Микробный пейзаж почвы сибиреязвенных захоронений

Микрофлора почвы состоит из микробных популяций актиномицетов, бактерий, микроскопических грибов, водорослей и простейших.

В почве кроме сапрофитных микроорганизмов постоянно обнаруживаются возбудители инфекционных болезней, которые попадают в нее с различными органическими отбросами в виде фекалий, навоза, мусора и т.п. Через почву могут передаваться возбудители туберкулеза, чумы, дизентерии, брюшного тифа, холеры, газовой гангрены, ботулизма, сибирской язвы, а также патогенные грибы и актиномицеты. Патогенные неспоровые формы (брюшнотифозные, дизентерийные и др.) сохраняются в почве недолго от 2 недель до 12 месяцев.

Исходя из вышеизложенного, изучение микробного пейзажа старых сибиреязвенных скотомогильников остается актуальным для ветеринарной науки и практики.

Целью работы является изучить микробный пейзаж почвы сибиреязвенных захоронений на территории Закамья Республики

Татарстан.

Материалы и методы исследований . Работа выполнялась на кафедре микробиологии КГАВМ имени Н.Э. Баумана и в лаборатории по хранению и изучению штаммов возбудителей особо опасных болезней во ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Отбор проб почвы проводили на старых сибиреязвенных захоронений стационарно неблагополучных пунктах Нижнекамского района Республики Татарстан. Пробы почвы отбирали с помощью почвенного бура по углам и в центре обследуемого участка, на глубине 15, 25, 50, 75, 100, 150 и 200 см, массой по 50-100г. Транспортировку исследуемых проб осуществляли в соответствии с санитарными правилами «Порядок учёта, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов 1 и 4 групп патогенности (СП 1.2.036-95).

Подготовку проб к микробиологическому анализу проводили согласно «Методическому указанию по обнаружению возбудителя сибирской язвы в сырье животного происхождения и объектах внешней среды», утвержденной ГУВ СССР от I.XI.1979 года.

Микологические исследования по количественному и качественному составу микроскопических грибов устанавливали путем посева проб на пластинчатый слой среды Чапека и сусло - агара в чашках Петри.

Результаты собственных исследований. Микробиологическими исследованиями установили, что по мере углубления в почву в зависимости от типа почвы существенно меняется количественный и качественный состав почвенной микрофлоры. Наибольшее количество (1 млн./г. и более) микробов находилось в почве на глубине 15-20 см, при продвижении вглубь количество микробов резко уменьшалось, так, на глубине 1,0-2,0 м встречались уже единичные микроорганизмы.

Количество спорообразующих микробов в черноземной почве превышало 25 млн. спор на 1г. Если в черноземной почве скотомогильников в поверхностных слоях 15-25 см в 1 г выявлялось 26 млн. микроорганизмов (актиномицеты, клостридии, термофильные) и 3,6 млн. аэробных спорообразующих микроорганизмов ( В. subtilis, В. mucoides, В. mesentericus, В. megaterium ), то в дерново-подзолистых это количество было в два раза меньше.

Количество споровых микроорганизмов в черноземной и серых лесных почвах на глубине 100 см, составляло 50%, на глубине 150 см -75% (мест захоронения сибиреязвенных трупов), а в супесчаной почве - 0,4 %. В суглинистой почве количество споровых форм не превышало 1%. Количество этих форм в черноземе на указанных глубинах в 16,4 и 25 раз было выше, чем в серых подзолистых почвах.

• 1.    Изучение микробного пейзажа в почве сибиреязвенных захоронений

  Населенные пункты	Тип почвы	Почвенные спорообра-зующие микробы, (млн. спор)	Актино-мицеты (млн.м.к.)	Гнилостные микроорганиз мы, (млн.м.к.)
  с.Шереметьево	чернозем	3,6	26	1,2
  д.Ачи	дерновоподзолистый	1,0	10	0,8
  д. Татвель	серые лесные	1,2	6	0,5
  д.Ильинка	серые лесные	1,0	8	0,6
  с.Каенлы	чернозем	2,4	23	1,5

• 2.    Содержание микромицетов в почве сибиреязвенных захоронений

  Населенные пункты и тип почвы
  с.Шереметьево	д.Ачи	д. Татвель	д.Ильинка	с.Каенлы
  чернозем	дерновоподзолистый	серые лесные	серые лесные	чернозем
  Глубина почвы 25 см
  Aspergillus Penicillium Fusarium Mucor Trichoderma Candida.	Aspergillus Penicillium Fusarium Mucor Candida.	Aspergillus Penicillium Fusarium Mucor Candida.	Aspergillus Penicillium Fusarium Mucor Candida.	Aspergillus Penicillium Fusarium Mucor Trichoderma Candida.
  Глубина почвы 50 см
  Aspergillus Penicillium Fusarium Mucor	Aspergillus Penicillium Mucor	Aspergillus Penicillium Mucor	Aspergillus Penicillium Fusarium Mucor	Aspergillus Penicillium Fusarium Mucor
  Глубина почвы 150 см
  Aspergillus Единичные споры Penicillium	Единичные споры Penicillium	Единичные споры Aspergillus Penicillium	Единичные споры Penicillium Aspergillus	Aspergillus Единичные споры Penicillium

• 3. Индикация аэробных спорообразующих микроорганизмов в почве старых захоронений

  № п/п	Фенотипичес кие свойства	Населенные пункты
  		с.Шереметь ево	д.Ачи	д.Татвель	д.Ильинка	с.Каенлы
  1.	Тинкториаль-ные свойства	Гр+	Гр+	Гр+	Гр+	Гр+
  2.	Капсулообра-зование	отр	отр	отр	отр	отр
  3.	Подвижность	-	-	+	-	+
  4.	Чувствительность к пенициллину	Чувств.	Чувств.	Не чувств.	Чувств.	Не чувств.
  5.	Рост на МПА	в виде гривы льва	в виде гривы льва	в виде гривы льва	в виде гривы льва	в виде гривы льва

В исследованных пробах почвы наряду вышеуказанными микроорганизмами содержались и микроскопические грибы.

Наиболее часто выявлялись микроскопичесие грибы рода Aspergillus – до 77,8% проб почвы. В меньшей степени выявлялись Fusarium - до 55,5% проб почвы и Penicillium - до 66,6% проб почвы. Выявлялись также микромицеты родов Mucor , Rhizopus , Trichoderma , Trichotecium , Cladosporium , Alternaria , однако, встречаемость этих микромицетов была на порядок ниже. Представители рода Penicillium обнаруживались в более глубоких слоях, а грибы рода Mucor , Fusarium , Trichoderma - в поверхностных слоях. Во всех пробах почвы на глубине до 25 см выделялись грибы рода Candida .

При бактериологических исследованиях почвы старых захоронений, из 9 исследованных проб и взятых на глубине 150 - 200 см, в двух выявлены изоляты характерные по фенотипическим свойствам для возбудителя сибирской язвы. Результаты идентификации, выделенных изолятов, представлены в таблице 3.

При микроскопическом исследовании культуры обнаружены грамположительные палочки с обрубленными или закругленными концами неподвижные. Протеолитические свойства были характерными для B.anthracis. Выделенные изоляты вызывали гибель белых мышей при введении им дозы от 10 до 10 спор, однако в мазках из патматериала капсулообразование не обнаружено. Бактерии интенсивно окрашивались сибиреязвенными адсорбированными флуоресцирующими глобулинами (МФА) и вызывали гемагглютинацию сенсибилизированных адсорбированными глобулинами эритроцитов барана (РНГА).

Мясо-пептонный бульон имел трудноразбивающийся осадок, с легким помутнением и образованием пристеночного кольца. В висячей капле из суточной культуры микробы не подвижны. При посеве уколом изучаемой культуры на мясо-пептонный желатин, от линии посева развивались боковые отростки культуры в виде опрокинутой ёлочки, в последующие дни верхняя часть желатина не разжижалась. Засеянное культурой молоко в течение 2-3 суток свертывалось. В чашках Петри при посеве на 5%-ый кровяной агар, зона гемолиза присутствовала, т.е. по биохимическим свойствам они были атипичными для возбудителя сибирской язве.

Заключение. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что почва представляет собой живую систему с многообразной микрофлорой. При бактериологическом исследовании почв старых сибиреязвенных захоронений, установлено, что количество микроорганизмов, зависело от типа почвы. Наиболее высокая концентрация микроорганизмов, обнаружена в почвах скотомогильников, расположенных на черноземных почвах. В глубоких слоях почвы из старых сибиреязвенных захоронений (1,5 - 2,0 м), выделяются аэробные спорообразующие микроорганизмы.

ЛИТЕРАТУРА: 1 .Бакулов, И.А. Сибирская язва (Антракс); новые страницы в изучении «старой» болезни/ И.А Бакулов, В.А. Гаврилов, В.В. Селиверстов -Владимир: «Посад». -2001.-287с. З.Бакулов, И.А. Сибирская язва (Антракс); новые страницы в изучении «старой» болезни / И.А. Бакулов, В.А. Гаврилов, В.В. Селиверстов.- Владимир: Посад, 2001.-287 с. 4. Галиуллин, А.К.Ретроспективный анализ сибиреязвенной инфекции на территории РТУ А.К., Галиуллин, Б.В. Камалов, А.Х Волков, М.С. Шакиров // Ветеринария, №1.-2009.-С. 22-26.

МИКРОБНЫЙ ПЕЙЗАЖ ПОЧВЫ СИБИРЕЯЗВЕННЫХ ЗАХОРОНЕНИЙ

Семенова С.А., Галиуллин А.К

Резюме

Полученные данные свидетельствуют, что почва представляет собой живую систему с многообразной микрофлорой. При бактериологическом исследовании почв старых сибиреязвенных захоронений, установлено, что количество микроорганизмов, зависело от типа почвы. Наиболее высокая концентрация микроорганизмов, обнаружена в почвах скотомогильников, расположенных на черноземных почвах. В глубоких слоях почвы из старых сибиреязвенных захоронений (1,5 - 2,0 м), выделяются аэробные спорообразующие микроорганизмы.

MICROBIAL SOIL SCENERY OFANTHRAX BURIALS

Semyonova S.A., Galiullin A.K.