Микробиологический спектр возбудителей при желудочно-кишечной патологии у животных

Введение. Условно-патогенные энтеробактерии являются представителями факультативной микрофлоры толстого кишечника и достаточно часто обнаруживаются в значительном количестве при исследовании проб от клинически здоровых людей и животных [1, 2]. Микро-экологическая система желудочно-кишечного тракта животных подвержена воздействию целого ряда разнообразных неблагоприятных экзогенных (загрязнение кормов, воды, почвы и воздуха) и эндогенных факторов (иммунодефицитные состояния, вызванные заболеваниями вирусной и бактериальной этиологии, нерациональное применение антибактериальных препаратов) и т. д. [3–5]. Зачастую под влиянием различных неблагоприятных факторов условнопатогенная микрофлора практически всегда приобретает патогенные свойства и является причиной нарушения нормоэнтеробиоценоза [6].

В настоящее время одним из наиболее распространенных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных является колибак-териоз. Важнейшую информацию о патогенных свойствах эшерихий получают при определении их антигенной структуры. Клетки эшерихий содержат три вида антигенов: О – соматический, К – оболочечный и Н – жгутиковый. У больных телят по структуре антигена установлено более 165 вариантов О-антигена, 55 Н-антигена и 90 вариантов К-антигена. К-антигены обладают адгезивными свойствами, т. е. с их помощью бактерии прикрепляются к эпителиальным клеткам слизистой оболочки кишечника [7, 8].

Нередко наблюдается поражение желудочнокишечного тракта животных, вызванное протеем. Обнаружение большого количества культур P. vulgaris в воде и кормах свидетельствует об их органическом загрязнении, возникающем при нарушении норм содержания и кормления животных. В результате происходит массовое пере-заражение животных патогенной культурой, что влечет за собой фекальное загрязнение объектов животноводства, обеспечивая циркуляцию возбудителей протейной инфекции [9, 10].

Цель исследования – определить видовой спектр энтеробактерий, выделенных у сельскохозяйственных животных с клиническими признаками нарушения функций пищеварительной системы в хозяйствах Омской области.

Объекты и методы. Объектом исследования явились сельскохозяйственные животные и птица, у которых были выделены бактерии семейства Enterobacteriaceae в период с 2016 по 2020 г. Исследования проводили на базе БУ «Омская областная ветеринарная лаборатория» согласно методическим рекомендациям «Методы бактериологического исследования условно-патогенных микроорганизмов в клинической микробиологии» от 19 декабря 1991 г. Материалом для микробиологического исследования служили внутренние органы, абортированные плоды, ректальные смывы и пробы фекалий от животных с желудочно-кишечной патологией.

Идентификацию выделенных культур микроорганизмов проводили классическими микробиологическими методами. Серологическую идентификацию выделенных культур E. coli проводили с помощью агглютинирующих О-коли сывороток в соответствии с рекомендациями от 16 июня 1980 г. Чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам определяли с помощью диско-диффузионного метода (ДММ) в соответствии с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорга-

Вестник КрасГАУ. 2022. № 2 низмов к антибактериальным препаратам». Патогенность выделенных культур определяли постановкой биопробы на лабораторных животных, а также путем посева на кровяной агар. Подопытным животным внутрибрюшинно вводили 0,5 мл бактериальной суспензии в концентрации 0,5х10⁹ м.т/мл. Контрольным животным вводили 0,5 мл стерильного 0,9%-го физиологического раствора, клиническое наблюдение за зараженными животными осуществляли в течение 5 суток.

Результаты и их обсуждение. По результатам проведенных исследований энтеробактерии чаще выделяли у молодняка крупного рогатого скота, реже у свиней, лошадей, мелкого рогатого скота и птицы различных возрастных групп. Положительные находки энтеробактерий были выявлены в количестве: 804 культуры у крупного рогатого скота, 147 – у свиней, 12 – у лошадей и 12 – у мелкого рогатого скота, (табл. 1).

Таблица 1

Район	КРС	МРС	Свиньи	Лошади
Азовский	72	–	–	–
Большереченский	27	4	2	–
Горьковский	8	–	1	–
Исилькульский	52	–	–	–
Калачинский	21	–	2	–
Кормиловский	11	–	10	–
Любинский	39	–	–	–
Марьяновский	27	3	–	–
Москаленский	7	–	–	–
Нововаршавский	9	–	–	–
Одесский	94	–	1	–
Оконешниковский	2	–	–	1
Омский	54	1	120	4
г. Омск	7	–	1	3
Павлоградский	11	–	–	–
Полтавский	65	2	2	–
Русско-Полянский	77	–	–	–
Седельниковский	4	–	1	2
Таврический	152	2	–	1
Тарский	16	–	3	1
Тюкалинский	7	–	2	–
Черлакский	30	–	–	–
Шербакульский	5	–	–	–
Итого	804	12	147	12

Выделение энтеробактерий у животных с патологией ЖКТ в районах Омской области (2016–2020 гг.)

Значительно меньшее количество проб поступило и было исследовано из хозяйств Знаменского, Называевского, Колосовского, Кру-тинского, Муромцевского, Нижнеомского, Сар-гатского районов.

У крупного рогатого скота видовой состав энтеробактерий был представлен 9 родами: Citrobacter , Escherichia , Enterobacter , Hafnia , Klebsiella , Proteus , Salmonella , Shigella и Yersinia .

Среди молодняка крупного рогатого скота за 2016–2020 гг. были исследованы пробы от животных в возрасте от 2–3 дней до 6 месяцев, а также содержимое ЖКТ абортированных плодов.

Было выделено 11 видов энтеробактерий (рис. 1). Чаще всего встречались случаи выделения Escherichia coli – 49 % (n=390), из них значительное количество составляли патогенные энтеробактерии (n=251). На втором месте по частоте выделения располагался Proteus vulgaris – 29 % (n=232). Далее Citrobacter freundii – 10 % (n=84), Klebsiella pneumoniae – 6 % (n=46), Proteus mirabilis – 4 % (n=30). Остальные культуры (2 %) составляли Citrobacter diversus , Entero-bacter aerogenes , Enterobacter cloaceae , Salmonella dublin , Shigella flexneri и Yersinia enterocolitica .

в Escherichia coli (390) - 49%

• □    Proteus vulgaris (232) - 29%

• □    Citrobacter freundii (84) - 10%

• ■    Klebsiella pneumoniae (46) - 6%

• □    Proteus mirabilis (30) - 4%

• □    Enterobacter aerogenes (8)

• □    Citrobacter diversus (5)

• □    Enterobacter cloaceae (4)

• □    Salmonella dublin (3)

• □    Shigella flexneri (1)

• □    Yersinia enterocolitica (1)

Рис.1. Видовой состав энтеробактерий, выделенных у КРС с патологией ЖКТ (2016–2020 гг.)

У свиней было выделено 7 видов энтеробактерий, среди которых чаще всего регистрировали Escherichia coli – 51 % (n=75), из них патогенных серотипов 44 культуры. Также выделяли Proteus vulgaris – 24 % (n=36) и Citrobacter freundii – 18 % случаев (n=26). Остальные культуры (7 %) составляли Citrobacter diversus , Enterobacter aerogenes , Klebsiella pneumoniae и Proteus mirabilis (рис. 2).

У лошадей выделяли 4 вида энтеробактерий: Escherichia coli – 67 % (n=8, только патогенные серотипы), а также 2 случая выделения Hafnia alvei и по одному случаю – Citrobacter freundii и Enterobacter cloaceae.

У мелкого рогатого скота в Омской области за данный период выделяли только Escherichia coli (n=12), из них 7 серотипов были патогенными.

Материал от птиц подвергался исследованиям на колибактериоз и сальмонеллез. В качестве патологического материала исследовали трупы, эмбрионы, инкубированное яйцо и помет. Количество положительных находок возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза за 2016–2020 гг. приведено в таблице 2.

в Escherichia coli (75) - 51%

• □    Proteus vulgaris (36) - 24%

• □    Citrobacter freundii (26) - 18%

• ■    Enterobacter aerogenes (3)

• □    Proteus mirabilis (3)

• □    Citrobacter diversus (2)

• □    Klebsiella pneumoniae (2)

Рис. 2. Видовой состав энтеробактерий, выделенных у свиней с патологией ЖКТ (2016–2020 гг.)

Выделение энтеробактерий у птиц (2016–2020 гг.)

Таблица 2

Возбудитель	2016	2017	2018	2019	2020	Итого
Escherichia coli	127	88	114	125	89	543
Salmonella spp.	2	1	1	–	–	4

Таким образом, наибольшее количество культур эшерихий от птиц было выделено в 2016 и 2019 гг., всего 543 культуры в период с 2016 по 2020 г. Сальмонеллы выделяли только с 2016 по 2018 г., всего 4 культуры.

Принадлежность эшерихий к энтеропатоген-ным серотипам определяли с помощью диагностических О-коли сывороток. У крупного рогатого скота наиболее часто регистрировали E.coli следующих серотипов: О8, О78, О20, О86, О141 и О2; у свиней – О26, О8, О33 и О20. Патогенность данных культур определяли путем постановки биопробы, в случае гибели лабораторных животных в течение 5 суток после введения бактериальной суспензии подтверждали этиологическую роль возбудителя в заболевании животных.

В результате проведенных исследований установили, что 59 % культур эшерихий чувствительны к левомицетину, 74 – к ципрофлоксацину, 62 – к стрептомицину и 68 % – к фосфомицину.

Большинство культур Proteus spp. чувствительно к перечисленным антибактериальным препаратам, а также к гентамицину. Большая часть культур Citrobacter spp . чувствительна к гентамицину, доксициклину, ципрофлоксацину и стрептомицину, Klebsiella spp . – к гентамицину, доксициклину, тетрациклину, ципрофлоксацину и цефазолину. Выделенные бактерии рода Enterobacter обладали чувствительностью к доксициклину, кана-мицину, левомицетину, тетрациклину, ципрофлоксацину, стрептомицину, цефуроксиму и пеф-локсацину. Наибольшую резистентность энтеробактерии всех родов проявили к азитромицину, линкомицину и энрофлоксацину.

Таким образом, большинство выделенных энтеробактерий чувствительны к гентамицину, левомицетину, ципрофлоксацину и стрептомицину.

Заключение. В период с 2016 по 2020 г. у сельскохозяйственных животных с патологией желудочно-кишечного тракта было выделено 12 видов энтеробактерий. Среди возбудителей же- лудочно-кишечной патологии наиболее часто выделяли энтеропатогенные серотипы Escherichia coli – 251 культура у крупного рогатого скота, 44 – у свиней, 8 – у лошадей и 7 – у мелкого рогатого скота. Наиболее часто регистрировали серотипы О2, О8, О20, О26, О33, О78, О86 и О141. На втором месте по количеству выделенных культур у животных Proteus vulgaris – 268, на третьем месте по частоте выделения Citrobacter freundii – 111 культур.

По результатам определения чувствительности к антибактериальным препаратам установили, что большинство энтеробактерий чувствительны к гентамицину, левомицетину, ципрофлоксацину и стрептомицину. Резистентность к азитромицину, линкомицину и энрофлоксацину выявили у более 50 % выделенных культур энтеробактерий.