИББ ( антигенно - сходные с « классическими » штаммами ) которые очень быстро распространились по всему миру . Инфекция с участием классических вирулентных штаммов и вариантных американских штаммов проявляется высокой заболеваемостью и обычно низкой смертностью , тогда как высоковирулентные штаммы вируса ИББ могут вызывать до 90% смертности у яичных кроссов птицы (2,8,9,15).

Сообщения многих авторов [4,5,6] указывают на антигенную неоднородность штаммов вируса ИББ , выделенных в России и других странах , с чем связывают неудачи применения существующих живых вакцин при профилактике заболевания .

Целью настоящей работы явилось изучение антигенных различий и родство между вновь выделенными изолятами и ранее известным штаммом возбудителя ИББ, имеющимся в нашей коллекции.

Материал и методы . В опытах использовали эталонный штамм вируса ИББ — «52/70- М », а также эпизоотические штаммы : № 1 — « Синявинский »; № 2 — « Бенедерский »; № 3 — « Дубовляны »; № 4 — « Таллинский »; № 5 — « Раздельнянский ». Штаммы вируса ИББ поддерживали на 11- дневных эмбрионах СПФ - кур и цыплятах восприимчивого возраста .

Антигенное родство штаммов вируса ИББ изучали в РДП путем титрования штаммоспецифических сывороток с каждым исследуемым антигеном , а также в опыте по перекрестному заражению исследуемыми штаммами цыплят , привитых образцами вакцины , полученными на основе указанных штаммов вируса ИББ . Для этого исследуемые штаммы вируса ИББ предварительно были освежены в соответствующей системе культивирования и после контроля на стерильность , биологическую активность и после инактивации димерэтиленимином ( ДЭИ ) использованы для получения опытных серий вакцины путем добавления к инактивированной суспензии каждого вируса в качестве адъюванта 3% геля ГОА до конечной концентрации 1,5%. Инактивацию вируса ИББ проводили димерэтиленимином ( ДЭИ ) [3]. Полноту инактивации проверяли методом 3- х « слепых » пассажей на куриных эмбрионах . РДП ставили по ранее разработанной нами методике (1). В качестве антигена использовали 10% ый гомогенат фабрициевых цыплят , зараженных в отдельности разными штаммами вируса ИББ . Образцы вакцин использовали при получении штаммоспецифических сывороток на СПФ - цыплятах .

Результаты и обсуждение . Данные , полученные в ходе этих экспериментов приведены в табл . №№ 1 и 2.

1. Перекрестная активность штаммоспецифических сывороток в РДП (log 2 ) с разными штаммами вируса ИББ

Антиген	Штаммоспецифическая сыворотка
	«52/70- М »	изолят № 1	изолят № 2	изолят № 3	изолят № 4	изолят № 5	контроль
«52/70- М »	3,6	4,4	3,6	3,5	3,6	3,8	-
изолят № 1	4,1	3,8	4,2	4,4	3,9	3,8	-
изолят № 2	3,8	4,0	4,6	3,8	4,4	4,3	-
изолят № 3	4,5	4,5	4,1	3,6	3,2	4,2	-
изолят № 4	3,8	4,3	4,2	3,5	3,9	4,4	-
изолят № 5	4,2	4,4	4,3	3,4	4,0	4,3	-
Кон троль	-		-	-	-	-

Результаты опыта показали , что эпизоотические и эталонный штаммы вируса , использованные в работе , обладают одинаковой преципитирующей активностью со всеми штаммоспецифическими сыворотками и образуют одинаковые линии преципитации ( табл . 1). Активность иммунных сывороток в перекрестной РДП была почти одинакова в отношении гомо – и гетерологичных антигенов , что свидетельствует о наличии общих вирусоспецифических антигенных детерминант .

Известно , что штаммы вируса ИББ имеют общий групповой антиген , который участвует в РДП , реакции иммунофлюоресценции и твердофазном иммуноферментном анализе (10,11,12,13,16,17, 18). В капсидных белках VP2 и V РЗ содержатся эпитопы , которые ответственны за групповую антигенность вируса ИББ (16).

Кроме общего группового антигена , вирус ИББ содержит антиген или антигены , ответственные за специфичность , связанные c определенным серотипом . Поэтому при серотипировании вируса ИББ используется реакция нейтрализации in vitro со специфической иммунной сывороткой к каждому серотипу или оценка их in vivo (14). С учетом изложенных данных , нами проведен опыт по изучению перекрестной устойчивости цыплят к исследуемым штаммам вируса ИББ ( табл . 2). Для этого были сформированы 7 групп , по 60 цыплят в каждой . Цыплятам в 1-5 группах внутримышечно вводили инактивированные антигены эпизоотических штаммов , в 6- й группе – штамм «52/70- М », после инактивации , в объеме 0,5 мл . 7- я группа птиц служила контролем . Протективную активность антигенов вируса ИББ оценивали на 28- е сут опыта серологически ( в РДП и ИФА ) и заражением по 10 цыплят из каждой группы разными штаммами вируса в дозе 10³ ИД 50 / мл .

2. Перекрестная устойчивость цыплят к различным штаммам вируса ИББ

Антиген	Штамм вируса ИББ , взятый для заражения
	52/70- М	изолят № 1	изолят № 2	изолят № 3	изолят № 4	изолят № 5
«52/70- М »	2/10	1 /10	0 /10	1/10	0/10	2/10
Изолят № 1	1/10	1/10	1/10	0/10	1/10	2/10
Изолят № 2	2/10	1/10	0/10	1/10	0/10	1/10
Изолят № 3	1/10	0/10	2/10	1/10	1/10	0/10
Изолят № 4	2/10	1/10	1/10	0/10	2/10	1/10
Изолят № 5	0/10	2/10	1/10	0/10	1/10	2/10
Контроль	7/10 (4)	10/10 (8)	9/10 (8)	10/10 (9)	9/10 (8)	8/10 (8)

Примечание : числитель — количество заболевших цыплят , знаменатель — количество зараженных цыплят , в скобках — количество павших цыплят .

Результаты выживаемости птиц после введения разрешающей дозы вируса ИББ приведены в таб . 2, из данных которой следует , что процент защищенных птиц по группам колеблется в пределах 80–100%, независимо от происхождения штамма заражаемого вируса . Данные опыта по оценке резистентности подопытных цыплят согласуются с серологическими исследованиями по выявлению специфических антител в сыворотке крови , взятой на 28- е сутки после введения антигенов . Уровень антител в РДП и ИФА составил 2,5–3,0 log ₂ и 1:3560 ÷ 1:4250, соответственно .

Из данных табл . 2 также следует , что эпизоотические штаммы , циркулирующие в птицехозяйствах стран СНГ , не имеют антигенных различий и обладают родством с известным штаммом вируса ИББ . Гибель цыплят в контрольной группе при заражении эпизоотическими штаммами была в 2-2,5 раза выше , чем в группе птиц , зараженных эталонным штаммом «52/70- М », что свидетельствует о высокой степени патогенности вновь выявленных изолятов по сравнению с ранее выделенным штаммом . Известно , что штамм «52/70» выделен у больных цыплят в Англии и описан A.S. Bygrave и J.T Faragher в 1970 г (7). При проведении данного опыта руководствовались литературными сведениями , согласно которым вирусы в инактивированном состоянии не создают перекрестную защиту даже в отношении штаммов , претерпевших незначительную антигенную изменчивость , и их используют для серотипирования вируса in vivo (16), что послужило дополнительным доводом в пользу высокой степени антигенного родства исследованных штаммов вируса ИББ . Существенное расхождение наших выводов об антигенной идентичности с имеющимися литературными данными об антигенной вариабельности возбудителя ИББ , по - видимому , связано с различием методов исследований и сопоставление штаммов , прошедших разное число пассажей и в разной системе их культивированя , что подтверждается данными отдельных зарубежных авторов [18].

Заключение . Результаты иммунологического анализа показывают , что вновь выделенные эпизоотические штаммы не имеют антигенных различий как между собой , так и с эталонным штаммом вируса ИББ .

Наиболее серьезную проблему в системе профилактических мероприятий против ИББ в промышленном птицеводстве представляет формирование иммунитета у молодняка птиц , полученных от вакцинированных кур - несушек . Наличие пассивных антител у них препятствует формированию поствакцинального иммунитета .

ЛИТЕРАТУРА: 1. Алиев А.С. Лабораторная диагностика инфекционного бурсита кур // Ветеринария. — 1990. — № 5. — С. 31–33. 2. Алиев А.С. Инфекционная бурсальная болезнь птиц (эпизоотология, этиология, диагностика и профилактика.: Автореф. дис. докт. вет. наук. — СПб., 1993. 3. Алиев А.С. Инактивирующее действие ДЭИ и формальдегида на вирус ИББ. / Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве: Сб. науч. трудов ВНИВИП. — СПб., 1996. 4. Бирман Б.Я. и др. Оценка эффективности живых вакцин против инфекционного бурсита (Болезни Гамборо) // Ветеринарная наука — производству. Минск: 1996. — Вып. 32. — С. 56–5. Борисов А.В. Профилактика бурсальной болезни птиц. // Уральские Нивы. — 1995. — № 4–6. — С. 23–26. 5. Щербакова Л.О. и др. Сравнительный анализ вариабельной области гена VP2 вируса инфекционной бурсальной болезни // Мол. Генетика,вирусология и микробиология. – 1998. -№1. – С.35 - 40. 6. Bygrave A.C. Faragher J.T.Mortality associated with Gumboro disease // Veter. Rec.,1970, – Vol. 86. -№ 25, – P. 758–759. 7. Brown M.D., et al. VP2 sequencis of European “very virulent” isolates of infections bursal disease virus are closely related to eash other but are distinct from those of “classical” strains.. // J. Gener. Virol. -1994, – Vol. -75, № 4. – P. 675–680. 8.Chettle, N.J. Comparison of virus neutralizing and precipitating antibodies to infectious bursal disease virus and their effect on susceptibility to challenge / N.J. Chettle, P.K. Eddy, P.J. Wyeth // Br. Vet. J. – 1985. – Vol. 141. -N 2. – P. 146-150. 9.Chettle N.J.et al. Outbreaks of virulent infections bursal disease in East Anglia/ // Veter. Rec, 1998, – Vol. . 42, p. 271-272. 10. Ismail, N.M. Immunogenicity of infectious bursal disease viruses in chickens / N.M. Ismail, Y.M. Saif // Avian Dis. – 1991. – Vol. 35. – №3.-P. 450-469. 11.Wood, G.W. Standardization of the quantitative agar gel precipitation test for antibodies to infectious bursal disease / G.W. Wood, J.C. Muskett, C.N. Hebert et al. // J. Biol. Stand. – 1979. – Vol. 7, N 2. – P. 89-96. 12. Wyeth, P.J. The use of inactivated infectious bursal disease oil emulsion vaccine in commercial broiler parent chickens / P.J. Wyeth, G.A. Cullen // Vet. Rec. – 1979. – Vol. 104, N 9. – P. 188-193.

К ВОПРОСУ АНТИГЕННОЙ ИДЕНТИЧНОСТИ ПОЛЕВЫХ ИЗОЛЯТОВ И ЭТАЛОННОГО ШТАММА «52/70- М » ВИРУСА БОЛЕЗНИ ГАМБОРО

Алиева А . К ., Алиев А . С ., Юсупова Г . Р . Резюме

По результатам иммунологического анализа вновь выделенных эпизоотических и эталонного штаммов вируса ИББ установлено , что они не имеют антигенных различий как между собой , так и с известным штаммом « 52/70- М » вируса ИББ .

ON THE ANTIGENIC IDENTITY OF FIELD ISOLATES AND REFERENCE STRAINS OF "52/70-M" GUMBORO DISEASE VIRUS

Alieva A.K., Aliev A.S., Yusupova G.R.