Морфометрия гепатоцитов на различных этапах развития цыплят-бройлеров кросса арбор айкрез

Ведение. Птицеводство является наиболее устойчивой и динамично развивающейся отраслью агропромышленного комплекса нашей страны, которая за короткий период сумела обеспечить население качественной мясной и яичной продукцией. В птицеводческих комплексах содержится большое количество птиц, которое необходимо рассматривать как совокупный биологический организм, требующий внимательного отношения к своему здоровью [5, 6]. В последние годы в мясном птицеводстве появляются новые кроссы цыплят-бройлеров, обладающих интенсивным ростом живой массы, такие как Арбор Айкрез. Особенности роста, развития и цитодиферинцировки внутренних органов у данного кросса мало изучены.

Важную роль в защите организма от экзогенных и эндогенных токсинов играет печень, которая, по мнению Л.И. Дроздовой (2010), является живой лабораторией оценки качества кормления и содержания птицы [1]. Морфологическая зрелость печени обеспечивает полноценное функционирование организма. Функция печени сложна и многообразна, орган обезвреживает экзогенные и эндогенные ксенобиотики, секретирует желчь и другие жизненно важные вещества (желчные кислоты, билирубин и холестерин, гормоны и ферменты, активно участвующие в пищеварении) [2-4].

Структурной единицей печени, как известно, является классическая печеночная долька, в центре которой расположена центральная вена, от которой радиально отходят ряды гепатоцитов. В печеночной дольке различают три зоны: перивенулярную, интермедиальную и перипор-тальную. Перипортальные гепатоциты отличаются от клеток перивенулярной зоны по ряду ключевых ферментов, рецепторов и субклеточных структур, в связи с чем имеют различные функциональные способности [7], что отражается на структуре и морфометрической характеристике гепатоцитов разных зон печеночной дольки. В условиях интенсивного воздействия на птицефабриках экзогенных факторов (высокоэнергетические корма, лекарственные препараты) важным является оценка возрастной динамики гепатоцитов в зависимости от расположения в классической дольке печени у цыплят-бройлеров кросса Аброр Айкрез.

В доступной нам литературе данных о возрастной динамике морфометрических показателей гепатоцитов у цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкрез мы не обнаружили.

Цель исследования : изучение морфометрических показателей гепатоцитов цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкрез на различных этапах развития.

Материалы и методы исследования. Исследование проводилось на кафедре анатомии, патологической анатомии и хирургии Красноярского государственного аграрного университета. С целью изучения возрастных микроструктурных особенностей гепатоцитов цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкрез были отобраны кусочки печени от цыплят семи возрастных групп: суточных, 7-, 14-, 21-, 28-, 35- и 42-суточных. Для гистологического исследования кусочки печени размером 0,5 на 0,5 см фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина, затем промывали под проточной водой, обезвоживали в спиртах возрастающей крепости и заливали в парафин. Гистологические срезы готовили на санном микротоме с электроприводом и микро- процессорным управлением МЗП-1 «Техом» и окрашивали гематоксилином и эозином. Микро-фотосьемку микропрепаратов проводили на три-нокулярном микроскопе Levenhuk. Морфометрию гепатоцитов различных зон печеночной дольки проводили с помощью программы Cito 2.0, выделяя перивенулярную, интермедиальную и пери-портальную зоны. Площадь гепатоцитов и их ядер высчитывали по формуле эллипса. Цифровые данные обрабатывали статистически с использование t-критерия Стьюдента.

Результаты исследования. Снаружи печень покрыта капсулой, от которой отходят прослойки междольковой соединительной ткани, что у цыплят-бройлеров развита слабо и видна лишь в области портальной триады, в области центральной вены соединительная ткань не видна, поэтому классическая долька на гистологических препаратах у птицы выражена слабо. Границы классической дольки печени у цыплят-бройлеров определяли по расположению портальной триады. Печеночная долька имеет полигональную форму, в ее центре располагается центральная вена безмышечного типа округлой или овальной формы, иногда в ней просматриваются овальной формы ядросодержащие эритроциты. У цыплят суточного возраста гепатоциты в печени расположены хаотично, печеночные балки не видны. С 7-суточного возраста на микропрепаратах печени цыплят-бройлеров видны радиально расположенные тяжи, со- стоящие из двух рядов гепатоцитов и формирующие в направлении от центральной вены к периферии три зоны: перивенулярную, интермедиальную и перипортальную (рис. 1). На границе печеночных долек видны портальные триады, включающие в себя междольковую вену, междольковую артерию и междольковый желчный проток. Самым крупным сосудом триады является вена, которая имеет самый больший диаметр, спавшийся просвет и слабо-выраженную медию. Интима вены портальной триады ровная, гладкая, выстлана эндотелио-цитами, медиа представлена гладкими миоцитами, наружная оболочка – слаборазвитой соединительной тканью.

Артерия триады имеет слабовыраженный просвет, интима извилистая, ядра эндотелиоци-тов выступают в просвет сосуда. Медиа представлена преимущественно пучком гладких миоцитов с примесью единичных эластических волокон, адвентиция развита умеренно. Желчный проток триады представляет собой сосуд мелкого диаметра, выстланный кубическим эпителием с округлыми крупными базофильными ядрами. На микропрепаратах печени цыплят-бройлеров в портальной триаде часто встречаются два желчных протока и две артерии.

Гепатоциты, входящие в состав печеночного тяжа, являются паренхиматозными элементами печени, у цыплят-бройлеров кросса Арбор Айк-рез они полигональной формы (рис. 2).

Рис. 1. Печень 7-суточного цыпленка. Печеночная долька: а - перивенулярная зона, б - интермедиальная зона, в - перипортальная зона (окраска - гематоксилин и эозин. Ув.: об. 10 *)

Рис. 2. Печень 21-суточного цыпленка (окраска гематоксилин и эозин. Ув.: об. 90*)

В печени суточных цыплят тяжи печеночных клеток не сформированы. На микропрепаратах печени имеются зоны с низкодифференцированными клетками и нечетко выраженными цитолеммами, но большая часть гепатоцитов име- ет границы, что позволило нам измерить их площадь. Установлено, что площадь гепатоцитов всех зон классической дольки печени с возрастом увеличивается. Данные представлены в таблице 1.

Таблица 1

Возраст цыплят, сут	Зона классической дольки печени			Среднее по всем зонам
	Перивенулярная	Интермедиальная	Перипортальная
1-е	22,16±0,83	23,75±2,66	24,58±1,16	23,66±1,06
7-е	32,13±1,38***	33,29±0,85**	30,18±1,20**	31,63±0,92***
14-е	42,27±2,35**	42,79±2,39**	44,50±2,64***	43,48±2,34***
21-е	40,26±2,15	45,40±1,31	40,94±1,88	40,26±2,15
28-е	44,05±2,45	44,05±2,45	43,00±2,07	42,56±1,35
35-е	52,40±3,17	44,83±2,72	47,36±4,14	47,87±2,60
42-е	38,90±4,23	47,47±1,52	47,30±2,10	45,58±1,33

Здесь и далее. Уровень достоверности различий каждой возрастной группы по сравнению с преды- дущей: *P < 0,05; ** P < 0,01; *** P < 0,001.

Динамика площади гепатоцитов в разных зонах печеночной дольки у цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкрез, мкм2

Как показали морфометрические исследования, в суточном возрасте площадь гепатоцитов у цыплят-бройлеров была наименьшей и по всем зонам составила в среднем 23,66±1,06 мкм2. С суточного до 7-суточного возраста птицы площадь гепатоцитов увеличилась по всем зонам в среднем на 33,69 % (Р < 0,001), с 7-суточного до 14-суточного возраста – на 37,46 % (Р < 0,001). В каждой возрастной группе площадь гепатоцитов в перивенулярной, интермедиальной и перипортальной зонах классической печеночной дольки не имела достоверных различий.

При окраске срезов печени цыплят-бройлеров гематоксилином и эозином ядра гепатоцитов имели овальную или округлую форму, окрашивались ярко базофильно, на фоне более бледной кариоплазмы просматривались 1–2 ядрышка, хроматин преимущественно сосредоточен у кариолеммы. Ядрышки в ядрах гепатоцитов более отчетливо визуализируются на 21-е сутки постэмбрионального развития.

Площадь ядра в гепатоцитах суточной птицы в среднем во всей печеночной дольке составила 7,81±0,32 мкм2 (рис. 2). К 7-суточному возрасту площадь ядра гепатоцитов достоверно увеличилась в перивенулярной зоне на 49,66 %, в интермедиальной зоне – на 35,81 %, в перипор-тальной – на 35,47%. В последующие возрастные периоды у цыплят-бройлеров достоверного увеличения площади ядер гепатоцитов не отмечалось.

Таблица 2

Возраст цыплят, сут	Зона классической дольки печени			Среднее по всем зонам
	Перивенулярная	Интермедиальная	Перипортальная
1-е	7,35±0,34	7,68±0,74	7,79±0,42	7,81±0,32
7-е	11,0±0,54***	10,43±0,50*	10,32 ±0,75*	10,58±0,41***
14-е	10,60±0,88	11,12±0,80	12,47±1,20	11,53±0,97
21-е	9,22±0,74	10,18±0,39	9,92±0,41н	9,22±0,77
28-е	9,50±0,68	9,50±0,68	10,14±0,53	9,57±0,33
35-е	11,59±0,67	9,80±0,57	10,83±0,74	10,72±0,49
42-е	9,86±0,98	10,57±1,38	10,41±1,01	10,68±1,21

Динамика площади ядра в разных зонах печеночной дольки у цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкрез, мкм2

У цыплят-бройлеров площадь цитоплазмы гепатоцитов достоверно увеличивалась с момента вылупления до 14-суточного возраста (табл. 3). Так, площадь цитоплазмы увеличилась с суточного до 7-суточного возраста на

39,24 %, с 7-го по 14-го возраста – на 45,68 %. В последующие возрастные периоды достоверного изменения площади гепатоцитов и цитоплазмы мы не выявили.

Таблица 3

Возраст цыплят, сут	Зона классической дольки печени			Среднее по всем зонам
	Перивенулярная	Интермедиальная	Перипортальная
1-е	14,78±0,57	16,17±1,94	16,46±0,88	15,80±0,81
7-е	22,91±0,86***	22,54±0,88*	21,67±1,69*	22,00±0,57***
14-е	31,73±1,95**	31,79±2,18**	32,47±2,18**	32,05±1,84***
21-е	31,00±1,62	36,22±1,17	30,92±1,88	31,00±0,62
28-е	34,54±1,87	34,54±1,87	32,79±1,86	32,69±0,79
35-е	40,74±2,85	35,42±2,40	35,36±3,00	37,91±2,65
42-е	32,63±1,17*	37,12±1,13	36,86±2,06	35,29±1,38

Динамика площади цитоплазмы в разных зонах печеночной дольки у цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкрез, мкм2

Ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО) – это важнейшая морфологическая характеристика, которая отражает отношение ядра к цитоплазме, характеризующая уровень об- мена веществ и степень дифференциации клеток [3]. Возрастная динамика ЯЦО у цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкрез представлена в таблице 4.

Таблица 4

Динамика ядерно-цитоплазматического отношения в зонах печеночной дольки у цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкрез

Возраст цыплят, сут	Зона классической дольки печени			Среднее по всем зонам
	Перивенулярная	Интермедиальная	Перипортальная
1-е	0,55±0,03	0,53±0,03	0,56±0,04	0,55±0,02
7-е	0,52±0,03	0,51±0,02	0,51±0,03	0,51±0,02
14-е	0,36±0,03**	0,41±0,04*	0,42±0,04	0,39±0,03**
21-е	0,32±0,02	0,31±0,02*	0,35±0,03	0,32±0,02
28-е	0,30±0,02	0,30±0,02	0,35±0,02	0,32±0,01
35-е	0,30±0,02	0,29±0,03	0,33±0,02	0,31±0,01
42-е	0,30±0,05	0,30±0,04	0,31±0,04	0,31±0,04

Нами установлено, что максимальное значение ЯЦО имело в гепатоцитах цыплят суточного возраста, которое составило 0,55±0,02, что является закономерным, поскольку высокие показатели ЯЦО свойственны молодым, малодифференцированным клеткам. Показатель ЯЦО в гепатоцитах птицы достоверно снижался во вторую неделю постэмбрионального развития на 23,53 % и достиг 0,39±0,03. По мере цитоди-ференцировки гепатоцитов происходит уменьшение ЯЦО, что свидетельствует об их дефинитивном созревании. Наиболее интенсивное снижение ЯЦО в гепатоцитах отмечается до 14-ти суточного возраста. К моменту убоя цыплят-бройлеров, т. е. к 42-м суткам выращивания птицы ЯЦО в гепатоцитах составило 0,31±0,04, что на 43,64 % ниже, чем в гепатоцитах цыплят суточного возраста.

Выводы. На основании проведенных исследований установлено, что рост и цитодифе-ренцировка гепатоцитов у цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкрез за период выращивания с суточного до 42-суточного возраста имеет ряд закономерностей. Наиболее интенсивный рост площади гепатоцитов во всех трех зонах печеночной дольки отмечается до 14-суточного возраста: в первую неделю увеличение площади гепатоцитов составило 33,69 %, во вторую неделю – 37,46 %. В первую неделю жизни наиболее интенсивно увеличивается площадь ядер гепатоцитов и достигает 10,58±0,07мкм2. Наибольшее снижение показателя ЯЦО, отражающего степень цитодиференцировки гепатоцитов цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкрез, отмечалось с 7-х по 14-е сут развития. Значимых различий в скорости роста площади ядер и цитоплазмы гепатоцитов в различных зонах классической дольки (перивенулярной, интермедиальной, перипортальной) не выявлено.