Комплексная оценка молекулярно-генетических и цитогенетических маркеров прогноза у пациентов с первичным миелофиброзом



Полушкина Л. Б. 1, Мартынкевич И. С. 1, Шуваев В. А. 1, Мотыко Е. В. 1, Фоминых М. С. 1, Криволапов Ю. А. 2, Асауленко З. П. 2, Мартыненко Л. С. 1, Иванова М. П. 1, Цыбакова Н. Ю. 1, Волошин С. В. 1, Бессмельцев С. С. 1, Чечеткин А. В. 1

• ¹    ФГБУ Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА, Санкт-Петербург

• ²    ФГБОУВО Северо-Западный государственный медицинский университет имени И. И. Мечникова Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург

КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА МОЛЕКУЛЯРНО^ГЕНЕТИЧЕСКИХ И ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ПРОГНОЗА У ПАЦИЕНТОВ С ПЕРВИЧНЫМ МИЕЛОФИБРОЗОМ

Введение . Согласно сообщениям последних лет, перспективным инструментом прогнозирования при первичном миелофиброзе (ПМФ) служат данные молекулярно-генетического и цитогенетического анализа: тип/ отсутствие маркера клональности (МК), мутационный статус генов эпигенетической регуляции (ЭР) транскрипции, кариотип. Вариабельность сочетания повреждений генома во многом является причиной клинической и прогностической гетерогенности ПМФ. Поэтому оценивать вышеприведенные показатели необходимо комплексно с учетом их возможного взаимного влияния.

Цель. Определить прогностическую значимость маркеров клональности, мутаций генов эпигенетической регуляции, кариотипа и их комбинации для ОВ пациентов с ПМФ.

Материалы и методы. В исследование включены 110 пациентов с диагнозом ПМФ (38 (34,5 %) мужчины), медиана возраста 59 лет (16–82 лет). Медиана наблюдения 2,6 года (0,14–22,97 лет). У всех пациентов проводили определение JAK2 V617F-статуса (ПЦР-ПДРФ), при JAK2(–) детектировали мутации в 515 кодоне гена MPL (ПЦР-ПДРФ) и мутации 9 экзона гена CALR (секвенирование по Сенгеру). У 106 пациентов выполнен анализ генов ASXL1 , EZH2, IDH1/2 методом кривых плавления с последующим секвенированием. У 48/110 (43,6 %) больных проведено цитогенетическое исследование.

Результаты. МК обнаружены у 81,8 % пациентов: JAK2(+) — 50,0 %; CALR(+) — 25,5 % (14,5 % тип 1, 10,9 % — тип 2), 6,4 % — MPL(+) больных.У18,2 %МКневыявлены(TN –triple-negative). Мутации генов ЭР обнаружены в 20,8 % случаев: мутации нонсенс и сдвига рамки считывания гена ASXL1 (мутации преждевременной терминации — ASXL1term) — 8,5 %, сочетание ASXL1term и ASXL1mis (мис-сенс) — 3,8 %, ASXL1mis — 4,7 %, сочетание ASXL1term и EZH2–1,9 %, сочетание ASXL1term и IDH2–0,9 %, IDH1–0,9 %. У 27,1 % пациентов выявленнеблагоприятныйкариотип(+8,+21, +7, —7/7q-, —5/5q, перестройки 11q и 12р, моносомии, комплексный кариотип, а также del(6)(q15), add(6)(p25), del(X)(q22), t(X;7) (p21; q11)). По данным однопараметрического регрессионного анализа на ОВ оказывали влияние: мутации ASXL1term (отношение рисков (ОР) 2,9, p = 0,018), неблагоприятный кариотип (ОР 8,2, p < 0,001) и три-негативный статус (ОР 8,1, p < 0,001). Для мутаций в гене CALR значение р было пограничным: ОР 0,3, p = 0,052. ASXL1mis не оказывали влияния на ОВ (р = 0,378). По результатам многопараметрического регрессионного анализа, включавшего такие переменные, как TN-, CALR-, ASXL1term-статус и неблагоприятный кариотип, ключевое влияние на ОВ независимо друг от друга оказывали неблагоприятный кариотип (ОР = 7,4, р = 0,001) и наличие терминирующей мутации в гене ASXL1 (ОР = 2,8, р = 0,023). При оценке модели Кокса без учета кариотипа значимое влияние на ОВ оказывали TN- статус (ОР = 2,4, р = 0,050) и ASXL1term-статус (ОР = 3,3, р = 0,012), тогда как наличие мутаций в гене CALR теряло порог статистической значимости (ОР = 0,3, р = 0,075). Тем не менее данный фактор был значим (ОР = 0,2, р = 0,015), когда в качестве кова-риаты выступал только ASXL1term-статус, который также сохранял свою значимость в данной модели (ОР = 3,9, р = 0,004). В модели, включавшей TN- и ASXL1term-статус, оба параметра значимо влияли на выживаемость (ОР = 3,6, р = 0,003 и ОР = 2,5, р = 0,048 соответственно). Оценку значимости различий ОВ проводили в зависимости от CALR/ASXL1 и TN/ASXL1 статуса, а также в группах с различным вариантом кариотипа и ASXL1term-статусом. При анализе ОВ с учетом CALR/ ASXL1 статуса худшую выживаемость демонстрировали CALR(–)/ASXL1term пациенты (медиана 2,5 года, р = 0,021). Прослеживалась статистическая тенденция к улучшению выживаемости среди CALR(+)ASXL1wild-type (wt) (медиана не достигнута при времени наблюдения 10,1 года) пациентов по сравнению с CALR(–)ASXL1wt (медиана 13,5 года) (р = 0,124). Достоверных отличий по ОВ между CALR(+)ASXL1term и CALR(+)ASXL1wt, CALR(+)ASXL1term и CALR(–)ASXL1wt не выявлено. Медиана ОВ среди TN/ASXL1term пациентов составила 0,9 года, TN/ASXL1wt — 3,6 года, МК(+)/ASXL1wt — 13,8 лет, не достигнута в МК(+)/ASXL1term группе (при времени наблюдения 10,3 года) (р < 0,0001). Попарный анализ показал, что обнаружение ASXL1term достоверно снижает ОВ TN больных (р = 0,007). Общая выживаемость МК(+)ASXL1term пациентов была достоверно лучше в сравнении с TNASXL1wt больными (р = 0,044). Значимых отличий ОВ у МК(+) пациентов с различным ASXL1-статусом не выявлено. При комплексном учете данных анализа генов ЭР и кариотипа медиана ОВ ASXL1term пациентов с кариотипом низкого риска статистически значимо не отличалась от таковой у ASXL1wt пациентов с хромосомными аномалиями высокого риска (медиана 1,6 и 1,4 года, соответственно, р = 0,291). Статистически значимых отличий не было обнаружено и среди ASXL1term пациентов с кариотипами низкого и высокого риска (медиана ОВ 1,6 и 1,2 года, р = 0,610). Медиана ОВ ASXL1wt пациентов с кариотипом низкого риска составила 6,4 года (р = 0,0005).

Выводы. Наиболее высокая степень значимости различий отмечена при сравнении ОВ в группах,сформированных по комплексу характеристик TN/ASXL1 и кариотип/ ASXL1 . Наличие терминирующей мутации в гене ASXL1 существенно ухудшает выживаемость у больных без маркеров клональности. Выживаемость пациентов с наличием любого из параметров — кариотипа высокого риска или ASXL1term — достоверно хуже, чем у ASXL1wt пациентов с кариотипом низкого риска.