Комплексный анализ лекарственных препаратов, содержащих стрептокиназу, с использованием масс-спектрометрии

Продемонстрирована возможность использования масс-спектрометрии для комплексного анализа лекарственных препаратов, содержащих стрептокиназу. Определен состав белков в препаратах и содержание целевого белка - стрептокиназы. Идентификация и количественная оценка содержания стрептокиназы проводились по продуктам исчерпывающего триптического гидролиза с использованием MALDI-MS. Для количественной оценки в анализируемые пробы в качестве внутреннего стандарта добавлялись 18О-изотопомеры триптических пептидов стрептокиназы с известной концентрацией. Концентрация анализируемого белка рассчитывалась по соотношениям интенсивностей изотопных распределений аналита и меченого 18О внутреннего стандарта. Биологическая активность стрептокиназы оценивалась по ее способности активировать плазминоген в сыворотке крови человека. Активация плазминогена сопровождается появлением эстеразной активности, которая определялась по скорости гидролиза синтетического субстрата ТАМЕ. Образование продукта гидролиза ТА определялось с помощью ESI-MS в присутствии изотопномеченного ТА в качестве внутреннего стандарта. Все изотопомеры, использованные в качестве внутренних стандартов, были получены путем изотопного обмена карбоксилсодержаших продуктов (пептидов и тозиларгинина) в среде Н218О в присутствии ТФУ.