Морфометрические особенности селезёнки крыс периода предстарческих изменений под действием ксеногенной цереброспинальной жидкости

Макалиш Т.П. Морфометрические особенности селезёнки крыс периода предстарческих изменений под действием ксеногенной цереброспинальной жидкости// Морфологические ведомости.- 2017.- Том 25.- № 3.- С. 46-48. (25).03.46-48 For the citation:

Makalish TP. Morphometric features of the spleen of rats during the period of presenile changes under the influence of xenogeneic cerebrospinal fluid. Morfologicheskie Vedomosti – Morphological Newsletter. 2017 Sep 30;25(3):46-48. (25).03.46-48

Введение . Изучение иммунодепрессивных состояний актуально в медицине в настоящее время. Помимо экзогенных факторов, вызывающих ослабление иммунитета, существуют и естественные причины, такие как старение. В литературе широко описаны изменения в иммунной системе стареющих организмов на органном, клеточном и молекулярном уровнях [1-3]. Естественное угасание иммунитета в возрасте предстарческих изменений требует поиска иммунотропных препаратов, способных поддержать защитные силы организма. До настоящего времени исследовалось влияние различных иммуномодуляторов растительного, бактериального происхождения [4-5]. Среди возможных источников сырья животного происхождения для получения высокоэффективных иммунотропных препаратов можно рассматривать цереброспинальную жидкость, которая является гуморальной средой центральной нервной системы. Оптимальный физикохимический состав ликвора обеспечивает необходимые условия для нормального осуществления всех функций ЦНС [6].

Цель исследования – выяснить структурные особенности белой пульпы селезенки крыс периода предстарческих изменений после введения им ксеногенной цереброспинальной жидкости.

Материалы и методы исследования . Эксперимент проведен на 24 крысах линии Wistar обоих полов возрастом 18 мес. Все процедуры по уходу осуществляли в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием лабораторных животных». Всех животных разделили на 2 равные группы: контрольную и экспериментальную. Экспериментальную группу составили животные, получавшие внутримышечные инъекции ксеногенной цереброспинальной жидкости трех- и десятикратно каждые третьи сутки в дозе 2 мл/кг живого веса. Животным контрольной группы вводили физраствор внутримышечно в той же дозировке и кратности. Таким образом, количество животных в каждой подгруппе равнялось 6. На следующий день после последней инъекции животных декапитировали под эфирным наркозом, после чего селезенку взвешивали, измеряли линейные размеры (длина, ширина, толщина) и фиксировали в 10% растворе формалина. Для гистологических исследований кусочки селезенки, соответствующие воротам органа, проводили через спирты возрастающей концентрации, заливали в парафиновые блоки и изготавливали тонкие срезы толщиной 3–5 мкм с последующим окрашиванием их гематоксилином-эозином. Изучение гистоморфометрических параметров проводили методом сопоставления относительных площадей белой, красной пульпы и соединительнотканных компонентов (капсула, трабекулы), измеряли абсолютные площади лимфоидных узелков и относительные площади их зон (периартериальной, мантийной, маргинальной, герминативного центра). Для этих целей применяли морфометрический комплекс, включающий микроскоп Olympus BX-41 с объективами: Plan 4x ∞/-, Plan 10x x/0,25, цифровой фотоаппарат Olympus C 5050Z, персональный компьютер, с использованием программного обеспечения Image J

1,45s. Статистическую обработку данных проводили с помощью программы Statistica 10.0, используя методы описательной статистики и тест Стьюдента. Достоверными считали отличия при вероятности ошибки р≤0,05 (далее по тексту отмечено *).

Результаты исследования и обсуждение. У крыс возраста предстарческих изменений органы иммуногенеза подвергаются значительной возрастной инволюции, которая затрагивает все структурные компоненты селезенки. Наблюдалось увеличение относительной площади соединительнотканных элементов за счет трабекул и стенок сосудов (в частности центральных артерий), которая составила 4,76±0,37% от площади среза. Красная и белая пульпа распределились поровну. Красная пульпа была малокровна, с незначительным преобладанием эритроцитов над лейкоцитами. В 52% лимфоидных узелков (далее - ЛУ) имеются слабо просветленные герминативные центры (далее - ГЦ). Остальные узелки герминативных центров не имеют, однако их размеры достоверно не отличаются от вторичных ЛУ. Некоторые ЛУ имеют нечеткие границы зон, в том числе мантийной (далее - МнЗ) и маргинальной (далее - МгЗ); определить в них можно только центральную артерию и периартериальную зону (далее - ПЗ).

После трехкратного введения ликвора доля соединительнотканных элементов увеличилась до 5,51±0,45%, красная пульпа составила 57,91±1,92*% (больше контрольных значений на 22%), белая пульпа — 36,58±1,98*% (меньше таковой в контрольной группе на 24%). В 54% ЛУ имеют четко выраженные центры размножения. Другие зоны узелков также хорошо определяются. Их относительные площади достоверно увеличились в сравнении с контрольной группой. Исключение составила маргинальная зона (табл. 1), вследствие чего несколько уменьшился размер самих узелков. Так, площадь ЛУ в контрольной группе составила в среднем 198104,0±11388,85 мкм2. У крыс, получавших ликвор, это значение уменьшилось до 147153,0±11464,98* мкм2, в связи с чем диаметр узелков также стал меньше на 12,23%*. По мере течения эксперимента относительная площадь соединительнотканных элементов увеличивалась (5,46±0,40% от общей площади среза органа). Доля красной пульпы также увеличилась, а белой уменьшилась (63,92±1,53% и 30,64±1,55% соответственно).

На тридцатые сутки эксперимента после десятитикратного введения ликвора капсула селезенки так же уплотнена, трабекулы и стенки сосудов толстые и составляют 6,01±0,57% от площади среза. Красная пульпа малокровна, ее относительная площадь уменьшилась на 8,15%* (58,71±1,78% от площади среза), доля белой пульпы при этом возросла на 15% (35,29±1,90% от общей площади). ЛУ крупные, однако, лишь в трети случаев содержат герминативные центры, имеющие очень слабое просветление. Такие ЛУ размерами мало отличаются от ЛУ без просветленных центров. Можно предположить, что в таких узелках не проходят процессы пролиферации и дифференцировки лимфоцитов. Гиперплазия белой пульпы селезенки крыс предстарческого возраста, получавших ликвор десятикратно, отразилась увеличением размеров ЛУ, в основном за счет разрастания маргинальной зоны. При этом наружные границы этой зоны во многих случаях определялись плохо. Значение площади ЛУ в контрольной группе составило 172809,3±7326,00 мкм2, а после введения ликвора оно выросло до 197215,68±17114,71* мкм2. Соответственно площади на 2,63%* увеличился и диаметр ЛУ. Разрастание маргинальной зоны ЛУ на 31,89% сдвинуло соотношение между относительными площадями различных зон ЛУ. Относительные площади герминативых центров, периартериальной и особенно мантийной зон ЛУ в экспериментальной группе оказались ниже контрольных значений (табл. 2).

В период выраженных предстарческих изменений у животных наблюдается ослабление иммунной защиты организма в силу естественной инволюции органов иммуногенеза. Наблюдаемые нами процессы деградации белой и красной пульпы селезенки проявлялись уменьшением доли белой пульпы, уменьшением количества лимфоидных узелков, исчезновением в них центров размножения лимфоцитов и делимфатизацией различных зон ЛУ, в т.ч. маргинальной зоны. Это в полной мере соответствует данным литературы [1, 7]. Трехкратное введение ликвора крысам этого возраста вызвало некоторое торможение процессов возрастной инволюции, проявившееся бóльшим количеством ЛУ с центрами размножения, четкими границами зон, увеличением плотности клеток на 9,52% в лимфоидных узелках и на 6,87% в красной пульпе. Произведенный эффект можно объяснить высоким содержанием в ликворе цитокинов, гормонов (в том числе мелатонина) и факторов роста, которые, по мнению зарубежных авторов, играют вескую роль в процессах восстановления

Таблица 1

Относительные площади зон лимфоидных узелков белой пульпы селезенки крыс возраста предстарческих изменений после трехкратного введения КСЦЖ (%) (M±m)

*достоверность отличий оценивалась при помощи t-критерия Стьюдента, р≤0,05.

Таблица 2

Относительные площади зон лимфоидных узелков белой пульпы селезенки крыс возраста предстарческих изменений после десятикратного введения КСЦЖ (%) (M±m)

кратковременный иммуностимулирующий эффект, проявлявшийся инволюции органа. Десятикратное введение ликвора оказывает

иммунитета у стареющих организмов [2-3]. Многократное введение ликвора не остановило инволютивные процессы в селезенке, однако на их фоне рост относительной площади белой пульпы продолжался. Несмотря на увеличение размеров ЛУ, функциональное состояние белой пульпы несколько ухудшилось:   снова наблюдались процессы делимфатизации различных зон ЛУ (уменьшение плотности клеток в лимфоидных узелках на 28,33%*), границы зон узелка стали трудноразличимыми, значительно сократилось количество активных ЛУ с центрами размножения. В целом реакция лимфоидной ткани селезенки на введение КЦСЖ не противоречит таковой для других органов иммунной системы [8].

Заключение. Таким образом, можно заключить, что трехкратное введение ксеногенной спинномозговой       жидкости       оказывает временным замедлением процессов возрастной менее выраженный эффект и не препятствует инволютивным процессам в белой пульпе селезенки. В дальнейшем нами планируется изучить изменения в структуре селезенки после введения КЦСЖ на субклеточном уровне.