Лабораторная диагностика ВИЧ, ВГВ, ВГС - трансфузионные риски

Введение. Тестирование донорской крови и ее компонентов на маркеры ВИЧ,вирусов гепатита В и С (ВГВ, ВГС) и некоторых других патогенов лежит в основе инфекционной безопасности. Использование современных методов диагностики, высокочувствительных тест-систем позволяет до минимума свести вероятность инфицирования ВИЧ, ВГВ, ВГС. Так, например, в России риск передачи ВИЧ при переливании крови составляет 1:420~ < 000. Вместе с тем, существует целый ряд проблем которые надо учитывать при тестировании донорской крови и ее компонентов и,соот-ветственно, принимать адекватные меры, по-

зволяющие избежать или свести к минимуму риски инфицирования реципиентов.

Цель . Определить возможные трансфузионные риски передачи возбудителей ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов В, С и пути их минимизации.

Материалы и методы. 965 образцов сы-воротки/плазмы крови от пациентов с ВИЧ/ СПИД из разных регионов страны, 1157 проб сыворотки/плазмы крови от пациентов с ВГС, 738 образцов сыворотки/плазмы крови от пациентов с хронической формой вирусного гепатита В. Выделение вирусной РНК/ДНК из образцов сыворотки/плазмы крови выполняли с использованием «Комплекта реагентов для выделения НК»,производства ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск, Россия и «Комплекта реагентов для выделения РНК/ДНК из клинического материала» «РИБО-сорб», «РНК-преп», производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия. Вирусную нагрузку определяли с использованием тест-систем «АмплиСенс® HBV–Монитор-FL», «ИнтерЛабСервис», г. Москва и «РеалБест РНК/ДНК ВИЧ, ВГС, ВГВ (количественный)», производства ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск. Секвенирующую ПЦР проводили по участкам генов gag-pol для ВИЧ, coore/E1 — ВГС, S и Р — ВГВ. Анализ электрофореграмм и сборка последовательностей фрагментов ДНК осуществлялись с помощью программного обеспечения Sequencing Analysis Software™ (Applied Biosystems®) и Geneious® v8 (Biomatters Ltd.). Множественное выравнивание нуклеотидных последовательностей проводили с помощью алгоритма ClustalW. Поиск генетически близких референсных сиквен-сов ВГВ осуществлялся с помощью программы BLAST. Филогенетические деревья строились с применением алгоритма ML (maximum likelihood) в программах PHYML (Phylogenetic maximum likelihood) и GARLI (Genetic Algorithm for Rapid Likelihood Inference), с моделью замены нуклеотидов GTR+I+G (I – proportion of invariable sites, G — Gamma shape parameter). Оптимизация топологии дерева — Best of NNIs and SPRs. Для расчета статистической достоверности кластеров использовался тест SH-aLRT. Достоверными считались кластеры филогенетического дерева,корневая ветвь которых имела значение ≥0,9. Определение генотипов/ подгенотипов и рекомбинантных форм ВИЧ, ВГВ, ВГС осуществлялось методом филогенетического анализа с использованием референсных сиквенсов для генотипирования ВИЧ,ВГВ, ВГС, взятых из GeneBank, а также с помощью программ для автоматического генотипирования: jpHMM (jumping profile Hidden Markov Model), REGA ВГВ Subtyping Tool, geno2pheno, HBV/Grade.

Результаты . Для тестирования донорской крови и ее продуктов используются и должны применяться самые передовые технологические подходы, позволяющие свести до минимума возможность передачи вирусов реци-пиентам.Однако особенности биологии ВИЧ, ВГВ, ВГС, связанные с репликативным циклом, появлением новых вариантов и мутантных форм вирусов и т. д., могут привести к пропускам инфицированных образцов. Появление новых мутантных вариантов вирусов может привести к несоответствию олигонуклеотидов, используемых в NAT/ПЦР тест-системах, а моноклональные антитела могут не обнаруживать антиген мутантного вируса или рекомбинантные антигены/пептиды могут не выявить антивирусные антителамеры (WHO Guidelines on Estimation of Residual Risk of HIV, HBV or HCV Infections VIA Cellular Blood Components and Plasma, WHO 2016). Например, как показывают наши исследования, в Республике Беларусь доминируют А6 подподтип ВИЧ, D подгенотип вируса гепатита В, а большая часть зарубежных тест-систем приготовлены на основе В подтипа ВИЧ и А2 подгенотипа ВГВ. Это относится и к ПЦР и ИХЛ тест-системам. С другой стороны, мутации в геномах вирусов часто происходят в тех регионах, к которым готовятся пары праймеров для ПЦР, и это также может привести к пропускам инфицированных образцов,по-явлению мутантных вирусов, ускользающих от действия вакцины при гепатите В.

Заключение . Таким образом, важно постоянно изучать качественные характеристики скрининговых тест-систем и выявлять потенциальные причины ложных результатов теста, проводить входной и выборочный контроли качества, проводить внутрений и внешний контроли качества работы лабораторий.