Лабораторная диагностика хеликобактериоза норок

В условиях современного ведения пушного звероводства немаловажное значение имеет своевременная и точная диагностика инфекционных заболеваний. Большую роль играет проведение исследований этиологической структуры инфекционных заболеваний желудочнокишечного тракта у норок.

Полиэтиологичность факторов, обуславливающих нарушение функций желудочно-кишечного тракта у пушных зверей при относительном сходстве клинических признаков, является важнейшим моментом, осложняющим диагностику этой патологии. Наиболее известными и изученными заболеваниями с признаками поражения пищеварительной системы являются: вирусный энтерит норок, кишечная форма чумы плотоядных, пастереллез, сальмонеллез, алеутская болезнь норок, кормовые отравления, гепатодистрофия [3].

В настоящее время мало кто сомневается в том, что большинство гастродуоденальных язв у человека связаны с Helicobacter pylori. В 80 годах прошлого столетия австралийские ученые Барри Маршалл и Робин Уорен доказали этиологическую роль возбудителя Helicobacter pylori в возникновении желудочно-кишечных заболеваний (гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки) [1].

В противоположность тому, что имеются доказательства связи желудочнокишечных заболеваний у людей с Helicobacter , а так же установлено распространение этого возбудителя у животных, наличие связи между заболеваниями и бактериями рода Helicobacter у них пока остаётся неясной. Как указывает Васина И.В. (2012 г.) в своей работе диагностика хеликобактериоза в звероводческих хозяйствах не проводиться, а больные звери и падеж регистрируются под диагнозом других заболеваний.

В предыдущей нашей работе были получены данные свидетельствующие о циркуляции возбудителя Helicobacter pylori среди поголовья свиней в условиях хозяйств и среди собак обитающих на прифермской территории. Результаты свидетельствовали о необходимости дальнейшего изучения распространения бактерий рода Helicobacter у сельскохозяйственных и домашних животных, определением их роли в инфекционной патологии желудочнокишечных заболеваний, совершенствованием методов диагностики [2].

В данной работе была поставлена цель - провести комплексную лабораторную диагностику хеликобактериоза у норок и исключить схожие заболевания.

Материалы и методы. Объектами для исследования послужили щенки норок, подобранные по принципу пар аналогов. У подопытных норок были исключены сходные заболевания, вызывающие поражения желудочно-кишечного тракта. Животные были разделены на три группы: 1 группа – 10 голов клинически здоровых норок (контроль), убитые в возрасте 6 месяцев; 2 группа – 10 норок с клиническими признаками хеликобактериоза, убитые в возрасте 6 месяцев; 3 группа – 10 норок, павшие с признаками хеликобактериоза, возраст 3-4 месяца.

Для исследований от щенков норок после убоя или падежа отбирали по три образца биоптата желудка. Первый для первичной микроскопии мазков-отпечатков, второй для проведения уреазного теста и третий для посева на приготовленные питательные среды.

Для микроскопического исследования изготавливали мазки-отпечатки со слизистой желудка норок в первые 5 минут после убоя и не позднее 1 часа после падежа с соблюдением общепринятых правил. Мазок фиксировали метанолом, далее окрашивали по Граму.

Уреазную активность биоптата выявляли, используя Clo-test. Сразу же после изготовления мазков-отпечатков брался биоматериал из мест с максимально выраженной гиперемией и отеком, который помещали в пробирку с реагентами. Пробирку плотно закрывали и вели наблюдение в течение получаса (положительный результат – изменение окраски раствора мочевины с ярко-желтой на малиновую, отрицательный результат – цвет оставался ярко-желтым).

Для выделения бактерий рода Helicobacter использовали подобранную нами оптимальную среду в предыдущей работе (10 % кровяной МПА с добавлением антибиотиков). Культивирование проводили при 37 ⁰С в течение 5 суток в микроарофильных условиях, используя анаэростат и газогенераторные пакеты.

Результаты исследований. В процессе эпизоотологического обследования звероводческого хозяйства выяснили, что там регестрируются заболевания желудочно-кишечного тракта, характеризующиеся следующими клиническими признаками: у норок снижался аппетит, наблюдался отказ от корма; зверьки становились малоподвижны, лежали забившись в угол; у некоторых наблюдалась рвота (в основном у норок этот признак является симптомом язвенного процесса); появлялась жажда, судороги, нервные припадки, приводящие к смерти; видимые слизистые у некоторых зверьков были слегка желтушные; волосяной покров терял блеск, становился взъерошенным; чаще всего кал был серого цвета, мажущийся. Наиболее широко и остро болезнь протекала в весенне-летний период. Болели как взрослые, так и щенки, но в основном с летальным исходом заболевание регистрировалось у щенков.

При патологоанатомическом исследовании у павших норок (3 группа) отмечали явления гастрита и язвы диаметром 3-10 мм в пилорической части желудка, его поверхность слизистой выглядела покрытой извилинами, иногда ткань была лизирована.

С целью выявления хеликобактерий исследовали мазки-отпечатки со слизистой желудка норок. В изготовленных препаратах обнаруживали изогнутые и спиралевидные грамотрицательные палочки диаметром от 0,2 до 0,8 мкм и длинною от 2 до 5 мкм.

После приготовления мазка-отпечатка биоптат использовали для биохимического метода выявления бактерий рода

Helicobacter. Выявляли уреазную активность с помощью специально разработанного Clo-теста. Эта методика считается весьма специфичной и чувствительной. При обнаружении фермена уреазы есть полное основание утверждать о наличии хеликобактерий.

Далее биоптат использовали для бактериологического посева. Каждый образец растирали в ступке, добавляя 20 % раствор глюкозы, полученную эмульсию использовали для посева на кровяной МПА. Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Результаты лабораторной диагностики хеликобактериоза норок

№ группы норок	% выявления бактерий рода Helicobacter
	микроскопия мазков отпечатков	уреазная проба	выделено культур на питательной среде
1 группа (контрольная)	20	20	0
2 группа (заболевшие)	100	80	60
3 группа (павшие)	70	80	20

Как видно из таблицы, во всех группах на фоне окрашенной слизи в мазках-отпечатках были обнаружены характерные для бактерий рода Helicobacter микробы. Однако в 1 группе было всего лишь 20 % случаев обнаружения характерных микробов, тогда как в 2 группе – 100 % случаев. Биохимический метод выявления бактерий рода Helicobacter показал положительную реакцию в 1 группе в 20 % случаев, в 2 группе - 80 % и 3 группе - 80 %. Выделить бактерий рода Helicobacter удалось во 2 группе в 60 % случаев, в 3 группе – 20 %, в 1 группе – 0 %.

При постановке диагноза на хеликобактериоз норок провели дифференциальную диагностику в целях исключить другие инфекционные заболевания с поражением желудочнокишечного тракта и кормовые отравления.

Кормовые отравления были исключены по результатам токсикологического анализа кормов в лаборатории.

С целью дифференциальной диагностики хеликобактериоза норок от других заболеваний, протекающих с схожими признаками поражения желудочно-кишечного тракта, были исключены алеутская болезнь норок, чума плотоядных, вирусный энтерит, колибактериоз, сальмонеллез, пастереллез. Для этого был использован биоматериал от 2 и 3 групп норок, который исследовали согласно методическим наставлениям, утвержденным Главным управлением ветеринарии для каждой из перечисленных инфекций.

Заключение. Диагноз на хеликобактериоз возможно поставить на основании клинических признаков, патологоанатомических изменений, эпизоотологических данных и лабораторных исследований. В лаборатории необходимо исследовать только материал от животных в состоянии агонии или свежий труп, учитывая слабую устойчивость возбудителя во внешней среде. В наших исследованиях во всех случаях от больных животных мы обнаруживали характерные микробы для бактерии рода Helicobacter . Были проведены дифференциальнодиагностические исследования, которые исключили другие заболевания со схожей этиологией, что подтверждает этиологическую роль бактерии рода

Helicobacter в этом заболевании.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Иванов, А.В. Хеликобактеры животных и их значений в патологии человека / А.В. Иванов, О.К. Поздеев, Ю.В. Валеева // Ветеринарный врач. – 2010. – № 6 – С. 17-21. 2. Бактерии рода Helicobacter у животных / Ф.М. Нургалиев [и др.] // Учёные записки КГАВМ. – 2012. – Т 211. – С. 121-125. 3. Болезнь старая – возбудитель новый (хеликобактериоз) / А.Н. Семикрасова [и др.] // Кролиководство и звероводство. – 2007. – № 4. – С. 28-29. 4. Васина, И.В. Хеликобактериоз – актуальная проблема для норководства / И.В. Васина, О.И. Тихомирова // Ветеринарная патология. – 2010. – №2. – С. 51-53.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗА НОРОК

Нургалиев Ф.М., Госманов Р.Г., Нургалиев Р.М.

Резюме

Лабораторную диагностику хеликобактериоза норок проводили микроскопическими, бактериологическими, биохимическими методами. В наших исследованиях от норок с патологией функции пищеварения мы обнаруживали бактерии рода Helicobacter . Были проведены дифференциально-диагностические исследования, которые исключили другие заболевания с схожей этиологией, что подтверждает этиологическую роль бактерии рода Helicobacter в этом заболевании.

LABORATORY DIAGNOSIS MINK HELICOBACTER INFECTION

Nurgaliyev F.M., Gosmanov R.G. Nurgaliyev R.M.