Комплексная лабораторная диагностика хеликобактериоза у свиней

Прошло уже более 30 лет с момента первых публикаций в зарубежных научных специализированных изданиях, где впервые описывался микроорганизм Campylobacter pyloridis. В них сообщалось о роли данного микроба в возникновении и патогенезе хронического гастрита и язвенной болезни желудка у человека и методах лечения. В 1989 году он был выделен в отдельный род и переименован на Helicobacter pylori. Сейчас внутри этого рода исследователи указывают около 30 видов бактерий.

С того времени появилось огромное число публикаций по хеликобактериозу людей, однако в отечественной литературе информации по этому вопросу у сельскохозяйственных животных практически не встречается. В одной из таких работ Скородумов Д.И. с соавторами (2010 г.) указывает, что роль хеликобактеров в этиологии желудочных поражений свиней до сих пор не ясна. Ряд зарубежных авторов указывают, что данная инфекция тесно связана с развитием язвы желудка или хронического гастрита у свиней.

В данной работе была поставлена цель провести комплексную лабораторную диагностику хеликобактериоза у свиней, выделить возбудителя и изучить его биологические свойства.

Материалы и методы. В качестве материала отбирали биоптаты антрального отдела желудка свиней в возрасте 3-4 лет в убойном цеху. Был проведен забой выбракованных свиноматок из основного стада в количестве 17 голов. Всего был отобран материал от 11 животных, биоптаты брали, строго соблюдая правила асептики. Для исследования отбирали биоматериал только от тех желудков, в которых при визуальном осмотре наблюдались отечность, гиперемия, разрыхление слизистой оболочки, эрозии и язвы в антральном, а иногда в фундальном отделе желудка. От каждого такого желудка было взято по три образца биоптата. Первый для первичной микроскопии мазков-отпечатков, второй для проведения уреазного теста и третий для посева на приготовленные питательные среды.

Результаты исследований. При микроскопии готовили мазки-отпечатки со слизистой антрального отдела желудка в первые 5 минут после убоя с соблюдением общепринятых правил. Мазок фиксировали спирт-эфиром, далее окрашивали по Граму. На фоне окрашенной слизи были обнаружены более интенсивно окрашенные изогнутые и спиралевидные грамотрицательные палочки диаметром от 0,2 до 0,8 мкм и длинною от 2 до 5 мкм.

Уреазную активность биоптата выявляли, используя Clo-test. Сразу же после изготовления мазков-отпечатков брался биоматериал из мест с максимально выраженной гиперемией и отеком, который помещали в пробирку с реагентами. Пробирку плотно закрывали и вели наблюдение в течение получаса (положительный результат – изменение окраски раствора мочевины с ярко-желтой на малиновую, отрицательный результат – цвет оставался ярко-желтым).

Для выделения микроорганизмов была изготовлена селективная питательная среда. К мясопептонному агару добавили 5 % крови барана (изготовлены кровяной и шоколадный МПА), с добавлением антибиотиков: ванкомицина в концентрации 10 мг/л, полимиксина В – 2500 МЕ/л, амфотерицина 5 мг/л. Посевы на питательную среду делали непосредственно в убойном цехе, а также использовали транспортную среду (20 % раствор глюкозы) и материал для исследования был доставлен в лабораторию в течении часа. Культивирование проводили при 37 0С в течение 78 часов в аэробных, анаэробных и микроаэрофильных условиях, используя анаэростат и газорегенераторные пакеты. Полученные результаты исследований представлены в таблице.

Результаты комплексных лабораторных исследований на обнаружение бактерий рода Helicobacter

Примечание: + положительная проба; - отрицательная проба

Результаты исследований показали, что во всех отобранных образцах биоптата, отобранных из желудков свиней с патоморфологическими признаками гастрита и язвами, обнаружены методом микроскопии мазков отпечатков характерные бактерии для рода Helicobacter. Так же все образцы дали положительную реакцию в Clo-тесте на обнаружение фермента уреазы. Как известно, фермент уреаза в желудке имеет бактериальное происхождение, что дает возможность использовать методы обнаружение его непосредственно в биоптатах. При обнаружении в Clo-тесте этого фермента есть полное основание утверждать о наличии хеликобактерий.

При культивировании на питательных средах в аэробных и анаэробных условиях роста бактерий не было. В микроарофильных условиях выросли колонии, причем наиболее оптимальные результаты были получены на шоколадном МПА.

На втором этапе исследования изучали характер роста на чашках со средами как невооруженным глазом, так и стереомикроскопом. На третьи сутки появились мелкие (диаметром 0,5-1,0 мкм) круглые, прозрачные, выпуклые, влажные колонии. В мазках из колоний при окраске по Граму обнаруживаются типичные извитые формы в виде С и S. Далее определяли подвижность выросшей культуры в препарате «раздавленная капля» при фазово-контрастной микроскопии с масляной иммерсией. Микроорганизмы были подвижны. При изучении свойств бактерии были оксидазо- и каталазоположительные. На среде Кристенсена выделенная культура вызывала изменение цвета с желтого на красный цвет. По морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам выделенные культуры относятся к бактериям рода Helicobacter.

Заключение. Проведенная комплексная лабораторная диагностика биоптатов желудка у свиней позволила выделить возбудителя хеликобактериоза. Во всех случаях материал был взят из язв, что косвенно подтверждает этиологическую роль бактерии рода Helicobacter в этих заболеваниях. Данные этого исследования дают дополнительную информацию о циркулировании бактерий рода Helicobacter среди свинопоголовья в хозяйствах.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Скородумов В.И. Бактерии рода Helicobacter у животных // Д.И. Скородумов, Ю.А. Ярикова, О.В. Карабанова // Ветеринария сельскохозяйственных животных, № 7, 2010, с. 34-37. 2. Иванов А.В. Хеликобактеры животных и их значение в патологии человека // А.В. Иванов, О.К. Поздеев, Ю.В. Валеева // Ветеринарный врач, 2010 № 6, с 17-21. 3. Джон Холт Определитель бактерий Берджи // Дж. Холт, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уилльямса // Москва «Мир» 1997, том 1, с 46-47. 4. В.А. Исаков Хеликобактериоз // М.: ИД Медпрактика-М, 2003, 412 с. 5. Лабутина Н.В. Этиологическая роль Helicobacter spp. в желудочно-кишечной патологии собак и кошек // Н.В. Лабутина, А.В. Чернов // Ветеринарный доктор № 3 2010, с 2-3. 6. Fox J.G. Local immune response in Helicobacter pylori infected cats and identification of H. pylori in saliva, gastric fluid and feces. / Fox J.G., Perkins S., Yan L., et al // Immunology, 1996, 88:400.

КОМПЛЕКСНАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗА У СВИНЕЙ

Госманов Р.Г., Нургалиев Ф.М., Нургалиев Р.М.,

Резюме

Проведенная комплексная лабораторная диагностика биоптатов желудка у свиней позволила выделить возбудителя хеликобактериоза. Данные этого исследования дают дополнительную информацию о циркулировании бактерий рода Helicobacter среди свинопоголовья в хозяйствах.

INTEGRATED LABORATORY DIAGNOSTICS PATHOGEN HELICOBACTER PYLORI INFECTION IN PIGS

Gosmanov R.G., Nurgaliyev F.M., Nurgaliyev R.M., Summary

Conducted comprehensive laboratory diagnosis of gastric biopsies in pigs it possible to identify the causative agent helikobakterioza. Data from this study provide additional information on the circulation of bacteria of the genus Helicobacter in pigs in farms.