Композиция гепатопротекторных экстрактов и ее стресс-протекторные эффекты в эксперименте на мышах

Стресс является неспецифической реакцией на раздражитель. Данная реакция направлена на поддержание гомеостаза и адаптацию организма к жизнеугрожающим условиям, также стрессорная реакция направлена на рекрутирование резервов организма для реализации реакции «бей или беги» [1].

Механизмы стрессорных реакций индуцируются триггерной модуляцией коры больших полушарий, а также некоторых структур лимбической системы (амигдалы, гиппокампа, гипоталамуса, поясной извилины) [2-3].

Безусловно, стрессорная реакция сопровождается энергетической задолженностью у тех органных систем, которые не участвуют в сохранении жизнедеятельности. Описаны такие стереотипные последствия стресса как [4]:

• 1.    Инволюция тимуса

• 2.    Лимфопения

• 3.    Ульцерогенез

• 4.    Гипертрофия кортекса надпочечников

Мишенями стресса также являются [5]:

• 1.    Нервная система - персистирование стресса приводит к истощению нервной системы, снижению когнитивных способностей [1-2]

• 2.    Эндокринная система - контринсулярный эффект глюкокортикоидов и катехоламинов способствует гипергликемии и повышает риск развития инсулинорезистентности [3].

• 3.    Сердечно-сосудистая система - вазоконстрикторные и кардиотропные влияния катехоламинов повышают работу миокарда за счет постнагрузки (при повышении ОПСС) и положительных хроно-, ино-, батмо-, дромот-ропных эффектов [6].

Модификация стресса является важным терапевтическим аспектом в профилактике кардиоваскулярных патологий, а также в модификации нервно-психических нарушений [710].

Актуальность данного исследования объясняется перспективностью применения различных биологически активных добавок.

Цель исследования заключается в докладе о стресс-протекторных эффектов спектра биологически активных веществ.

Данное исследование является экспериментальным. Исследованы различные варианты БАВ и их комбинацию, а именно, их эффект в модификации индуцированного стресса.

В эксперименте изучали эффект экстрактов Silybum marianum, Angelica keiskei koidzumi, а также лиофилизата гипоталамического экстракта как стресс-протекторов, в варианте монотерапии, а также их применения в составе композиции.

Рис. 1. Механизмы развития стресса

Стресс фактор формировали за счет помещения контрольной и опытных групп мышей в сухожаровой шкаф на 10 минут, с температурой 55 ºС, в режиме 5 дней опыт, 2 дня пауза.

Исследование одобрено локальным этическим комитетом.

Контрольная группа состояла из 20 небеременных самок белых нелинейных мышей массой 110-180 г. Опытная группа состояла из 20 самок, белых нелинейных мышей. Всего брали четыре группы мышей:

• 1.    Группа контроля (N=20) – получали ксенобиотик

• 2.    Группа Silybum marianum 50-249,7 мг/кг (N=7)

• 3.    Группа Angelica keiskei koidzumi 50249,7 мг/кг (N=6)

• 4.    Группа композиции 50-249,7 мг/кг (Si-lybum marianum+Angelica keiskei koidzumi) (N=7).

Оцениваемые параметры:

Первичная конечная точка: смерть мышей

Вторичные конечные точки:

Кортизол, µg/dL

Ориентировочно-познавательный комплекс реакций, двигательная активность (Перемещение животных по секторам на 120 день, ко-личество/10 мин),

Исследовательское поведение (Вставание животных на задние лапы на 120 день, коли-чество/10 мин).

Для описания количественных данных использовались среднее значение и стандартное отклонение в формате «M ± S», если распределение соответствовало критериям нормального. Если же распределение было отличным от нормального (при тесте Колмогорова – Смирнова), данные представлялись в виде медианного значения («центр тяжести») с указанием интерквартильного размаха в виде Me [Q1, Q3].

На всех графиках для количественных переменных среднее арифметическое обозначено точкой, медиана представлена горизонтальным отрезком, внутриквартильный размах обозначен прямоугольником, минимальные и максимальные значения представлены вертикальными отрезками.

Сопоставления двух групп по количественным переменным проводились на основе непараметрического критерия Манна-Уитни.

Статистическая значимость различий групп для бинарных и номинальных шкал определялась при помощи метода Хи-квадрат Пирсона в случае независимых групп, и на основе критерия МакНеймера в случае зависимых групп.

Анализ динамики показателей для сопоставления двух периодов производился на основе непараметрического критерия Уилкоксо-на.

Уровень статистической значимости был зафиксирован с учетом поправки Бонферрони – менее 0,05/4 = 0,0125.

Статистическая обработка данных осуществлялась c помощью пакетов прикладных программ Statistica 10 и SAS JMP 11.

Таблица 1. Результаты наблюдений

Параметр		Silybum maria-num (N=7)	Angelica keiskei koidzumi (N=6)	Silybum maria-num+Angelica keiskei koidzumi (N=7)	Группа контроля (N=20)	p-value
Ориентировочнопознавательный комплекс реакций. Двигательная  ак тивность	Исходно	62,4 [55,23;69,2]	63,2 [56,55;68,7]	65,7 [56,4;69,5]	63,3 [56;68]	0,24
	После стрес-сорного фактора	16,3 [17,3;21,66]	15,7 [11,3;19,134]	29,2 [27,1;30,3]	11 [7,45;13,5]	0,0024
Кортизол, µg/dL	Исходно	11,95 [9,2;13,4]	12,43 [9,4;14,2]	14,29 [9,01;12,3]	13,2 [8,4;14,4]	0,87
	После стрес-сорного фактора	77,1 [65,2;82,2]	67,4 [50,2;78,34]	34,3 [27,1;45,2]	123,34 [88,4;154,3]	0,0014
Исследовательское поведение	Исходно	13,7 [11,4;16,4]	13,5 [10,34;17,4]	12,5 [10,34;16,34]	13,24 [9,3;14,2]	0,3
	После стрес-сорного фактора	8,25 [7,1;12,3]	8,73 [7,13;13,23]	12,42 [10,3;16,3]	8,23 [7,42;10,4]	0,0034
Смерти, случаев		2 (28,6)	3 (50%)	0 (0%)	12 (60%)	0,0004

Из таблицы 1 видно, что группы были в целом сопоставимы по моторной активности, познавательной деятельности и базальному уровню кортизола, что

Использование в моноварианте экстракта Silybum marianum показало позитивное влияние на комплекс ориентировочнопознавательных реакций и исследовательское поведение животных в условиях хронического стресса.

Но, не сопровождалось при этом достоверным увеличением жизни мышей (р>0,05).

Использование в моноварианте экстракта Angelica keiskei koidzumi для коррекции теплового стресса сопровождалось умеренным сохранением когнитивных функций у мышей на 120 сутки эксперимента, но сдвиги не были выраженными (р>0,05).

Коррекция нарушений исследовательски-ориентировочных реакций, возникающих при температурном стрессе, с помощью лиофилизата гипоталамического экстракта позитивно влияло на грызунов опытной группы (р<0,05).

Лучшую, выраженную сохранность когнитивных функций животных в эксперименте фиксировали у мышей, получавших композицию. Так среднее значение двигательной активности в группе, получавшей композицию, было достоверно больше (на 63% больше, при p<0,05), чем средняя величина в группах с монотерапией растительными экстрактами и лиофилизатом.

Животные, получавшие композицию на 120 день наблюдений, вставали на задние лапы, в среднем, на 76% чаще (p<0,05), чем животные, получавшие только один из растительных экстрактов или лиофилизат. Важно, что продолжительность жизни мышей, получавших композицию, была на 36% больше (p<0,05), чем у животных, получавших монотерапию. В сравнении с контрольной группой, мыши, получавшие композицию, жили на 56% дольше (p<0,05).

Таким образом, в хроническом экспери- менте, при создании температурного стресса опытные мыши, получавшие композицию, адаптировались, сохраняли поисковоориентировочные рефлексы значительно лучше, жили на 56% дольше, чем мыши контрольной группы и животные, получавшие только один из растительных экстрактов или лиофилизат.

Достоверные отличия между группами животных, получавших монотерапию, либо композицию, свидетельствуют о наличии взаимного усиления (синергетического эффекта) стресс-протекторной активности компонен- тов, входящих в состав композиции.

Достоверные отличия между группами животных, получавших монотерапию, либо композицию, свидетельствуют о наличии взаимного усиления (синергетического эффекта) стресс-протекторной активности компонен- тов, входящих в состав композиции.