Механизм развития генитального пролапса после гистерэктомии у женщин Узбекской популяции

Введение. В гинекологической практике наиболее часто диагностируется патология тазового дна - пролапс гениталий. До сих пор нет единого мнения об этиологии, патогенезе опущения органов малого таза [1,4,10].

Появившиеся в последнее время сообщения о пролапсе гениталий у нерожавших женщин, а также у женщин после кесарева сечения, свидетельствует о конституциональном факторе и генетической предрасположенности в развитии данной патологии. В связи с этим, необходимо оценка факторов риска, а также доклинических признаков генитального пролапса у женщин как детородного, так и перименопаузального возраста. Для данного контингента женщин выбор оптимальной тактики лечения основан на определении патогенетических факторов заболевания.

В научных изданиях имеются ряд работ по исследованию экспрессии генов в тканях тазового дна при пролапсах. Имеются данные о том, что причиной развития пролапса гениталий у женщин молодого возраста в большинстве случаев являются наследственные заболевания соединительной ткани. Достаточно изучена роль гена ERa и ERP, а также их рецепторов в развитии пролапса гениталий [2,4,5,9].

Провоспалительный цитокин интерлейкин-17 (ИЛ-17) является Т-клсточным полипептидом, который секретируется в основном субпопуляцией CD4+ Т-хелперов (ИЛ 17-клетками), а также ЕК-клетками, нейтрофилами, макрофагами, дендритными, плазматическими и тучными клетками. ИЛ-17 впервые был описан в 1953 г., а как уникальная Т-хелперная клеточная линия идентифицирован в 2005 г. двумя группами авторов [2,3,4,6].

Основными мишенями ИЛ-17 являются лейкоциты, эпителиальные и эндотелиальные клетки, а также фибробласты, на цитоплазматической мембране которых имеются специфические к нему рецепторы (ИЛ-17Р), включающие также другие рецепторы семейства ИЛ-17 (ИЛ-17А, ИЛ-17В, ИЛ-17С, и др. [3,7,8,11].

В настоящее время ИЛ-17 считают одним из важнейших регуляторов естественного и адаптивного иммунитета в организме, особенно проявляющегося при различных воспалительных заболеваниях и аутоиммунных нозологиях, включающих сахарный диабет, а также онкологические заболевания. Несмотря на многочисленные молекулярно-генетические исследования, гена ИЛ 17 в патогенезе генитального пролапса до сих не нашли должного внимания в литературе.

Целью исследования. Изучить роль полиморфного варианта С/G гена ИЛ 17 провоспалительного цитокина в патогенезе генитального пролапса.

Методы исследования. Нами обследовано 121 женщин в возрасте от 26 до 64 лет. Среди 121 пациенток основную группу составили -91 (75,2%) женщин с ГНН1 Э, а контрольную -30 здоровых женщин без ГП (рис 1).

Рисунок 1. Возрастные аспекты обследуемых женщин (абс).

Молекулярно-генетическое обследование биоматериалов (ДНК) выполняли на базе ГУ РСНПМЦАГ. Объектом и предметом исследования явились образцы ДНК 121 женщин, ген ИЛ23. Образцы ДНК выделяли из лимфоцитов периферической крови в соответствии с модифицированной методикой. Концентрация и чистота выделенной ДНК оценивались при измерении оптической плотности ДНК-содержащих растворов при длине волны 260 и 280 нм против ТЕ на спектрофотометре NanoDrop 2000 (США).

Генотипирование полиморфизма гена ИЛ 17 проводили на ПИР амплификаторе в реальном времени Rotor Gene 6000 Модель 65Н0-100 (Австралия), с использованием тест-системы компании «Синтол» Кат. №-NP_555_100_RG (Россия), по инструкции производителя. Статистический анализ результатов проведен с использованием пакета статистических программ «OpenEpi 2009, Version 2.3». Частоту вариантов аллелей и генотипов (^вычисляли по фopмyлe:f=n/2N и f=n/N.

Результаты исследования. Результаты молекулярно-генетических исследований С/G гена ИЛ 17 провоспалительного цитокина у обследованных пациенток представлены в таблице 1.

Таблица 1

Частота распределения аллельных вариантов и полиморфизма гена (rs 612242) гена ИЛ-17 у женщин с ГППГЭ и контрольной здоровой группы женщин N -число обследованных пациентов; *п - число исследованных аллели; * - показатель достоверности по отношению к контрольной группы (Р<0,05)

Результаты молекулярно-генетических исследований гена (rs 612242) С/G гена

№	Группа	Частота аллелей				Частота распределения генотипов
		С		G		С/С		C/G		G/G
		*п	О/ /О	*п	О/ /О	п	О/ /О	п	О/ /О	п	О/ /О
1.	Основная группа п=91(182) '	91	50*	91	50*	0		91	100*	0	0
2	Контрольная группа п=30 (60)	56	93,3	4	6,6	27	90	2	6,6	1	3.3

ИЛ-17 показали, что функциональный аллель С в основной группе женщин с ГППГЭ выявлялся в 50% случаев (91/182), а в контрольной группе женщин без ГПП1Э встречался - в 93,3% случаев ( 56/60), что в 1,8 раз превышал показателей основной группы (х²=3 5,5; р<0,0009; OR=0,07; 95%С1 0,02-0,21). Мутантный аллель «G» выявлялся также в 50% случаев в основной группе женщин с ГП (91/182), тогда как в контрольной группе в 6,6% случаев (4/60), что в 11,4 раза было ниже по сравнению с основной группой. (х²=35,53; р<0,0009; OR=14,0; 95%С14,8 -40,2); (таблица 1).

Нами также проанализированы ассоциации полиморфизма генотипов гена ИЛ17. Так, анализ полиморфизма генотипов (rs612242) С/G гена ИЛ-17 показал, что функциональный генотип С/С гена ИЛ-17 в контрольной группе здоровых женщин выявлялся в 90% случаях ( 27/30), тогда как в основной группе женщин с Г1П11 Э в наших случаях не определялся ( /2=110,5; р<0 ; OR=0; 95%С1 0,0-0,01).

Интересным оказался тот факт, что гетерозиготный вариант С/G гена ИЛ-17 в основной группе определялся у всех женщин с Г1П11 Э , что составило 100% (91/182) случаев, тогда как в контрольной группе - у 2 из 30, что составило 6,6% случаев, что 15,2 раза было ниже по сравнению с основной группой. (%2=110,5; р<0; OR=2086,2; 95%С1 97,3 -44734,03);. Полученные данные имели статистически достоверный характер (Р <0,05).

Статистический анализ показал значимости данного различия в частоте выявляемости гетерозиготного генотипа. Тогда как гомозиготный вариант G/G генотипа ассоциации полиморфизма (rs 612242) С/G гена ИЛ-17 определялся у 1 женщины контрольной группы, что составило 3,3% (1/30), а у женщин основной группы данный генотип не определялся. (х2=И0,5; р<0; OR=0,11 95%С1 0,00-2,71) (таблица 2).

Таблица 2

Показатели различия в частоте встречаемости аллелей и генотипов полиморфизма rs612242 С/G гена ИЛ-17 в основной и контрольной группах

Аллели и генотипы	Основная группа	Контрольная группа	Статистическое различие
Аллель С	91	56	%2=35,53; р<0,0009; OR=14,0; 95%С1 4,8 -40,2
Аллель G	91	4
Генотип С/С	0	27	Х2=1 Ю,5; р<0 ; OR=0; 95%С1 0,0-0,01
Генотип C/G	91	2	у2=110,5; р<0; OR=2086,2; 95%С1 97,3 -44734,03
Генотип G/G	0	1	Х2=1 Ю,5; р<0; OR=0,11 95%С1 0,002,71

Полученные данные свидетельствует о том, что носительство неблагоприятного аллеля G (rs612242) гена ИЛ-17 может явиться диагностическим маркером риска развития к формированию генитального пролапса после гистерэктомии, повышающей ее риск в 14 раза (OR=14,0).

Результаты молекулярно-генетических анализов было проанализирована в зависимости от сопутствующей патологии женщин с ГП. (рис.2).

Сопоставление полученных результатов с сопутствующей патологией у женщин с ГП показало, что у них наиболее часто диагностировали инфекции мочеполового тракта (хронический пиелонефрит, цистит) - 39,5%, метаболический синдром (ожирение) - 33,3%, анемию - 29,6% и варикозная болезнь н/к - в 22,2% соответственно.

На наш взгляд, сопутствующая патология у женщин с ГП играет важную роль в клиническом течения заболеваемости. Дисбаланс в иммунной системе в выработке провоспалительного цитокина обусловлено хроническим воспалительным заболеваниям, обусловленной условно-патогенными микроорганизмами на фоне метаболического синдрома, в частности при ожирения.

Анализ полученных результатов свидетельствует о значимую связи неблагоприятного вариантного аллеля «О» полиморфизма (rs612242) гена ИЛ-17, способствующий к замене С на G в аминокислотной последовательности, с развитием генитального пролапса на фоне инфекционно-воспалительного процесса урогенитальной системы и метаболического синдрома. Установлено, что высокий риск развития генитального пролапса после гистерэктомии у женщин, и в случае наличия в геноме вариантного аллеля G полиморфизма увеличен в 14 раз (OR=14).

Следует отметить, что гетерозиготный генотип С/G полиморфизма rs 612242 гена ИЛ-17 является генетической детерминантой, являющиеся повышенным фактором риска предрасположенности к развитию Г11111 Э, повышающей ее риск в 2086,2 раз (OR=2086,2). (Р <0,05).

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что с носительством неблагоприятного аллеля G гена ИЛ-17 риск развития ГППГЭ может наблюдаться у женщин с метаболическим синдромом (ожирение) и заболеванием мочеполовой системы, что требует пристального внимания диспансерного учета в кабинетах женщин в первичном здравоохранения. Также представляет важное значение заболевание сосудистой системы, эндокринопатия, заболевания крови, которые являются провоцирующими факторами, способствующие развитию ГППГЭ.

Таблица 3

Ожидаемая и наблюдаемая частота распределения генотипов по РХВ полиморфизма (rs612242) гена ИЛ-17 в основной группе женщин с ГППГЭ:

Генотипы	частота генотипов		х2	Р
	наблюдаемая	ожидаемая
С/С	0	60,6	0.250	0
C/G	100,0	34,5	0.500
G/G	0	4,9	0.250
Всего	100,00	100,00	60,78

Нами проанализирована оценка выявляемости ожидаемой и наблюдаемой частоты генотипов изучаемых полиморфных генов, потенциально ассоциированных с развитием и патогенезом заболеваний в соответствии распределения частот равновесию Харди-Вайнберга (ХВ) (таблица 3).

Как следует из таблицы, показатели частоты распределения генотипов по РХВ полиморфизма rs612242 С/G гена ИЛ-17 в основной группе женщин с ГП показали наблюдаемую частоту выявляемости благоприятных генотипов С/С - в 0 %, наблюдаемые гетерозиготных генотипов C/G - 100% и мутантных гомозиготных генотипов - G/G-0% случаев соответственно, тогда как ожидаемая частота благоприятных генотипов увеличилась - в 60,6% , а гетерозиготные генотипы снизились ь в 2,9 раз и составило-34,5% случаев и ожидаемые гомозиготные мутантные генотипы G/G составили - 4,9% случаев соответственно. Полученные результаты имеют статистически достоверный характер (Р <0,05).

Результаты исследования проанализированы в группе контрольных пациенток без ГППГЭ (таблица 4.). Тогда как в группе контроле, наблюдаемая частота функциональных генотипов С/С регистрировалось в 90%, а ожидаемая - 59,4%, гетерозиготный вариант С/G гена ИЛ-17 наблюдалось - в 6,7% случаев, а ожидаемая - в 35,3% случаев, что в 5,3 раза повышалось по сравнению с показателями с наблюдаемыми генотипами, (Р <0,05).

Таблица 4

Ожидаемая и наблюдаемая частота распределения генотипов по РХВ полиморфизма rs612242 гена ИЛ-17 в контрольной группе женщин без ГППГЭ:

Генотипы	частота генотипов		х2	Р
	наблюдаемая	ожидаемая
C/C	90,0	59,4	0,871	0,19
C/G	6,7	35,3	0,124
G/G	3,3	5,3	0,004
Всего	100,00	100,00	1,69

Тогда как неблагоприятный генотип G/G в наблюдаемой частоты составил -3,3%, а ожидаемая частота составило - 5,3% случаев. Полученные данные имеют важное значение в прогнозирование риска развития акушерских осложнений, в частности генитального пролапса, (таблица 4).

Сравнительный анализ ожидаемой и наблюдаемой частот генотипов данного полиморфизма выявлено статистически значимого отклонения показателей (Р<0.05) во всех исследуемых группах. Данный факт указывает на соответствие наблюдаемой доли генотипов в изучаемых выборках равновесию Харди-Вайнберга.

Таким образом, аллель G и гетеро/гомозиготные генотипы С/G полиморфизма гена ИЛ-17 являются значимыми маркерами повышенного риска развития ГППГЭ у женщин трудоспособного возраста в узбекской популяции. (Р<0.05) (%²=110,5; р<0; OR=2086,2; 95%С1 97,3 -44734,03). Аллель С и функционально благоприятный генотип С/С являются достоверными протективными маркерами в отношении развития патологии (х²=35,53; р<0,0009; OR=0,07; 95%С1 0,02 -0,21; %²=35,53; р<0,0009; OR=14,0; 95%С14,8 -40,2).

Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что у женщин с носительством аллельного варианта G и гетерозиготного С/ G гена ИЛ-17 имеется риск формирования генитального пролапса на фоне инфекции мочеполового тракта и метаболического синдпрома.

Заключение. Таким образом, результаты опубликованных в литературе и проведенных нами собственных исследований свидетельствуют о том, что провоспалительный цитокин IL-17 играет важную роль в развитии ГП у женщин узбекской популяции. ИЛ-17 - представляет мембранный гликопротеин, являющиеся главным агентом, индуцирует созревание гематопоэтические предшественники. Его рецептор и интерлейкин играют важную роль во многих воспалительных и аутоиммунных заболеваниях, что было нами определено в соматических патологиях предшествующих генитальный пролапс.