Морфология поджелудочной железы лабораторных животных под влиянием димефосфона

Поджелудочная железа является важнейшим органом пищеварительной системы у животных и человека. В структурном плане она состоит из двух частей, различных в морфофункциональном отношении - экзокринной и эндокринной, причем первый компонент железы значительно преобладает в дольках. Экзокринная функция в железе связана с синтезом и выделением пищеварительных химических веществ (ферментов), участвующих в переваривании поступившего корма, расщеплении белков, углеводов и жиров. Ферменты вырабатываются непосредственно в клетках железы в неактивной форме, чтобы они не оказывали патологического влияния наструк-туры поджелудочной железы [1, 3, 6]. Активация ферментов происходит только при их попадании в тонкий кишечник. У крысы структурной особенностью органа является наличие двух очень тонких выводных протока в поджелудочной железе, которые впадают либо в желчный проток, либо непосредственно в двенадцатиперстную кишку. Эндокринная функция железы связана с синтезом ряда гормонов, осуществляемом в клетках панкреатических островков, которые, распространяясь по всему организму с током крови, регулируют обмен веществ в организме. Ди-мефосфон обладает выраженным влиянием на метаболические процессы в организме и регуляцию кислотно-щелочного баланса. Под влиянием димефосфона происходит усиление тканевого метаболизма и внутриорганного кровотока, препарат способствует общей регуляции кровообращения, укрепляет защитные функции кожных покровов и слизистых оболочек организма [2, 5, 7]. На сегодняшний день влияние димефосфона на поджелудочную железу изучено в недостаточной степени. Поэтому целью нашего исследования являлось изучение влияния на поджелудочную железу крыс димефосфона в терапевтических дозе, отраженной в инструкции к препарату.

Материалы и методы исследования. Экспериментальные исследования проводились на самцах беспородных белых крыс массой 180-200г, содержавшихся в виварии кафедры фармакологии и токсикологии ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ, согласно зоотехнических требований. Работа проводилась в соответствии с требованием «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных (1977)», а контрольные и подопытные крысы получали сбалансированный по питательным веществам рацион и имели сво- бодный доступ к питьевой воде. По принципу аналогов было сформировано 2 группы животных по 5 особей в каждой из них. Первая группа животных была контрольной, 2-ая группа – подопытной, крысам которойвнут-римышечно с внутренней поверхности бедра вводили димефосфон в терапевтической дозе, отраженной в инструкции по применению препарата. Контрольным животным вводили 1 мл бидистиллированной воды. Во 2-й подопытной группе определение количества вводимого препарата проводили согласно рекомендуемой дозы, а далее проводили ее пересчет на крысу средней массой 200 г (кг/5). Нами был использован концентрат для приготовления раствора для инъекций. Продолжительность опыта составляла 25 суток и включала 5 серий инъекций препарата и бидистил-лированной воды последовательно через каждые 5 суток. Контрольных и подопытных животных из опыта выводили в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите экспериментальных животных 86/609/ЕЕС путем обескровливания под эфирным наркозом. Материалом для гистологического исследования служили взятые после убоя кусочки поджелудочной железы, которые фиксировали в 10% - ном растворе нейтрального формалина по Беккеру. Уплотнение материала, заливку в парафин и изготовление срезов проводили по общепринятой методике [4]. Парафиновые срезы готовили на санном микротоме толщиной 5-8 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином, азур П и эозином. Морфометрические исследования гистострук-туроргана проводили при помощи окуляр-микрометра МОВ-1-1,5х в 10 участках препарата. Измеряли наибольший и наименьший диаметры поперечного среза ацинусов, наибольший и наименьший размеры панкреатических островков, подсчитывали количество панкреоцитов, образующих стенку ацинуса, измеряли высоту панкреоцитов и диаметр их ядра. Статистическую обработку полученных в опыте цифровых данных проводили методом вариационной статистики с помощью программного обеспечения «Microsoft Excel-2003». Для каждой величины определяли среднее арифметическое значение (М), среднестатистическую ошибку средней величины (±m) и достоверность разницы между средними арифметическими двух вариационных рядов по критерию достоверности Стидмена. Полученные различия в цифровых данных считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты исследований. Поджелудочную железу у крыспокрывает капсула из плотной неоформленной соединительной ткани, от которой внутрь железы отходятсоеди-нительнотканные тяжи, разделяющие паренхиму на дольки разного размера. Междольковая соединительная ткань имела слабо выраженный волокнистый компонент и была отечной. В некоторых полях зрения срезов железы отмечалось истончение междольковой соединительной ткани, вследствие чего дольчатость в таких участках была плохо выражена. В междольковых прослойках соединительной ткани выявлялись кровеносные сосуды, нервные волокна и выводные протоки, а кроме того, в отдельных участках наблюдались скопления липоцитов. Кровеносные сосуды характеризовались плазматическим пропитыванием стенок, а просвет венозных сосудов был заполнен форменными элементами крови, в отдельных сосудах полнокровие было резко выраженным. У некоторых крыс на срезах железы в артериях и венах, проходящих в междольковой соединительной ткани, форменные элементы крови не выявлялись, либо наблюдались в незначительном количестве. Междольковый выводной проток был образован однослойным призматическим эпителием и собственной пластинкой из соединительной ткани. В просвете выводного протока содержалось секретируемое вещество в незначительном количестве. Для контрольных крыс было характерным наличие в основном средних по размеру долек, в которых значительно преобладала экзокринная часть в виде ацинусов и протоков разного диаметра. Наибольший диаметр поперечного среза ацинуса со- ставлял 53,67± 2,44мкм, наименьший -39,67± 2,05 мкм. У контрольных крыс стенка ацинусов была образована в среднем 9,17± 0,52 панкреоцитами. Клетки имели более широкое основание, а в области апикального полюса происходило сужение панкреоцитов. В апикальной части клеток и в просвете концевых секреторных просветов отмечалось незначительное количество гранул. Ядро в панкрео-цитах располагалось ближе к базальному полюсу, было округлой формы и содержало 1-2 ядрышка. Хроматин ядра распределялся по всей площади, но значительная его часть прилегала к кариолемме. В отдельныхацинусахв просвете выявляли центроацинозные клетки уплощенной формы, но располагались они иногда и у стенки концевого секреторного отдела. Панкреоциты, образующие стенку концевого секреторного отдела, имели высо-ту13,83±0,34 мкм, а диаметр их ядра составлял 5,12±0,20 мкм. Границы между отдельными панкреоцитами в ацинусах просматривались с трудом, а в отдельных участках срезов нами наблюдалась деструкция концевых секреторных отделов. В паренхиме долек среди концевых секреторных отделов и клеток панкреатических островков выявлялись умеренно кровенаполненные гемокапилляры. Кроме того, среди концевых секреторных отделов экзокринной части долек наряду с более мелкими вставочными выводными протоками, стенка которых была выстлана плоским эпителием, наблюдалисьи более крупные – межацинозные и внутридольковыевыводные протоки, стенка которых была сформирована кубическим эпителием. В дольках выявлялись 1-2 не очень крупных панкреатических островка, в отдельных дольках эти эндокринные структуры не наблюдались (рисунок 1).

Рисунок 1- Панкреатический островок (1) в дольке поджелужочный железы контрольной крысы. Окр. гемотоксилином и эозином.х400.

Наибольший размер панкреатического островка составлял 84,83±3,95, наименьший – 73,33±3,59 мкм. Среди инсулоцитов преобладали В-клетки, которые занимали центральную область островков. Чаще всего В-инсулоциты имели полигональную либо призматическую форму клеток, округлое насыщенное гетерохроматином ядро, в котором в большинстве случаев наблюдалось одно интенсивно окрашивающееся ядрышко. А-клетки чаще всего располагалисьна периферии островков, но отдельные из них выявлялись и в центральной части островков среди В-клеток. А-инсулоциты имели округлую форму и крупное более бледно окрашивающееся ядро, чем в В-клетках. Среди инсуло-цитов выявлялись умеренно кровенаполненные гемокапилляры.

При исследовании гистопрепаратов поджелудочной железы подопытных крыс выявлялось некоторое укрупнение долек органа. Междольковая соединительная ткань имела более четкий рисунок волокнистого строения, что указывало на нормализацию ее структурного оформления. После применения димефосфона нами отмечались изменения в сосудистой системе органа. Так, под влиянием препарата происходила нормализация строения оболочек сосудов, признаков плазматического пропитывания стенок междольковых артерий и вен не выявляли. Кровенаполнение междольковых вен характеризовалось слабым наполнением, в отдельных случаях оно было умеренным. Как и у контрольных животных, стенка междолькового выводного протока была образована призматическим эпителием и собственной пластинкой, а в просвете протока выявлялось секретируемое вещество. Под влиянием димефосфона отме- чалась нормализация структурной организации ацинусов, которая проявлялась значительным снижением участков экзокринной части в дольках с деструкцией концевых секреторных отделов, а в самих ацинусах граница между панкреоцитамибыла более заметной. В междольковой соединительной ткани исчезали участки, оформленные скоплением жировых клеток. В ацинусах количество пан-креоцитов, образующих стенку концевого секреторного отдела, составляло 14,50±0,47, высота клеток равнялась 19,50 ± 0,62 мкм, а диаметр их ядра –6,43 ± 0,12 мкм. Эти метрические показатели ацинусов, панкреоцитов и их ядра, по сравнению с таковыми у контрольных животных обладали достоверностью (р<0,05) Под влиянием препарата происходило увеличение размеров концевых секреторных отделов, которое сопровождалось как повышением количества панкреоцитов, формирующих их стенку, так и собственных размеров этих клеток, что может свидетельствовать об активации митотического процесса в клетках и усилении обменных процессов в клетках ацинуса. Наибольший диаметр ацинуса составлял 70,67±1,7 мкм, а наименьший –59,17 ± 1,82 мкм, что являлось более высокими метрическими показателямиэтих структур у подопытных крыс, по сравнению с контрольными (р<0,05).Эндокринная часть долек поджелудочной железы у подопытных крыс, по сравнению с таковой у контрольных животных, в количественном отношении изменялась мало, так как в дольках по-прежнему выявлялись 1-2 панкреатических островка (рисунок 2), а в отдельных более мелких дольках также не наблюдались, как и в контроле.

Рисунок 2 - Крупные панкреатические островки (1) в дольке поджелудочной железы подопытной крысы после введения димефосфона. Окр. гемотоксилином и эозином.х200

Основные изменения этих структур железы были связаны с изменением их размера, так как панкреатические островки становились значительно крупнее, чем в контроле, инсулоциты в островках располагались более плотно, очень часто крупные панкреатические островки в дольке наблюдались вблизи друг от друга. Наибольший размер панкреатического островка в дольках составлял 181,00±10,14, наименьший – 148,00±10,87 мкм, а их размеры, по сравнению с таковыми у контрольных крыс, обладали статистически достоверным изменением (р<0,05).

Заключение. Таким образом , под влиянием димефосфонав дольках поджелудочной железы у крыс отмечаются изменения, связанные с нормализацией структурной организации ацинусов, снижением интенсивности проявления деструкции концевых секреторных отделов в дольках, нормализацией структурной организации междольковой соединительной тканис оформлением волокнистого компонента ткани иисчезновением отечности оболочек кровеносных сосудов, выявляемых в междольковой соединительной ткани. В эндокринной части долек железы отмечается уплотнение расположения инсулоцитов в панкреатических островках и уменьшение участков, заполненных прослойками рыхлой соединительной ткани, а кроме того, повышаются размеры самих островков, по сравнению с таковыми у контрольных животных, они становятся более крупными, что свидетельствует о возрастании количества эндокринных клеток в железе в целом.

Резюме

В статье описывается опыт применения димефосфона крысам и его влияние на поджелудочную железу. Димефосфон оказывает нормализующее влияние на микроструктуру экзо- и эндокринной частей долек железы, а также структурную организацию междольковой соединительной ткани и сосуды, проходящие в ней.