Клинические аспекты нарушений в гене ТР53 при диффузной В-крупноклеточной лимфоме

Введение. Снижение функции ТР53может быть вызвано нарушениями в структуре гена процессах транскрипции, стабильности мРНК посттрансляционных модификациях или взаимодействиях белка р53. В клетках с инактивацией TP53 отмечается повышенная генетическая нестабильность, которая способствует ускорению прогрессирования опухоли, ускользанию клеток от иммунологического надзора и формированию лекарственной резистентности.

Цель исследования. Изучение клинического значения соматических мутаций и метилиро-

Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ»

вания промотора гена TP53 в опухолевой ткани диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДВККЛ).

Материалы и методы . Были исследованы образцы ДНК пациентов с ДВККЛ (n = 74) : 35 мужчин и 39 женщин, средний возраст составил 52,8 ± 14,3 года. Подавляющее большинство больных имели III–IV стадии заболевания (91 %), две трети больных — неблагоприятный прогноз, согласно Международному прогностическому индексу (МПИ) [35]. Все пациенты получили 6–8 циклов R-CHOP и подобных протоколов лечения. Геномная ДНК была выделена из парафиновых блоков опухолевых лимфатических узлов и экстранодальных очагов поражения методом фенольно-хлороформной экстракции с применением гуанидина. Анализ кодирующей последовательности гена TP53 выполнялся методом прямого секвенирования по Сангеру. Оценка биологической значимости выявленных миссенс мутаций проводилась с применением программ SIFT, Mut_ass и PolyPhen-2 а интронных мутаций — с применением программы NetGene2. Статус метилирования промотора TP53 изучали с применением метилспецифической ПЦР.

Результаты . Среди миссенс мутаций преобладали (95 %) замены в областях гена, кодирующих ДНК-связывающий домен. В анализируемой выборке пациентов кодоны 275,155 272 и 212 были «горячими точками» мутаций

Санкт-Петербург 30-31 мая 2019 г.

в TP53 . Функционально значимыми были следующие типы мутаций: p. R213Х, p. A189Pfs, p. L130F, p. T155I, p. R196Q, p. G244S, p. V272E и p. A276V. Среди интронных мутаций также были обнаружены две функционально значимые замены (IVS6–36G > C и IVS5 + 43G > T). Метилирование промотора гена ТР53наблюда-лось лишь в нескольких проанализированных образцах (6,7 % случаев). Группа исследования была разделена на две подгруппы: с наличием ( TP53 mut) и отсутствием ( TP53 wt) функционально значимых мутаций в гене ТР53. Было показано, что TP53 mut статус коррелировал с B-симптомами (р = 0,016), спленомегалией (р = 0,044), опухолевым поражением костного мозга (р = 0,028), а также неблагоприятными группами прогноза по МПИ > 2 (р = 0,018). Пациенты с TP53 wt чаще постигали ремиссии (р = 0,066) и имели лучшие показатели общей выживаемости (р = 0,026) в сравнении с пациентами с TP53 mut (69,4 % против 41,7 %, соответственно). Анализ методом регрессии Кокса показал, что наличие экстранодальных очагов поражения опухолью, МПИ > 2 и TP53 mut являются независимыми предкторами общей выживаемости больных ДВККЛ группы исследования.

Выводы . В ходе исследования было показано, что мутационный статус гена ТР53 может быть ценным прогностическим биомаркером при ДВККЛ.