Молекулярно-генетическая и клинико-лабораторная характеристика пациентов с pH-негативными хроническими миелопролифетаривными заболеваниями

генов STAT3 и STAT5B проводили при помощи аллель-специфичной ПЦР на приборе Step One Real-Time PCR (Applied Biosystems, USA). Определяли следующие мутации, характерные для Т-ЛБГЛ: c.1919A>T; c.1940A>T; c.1982A>T; c.1981G>T; c.1981G>C; c.1981G>A гена STAT3 (соответствующие аминокислотным заменам p. Y640F; p. N647I; p. D661V; p. D661Y; p. D661H; p. D661N) и c.1924A>C (p. N642H) гена STAT5B.

Результаты. У 33 % пациентов с Т-ЛБГЛ (35 из 106) были выявлены точечные соматические мутации STAT3 или STAT5B. Мутация p. Y640F обнаружена у 19 пациентов, p. D661Y у 11 пациентов, p. N647I у 2 пациентов, p. D661V у 1 пациента, p. D661H у 1 пациента, p. N642H у 1 пациента. У пациентов с сочетанием Т-ЛБГЛ и ревматоидного артрита частота выявления мутаций была незначительно выше (35,1 % против 30,6 %). У 18 % (у 2 из 11) пациентов с хроническими лимфопролиферативными заболеваниями из NK клеток были обнаружены мутации STAT3 и STAT5B: p. Y640F p. N642H соответственно. В группе контроля точечных соматических мутаций STAT3 и STAT5B не выявлено.

Выводы . Выявление точечных соматических мутаций генов STAT3 и STAT5B у больных Т-клеточным лейкозом из больших гранулярных лимфоцитов и хроническим лимфопролиферативным заболеванием из NK клеток и отсутствие их в контрольной группе свидетельствует о значимости определения данных мутаций при проведении дифференциальной диагностики между реактивным и опухолевым БЛГ-лимфоцитозом. Спектр выявленных на нашей выборке больных точечных мутаций STAT3 и STAT5B совпадает с описанным в литературе для других выборок.

А. Е. Силин, Д. К. Новик, В. Н. Мартинков, В. В. Кошкевич, И. Б. Тропашко, А. А. Силина

Государственное учреждение «Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека», г. Гомель, Республика Беларусь

МОЛЕКУЛЯРНО^ГЕНЕТИЧЕСКАЯ И КЛИНИКО^ЛАБОРАТОРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПАЦИЕНТОВ С PH^НЕГАТИВНЫМИ ХРОНИЧЕСКИМИ

МИЕЛОПРОЛИФЕТАРИВНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

Введение . Наиболее распространенными среди Ph-негативных (BCR-ABL1-негативных) хронических миелопролиферативных заболеваний (ХМПЗ)являются истинная полицитемия (ИП), эссенциальная тромбоцитемия (ЭТ) и идиопатический миелофиброз (ИМ).

Основная проблема в диагностике ХМПЗ до недавнего времени заключалась в отсутствии точного метода подтверждения клонального характера заболевания с целью дифференциации от реактивных эритроцитозов и тромбоцитозов. В последние годы для диагностики ХМПЗ стали применяться молекулярно-генетические маркеры клональной миелопролиферации. Наиболее значимыми из них являются соматические мутации генов JAK2 (V617F), CALR (del и ins) и MPL (W515L и W515K). Диагностическая значимость этих маркеров для каждой из форм ХМПЗ различна. Интерес также представляет зависимость клинико-лабораторных показателей пациентов от мутационного статуса при каждой из форм ХМПЗ.

Цель. Дать оценку распространенности и клинической значимости соматических му- таций генов JAK2, CALR и MPL в группах пациентов с ИП, ЭТ и ИМ.

Материалы и методы . В исследование были включены 359 пациентов, проходивших обследование в ГУ «РНПЦ РМ и ЭЧ» в период 2014– 2018 гг. Группы исследования составили 132 пациента с диагнозом «Истинная полицитемия» с медианой возраста 62,5 года, 108 пациентов с диагнозом «Эссенциальная тромбоците-мия» — 60,5 лет и 119 пациентов с диагнозом «Идиопатический миелофиброз» — 62 года. Материалом для исследования являлись образцы ДНК, выделенные из цельной венозной крови. Мутацию V617F гена JAK2 и мутации W515L и W515K гена MPL анализировали методом ARMS-PCR. Мутации del/ins (тип 1 и тип 2) гена CALR анализировали методом ПЦР с использованием двух праймеров, фланкирующих 9экзон. Детекция продуктов ПЦР осуществлялась электрофоретически в агарозном геле с окраской бромистым этидием.

Результаты. В группе ИП был выявлен только один тип мутации — V617F JAK2 с частотой 94,7 %. Среди пациентов старше 50 лет встреча- емость этой мутации была статистически значимо больше,чем среди пациентов в возрасте 50 и менее лет, p=0,032. Различия по частоте встречаемости мутации V617F между подгруппами мужчин и женщин не выявлены. Также не выявлены какие-либо клинически значимые различия по лабораторным показателям в зависимости от мутационного статуса.

У пациентов из группы ЭТ мутация JAK2 V617F сопровождала 66,7 % случаев. Группа JAK-положительных пациентов с ЭТ характеризовалась большей медианой возраста (p=0,050) и существенно не отличалась по другим изучаемым показателям от пациентов,не имевших данной мутации. Кроме мутации V617F в данной группе были выявлены мутации гена CALR с частотой 16,7 % — у 5 мужчин и 13 женщин. В зависимости от наличия мутаций CALR также не выявлено заметных различий по клиниколабораторным показателям между пациен-тами,за исключением возраста. У пациентов с мутациями CALR медиана возраста была на 11 лет меньше (p=0,030).

В группе ИМ мутация JAK2 V617F присутствовала в 66,4 % случаев. Медиана возраста у пациентов с мутацией JAK2 составила 64 года, а у пациентов без указанной мутации — 60,0 лет p=0,011. Мутации гена CALR выявлены у 14 пациентов (11,8 %). Средний возраст пациентов с мутациями CALR (медиана 53 лет) был значимо меньше возраста пациентов без данных мутаций (63 года), p=0,025. Мутация MPL W515L, которая выявлена только в этой группе сопровождала 6 случаев ИМ (5,0 %). Не выявлено статистически значимых различий в частоте определения мутации JAK2, CALR и MPL у пациентов разного пола. В группе пациентов с ИМ мутация JAK2 была сопряжена с большим ко- личеством эритроцитов и уровнем гемоглобина — в 1,28 и 1,32 раза, p<0,001 и p<0,001 соот-ветственно,в сопоставлении с пациентами без данной мутации, у которых медиана количества эритроцитов 3,4 х 1012/л и уровень гемоглобина 96,2 г/л были снижены относительно значений нормы. Также были выявлены статистически значимые различия в отношении количества лейкоцитов (p=0,001), тромбоцитов (p=0,003) и уровня ЛДГ (p=0,035): у пациентов с мутацией количество лейкоцитов и тромбоцитов было соответственно в 1,45 раза и в 2,27 раз больше (медиана 11,2 х 109/л и 501,0 х 109/л), а содержание ЛДГ — в 1,48 раз меньше (медиана 327,0 Ед/л), чем у JAK2-отрицательных пациентов. В данной группе уровень ЛДГ в плазме крови JAK2-положительных пациентов (медиана 327 Ед/л) был в 2,1 раз ниже, чем у пациентов с мутациями CALR (медиана 687,5 Ед/л, p=0,011) и в 1,96 раз ниже, чем у MPL-положительных пациентов (медиана 641,5 Ед/л, p=0,015), но значимо не отличался от такового у пациентов без мутаций (p=0,967). Среди пациентов с ИМ мутация MPL в 100 % случаев была сопряжена со спленомегалией, что в 5,0 раз чаще, чем у пациентов без каких-либо мутаций (p=0,001) в 2,82 раз чаще, чем у пациентов с мутацией JAK2 (p=0,003), и в 2 раза чаще, чем при наличии мутаций CALR (p=0,052).

Выводы . Соматические мутации генов JAK2 (V617F), CALR (del и ins) и MPL (W515L и W515K) в качестве маркеров клональной миелопролиферации позволяют верифицировать диагноз у 94,7 % пациентов с ИП, 79,7 % пациентов с ЭТ и 83,2 % пациентов с ИМ. Мутационный статус имеет наиболее выраженное клиническое значение в группе пациентов с ИМ.