Метод иммуногистохимии в оценке состояния паренхимы и стромы костного мозга и лимфатических узлов при хроническом лимфолейкозе

В настоящее время диагностика лимфопролиферативных заболеваний, включая хронический лимфолейкоз (ХЛЛ), невозможна без иммуногистохимического (ИГХ) исследования биопсийного материала костного мозга и лимфатических узлов. Одновременно для оценки состояния малигнизированного лимфопоэза и установления роли стромальных структур в этом процессе актуальным является изучение стромальных образований непосредственно регулирующих развитие клеток-предшественниц.

Целью исследования являлось изучение особенностей опухолевой инфильтрации паренхимы костного мозга и лимфатических узлов больных ХЛЛ с характеристикой перестроек стромальных структур кроветворного и лимфоидного микроокружения, участвующих в регуляции развития лимфоидных клеток.

Материалом для исследования послужили полученные до начала терапии трепанобиоптаты подвздошной кости 79 больных ХЛЛ в возрасте 49-73 лет и биопсии лимфатических узлов 57 больных той же возрастной группы. Контрольную группу составили фрагменты подвздошной кости 30 здоровых лиц 50-70 лет и биоптаты лимфатических узлов 20 лиц с неопухолевой реактивной неспецифической лимфаденопатией.

Применялись гистологические, гистохимические, морфометрические и ИГХ методы исследования. В работе использовали антитела фирмы DAKO: 1) для оценки степени опухолевой инфильтрации — CD 20, CD 79а, CD 5, CD 10, CD 23, Cyclin DI; 2) для оценки стромальных структур — CD 34 Class II, Anti-FDC CAN.42, CD 21, CD 23, Anti-fascin. Морфометрическая обработка проводилась с использованием пакета программ VideoTest®.

При изучении паренхимы костного мозга больных ХЛЛ было выделено три типа опухолевой инфильтрации: нодулярный, интерстициальный и диффузный. Лимфоидные инфильтраты содержали клеточную лимфоидную популяцию, экспрессирующую пан-В-клеточные маркеры CD 20 и CD 79а, а также CD 5 и CD 23. Отсутствовала экспрессия Cyclin Д1, CD 10. Морфологические при знаки реакции стромы костного мозга имелись при всех трех видах опухолевой инфильтрации. При импрегнации препаратов серебром наблюдалось увеличение количества ретикулиновых нитей при всех типах инфильтрации, с заметным формированием очагов ретикулинового склероза при интерстициальном и диффузном типах, включая эндостальные зоны. Также прослеживается тенденция увеличения количества сосудов микроциркуляторного русла при прогрессировании инфильтрации костного мозга. При диффузной инфильтрации площадь сосудов увеличилась практически вдвое по сравнению с контрольной группой (17,9±4,7% вместо 9,1±1,2%), и, что особенно важно, отмечено увеличение количества сосудов в субэндостальных пространствах. Анализ эндостальных клеток показал увеличение количества клеток на единицу площади при интерстициальной (1,8±0,4) и диффузной (2,3±0,7) инфильтрации по сравнению с контрольной группой (1,4±0,2), а также изменение соотношения морфологических типов эндостальных клеток.

При морфологическом исследовании био-птатов лимфатических узлов больных ХЛЛ отмечались нарушения гистоархитектоники всех компонентов лимфоидной ткани, стирание рисунка лимфатических узлов и диффузная инфильтрация малыми лимфоцитами. Опухолевые клетки имели фенотип CD 20±, CD 79а±, CD 5+, CD 23+, Cyclin Д1-, CD 10-. Импрегнация препаратов серебром показала деструктивные изменения в ретикулиновой сети лимфатических узлов — дезорганизация ретикулиновых волокон с уменьшением их количества. Данные ИГХ исследований фолликулярных дендритных клеток (ФДК) и морфометрический анализ свидетельствуют о дезорганизации сети ФДК при ХЛЛ, с общим сокращением количества дендритных клеток почти в три раза (7,2 ± 1,3 % при ХЛЛ против 23 ± 3,1 % в группе сравнения). Сокращение числа ФДК в лимфатических узлах больных ХЛЛ может являться благоприятным фактором для выживания и прогрессии лейкозного клона. ИГХ исследования с моноклональными антителами CD34 class II выяви- ли гиперплазию сосудов микроциркуляторного русла. Морфометрические измерения показали, что площадь сосудов составила 12,8 ± 0,3 % при ХЛЛ против 6,5 ± 0,5 % в контрольной группе.

Изменения паренхиматозно-стромальных взаимоотношений костного мозга и лимфатиче-

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том X, № 1, 2014

ских узлов свидетельствуют о вовлечении стромальных структур кроветворного и лимфоидного микроокружения в генез неопластической трансформации лимфоидных предшественников.