Морфофункциональные и генетические особенности МСК пациентов с множественной миеломой после лечения

Введение. Множественная миелома (ММ) – моноклональная гаммапатия, заболеваемость которой неуклонно возрастает и, несмотря на внедрение новых лекарственных препаратов, до сих пор остается неизлечимым заболеванием. Развитие, поддержание и лекарственная устойчивость миеломных клеток в костном мозге (КМ) опосредуется их взаимодействием с микроокружением, в котором мезенхимные стромальные клетки (МСК) являются ключевыми участниками как здоровой, так и малигнизированной гемопоэтической ниши. Находясь в контакте с опухолевыми клетками, МСК приобретают опухоль-ассоцииро- ванный фенотип (ОА-МСК), позволяющий этим клеткам стимулировать пролиферацию опухолевых клеток и защищать их от действия противоопухолевых препаратов. Изучение особенностей МСК КМ позволяет расшифровать особенности патобио-логических механизмов формирования патологического клона клеток ММ. Понимание механизмов реорганизации гемопоэтической ниши в ходе развития онкологического заболевания и после проведенного лечения необходимо для поиска новых методов предотвращения рецидивов заболевания.

Цель . Оценить морфофункциональные особенности основ-

ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ С МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ «АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ», ПОСВЯЩЕННАЯ 90-ЛЕТИЮ РОССИЙСКОГО НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОГО ИНСТИТУТА ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ

Санкт-Петербург

30 июня – 1 июля 2022 г.

ных компонентов гемопоэтической ниши КМ, включая МСК КМ, у пациентов с ММ с различным ответом на терапию.

Материалы и методы . В исследование были включены здоровые доноры (ЗД, n=2) и пациенты с различным статусом ответа на терапию (бортезомибсодержащие индукционные схемы): полный ответ (ПО), частичный ответ (ЧО), ответ не достигнут (НД) (n=24). Для исследования заготавливали костномозговой пунктат и трепанобиоптаты КМ. Проводили гистологические и иммуногистохимические исследования КМ. В культурах МСК, полученных из материала стернальной пункции, проводили оценку скорости пролиферации, остеогенной дифференцировки, наличия маркеров опухолевых МСК (αSMA-актин, β-галактозидаза), резистентности к бортезомибу, а также оценивали уровни транскрипции прицентромерной тандемно-повторяющейся ДНК (ТП-ДНК) – нового маркера ОА-МСК. Процесс формирования опухоль-ассоциированного фенотипа МСК имитировали в экспериментах по сокультивированию МСК и ММ-клеток клеточной линии RPMI8226 с бортезомибом и без него. Профиль транскрипции ТП-ДНК был получен in silico методом анализа транскриптомных данных на уровне одной клетки. Результаты анализа in silico были проверены in vitro с помощью qPCR и in situ с помощью ДНК-РНК FISH.

Результаты. Морфологически были определены изменения сосудистого компонента гемопоэтической ниши у пациентов с ЧО и НД ответом – плотность микрососудов в паренхиме КМ и, в частности, в субэндостальной зоне выше, чем в группе ЗД. Так же количество α-SMA+ клеток (маркер ОА-МСК) было значительно выше, чем в группе ЗД. В экспериментах по совместному культивированию было показано, что МСК от пациентов, получавших бортезомиб, в культуре более эффективно защищали опухолевые ММ-клетки от воздействия препарата, чем МСК из группы ЗД. Культуры клеток МСК, полученные из образцов пациентов ЧО и НД групп, различались по своим функциональным свойствам. Все МСК группы НД и 62,5% МСК группы ЧО имели более низкую способность к пролиферации, чем МСК группы ЗД. Остеогенный потенциал уменьшился, в то время как проявление маркеров ОА-МСК увеличилось в порядке ЗД ≤ЧО ≤ НД. Анализ транскриптома выявил активацию транскрипции ТП-ДНК в клетках негемопоэтического происхождения из КМ пациентов группы НД. В срезах трепанобиоптатов транскрипты HS2/HS3 были обнаружены в αSMA+ МСК, но не в опухолевых клетках. По результатам qPCR самый высокий уровень транскрипции наблюдался в МСК группы НД. Транскрипция HS2/HS3 не была обнаружена у МСК группы ЗД, если только они не были совместно культивированы с опухолевыми клетками ММ и не приобрели опухоль-ассоциированный фенотип.

Выводы . Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что компоненты гемопоэтической ниши КМ больных ММ претерпевают морфофункциональные и генетические изменения, которые остаются после бортезомибсодержащих схем терапии, и в комплексе сильнее выражены у пациентов с худшим ответом.