Неспецифическая профилактика осложнений стресса природными цеолитами

Стресс - генерализованная неспецифическая реакция организма, возникающая под действием различных факторов возмущающего характера (холод, физическая нагрузка, эмоциональное воздействие и др.), различной силы и длительности [10].

Одним из механизмов реализации и поддержания патохимических и патофизиологических реакций в условиях стресса является активация системы регуляции агрегатного состояния крови, вызываемая различными причинами и приводящая к образованию сериновой протеазы - тромбина. Последний, как известно, вызывает коагуляционные превращения фибриногена, активирует более ранние этапы плазмокоагуляции, фибринолиз, систему комплемента, антикоагуляционное звено, тромбоциты и изменяет реологию крови. В последние годы оценка реологических свойств крови и ее компонентов приобретают все большее значение для научно-исследовательской и клинической практики. [1,2, 7].

Широкое распространение патологических состояний, вызываемых реакцией напряжения [2] и проявляющихся тромбогеморрагическими осложнениями, требует поиска новых средств направленного воздействия на гемостаз.

Независимо от причины, обуславливающей ускорение постоянно протекающего внутрисосудистого свертывания, основным разрешающим фактором служит избыточное образование тромбина - сериновой протеазы, вызывающей коагуляционные превращения фибриногена, активацию клеток крови и прокоагулянтов [5, 6].

Усилия гемостазиологов до настоящего времени в большей степени были направлены на борьбу с последствиями усиленного тромбиноге-неза - в клинической практике широко используются различные формы гепарина, обладающие прямым антикоагулянтным эффектом, и ингибиторы синтеза витамин К-зависимых факторов свертывания [8].

В исследованиях, проведенных за последние десятилетия, показана возможность снижения угрозы тромбообразования с помощью неспецифических воздействий, в частности, антиоксидантами из группы витаминов [3]. Профилактическое использование антиоксидантов ограничивает запредельное ускорение постоянно протекающего свертывания крови до рамок ДВС-синдрома в условиях эксперимента и клиники.

Тромбинемия индуцирует гуморальный ответ эндокринных структур, способствуя изменению содержания в кровотоке гормонов стрессорного ряда. Таким образом, тромбинемию следует рассматривать в качестве универсального стресс-реализующего фактора, ограничением которого можно изменить реакции организма на стресс-воз-действия.

Перспективными соединениями для использования в таких целях могут служить естественные природные цеолиты VII минералогической группы, обладающие рядом положительных биологических эффектов [3,4].

Целью наших исследований явилось изучение влияния природных цеолитов на коагуляционный потенциал при тромбинемии, вызываемой стресс-воздействиями.

Материалы и методы

Эксперименты проводились на половозрелых самцах беспородных крыс массой 220-400 г. Животные содержались на полноценном рационе с оптимальным соотношением белков, липидов и углеводов, в составе суточных порций, которого, вводили природные цеолиты в виде порошка в дозе 0,25 г/кг массы тела. Дозы цеолитов были рассчитаны, исходя из рекомендаций для человека, и не являлись токсичными. Интактные и контрольные животные получали диету без добавок. Пробы крови отбирали из яремной вены. Экзогенную тромбинемию моделировали введением в яремную вену раствора тромбина. В день эксперимента контрольной и опытной группам в ярем- ную вену вводили тромбин («Технология - стандарт») в дозе 0,167 NIH ед./кг массы, который предварительно растворяли в 0,85 %-ном растворе NaCl. Крысам интактной группы вводили соответствующий объем физиологического раствора. Пробы крови забирали через 0,5 и 1 ч после воздействия. Эвтаназию осуществляли путем декапитации под эфирным наркозом.

Эндогенную тромбинемию моделировали комбинированным стрессом, вызываемым физической нагрузкой («свободное плавание» в течение 30 минут) и холодовым фактором (температура воды +15 °C). Пробы крови отбирали из яремной вены до воздействия, а также спустя 0,1, 1, 3, 6 часов после проведения комбинированного стресса.

Ишемию создавали пережатием магистрального сосуда в течение 4 минут. Кровь для коагулоло-гических исследований стабилизировали 3,8 % раствором цитрата натрия в соотношении 9:1 и, в ряде случаев, гепарином. Отбор проб, их последующая обработка, в том числе получение бедной тромбоцитами плазмы, соответствовали требованиям, принятым для коагулологических исследований.

Для оценки состояния плазмокоагуляции определяли активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), тромбиновое время (ТВ), содержание фибриногена, антитромбина - III и растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ).

Результаты исследований и их обсуждение

Введение тромбина контрольным животным уже через 0,5 ч привело к развитию диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС): снижение ПТИ, удлинение АЧТВ и ТВ, гипофибриногенемия (рис. 1), тромбоцитопения потребления, прирост содержания активированных форм тромбоцитов и тромбоцитарных агрегатов. Через 1 ч признаки запредельной активации тромбоцитов и коагулопатии потребления ослаб лялись, но не достигали показателей интактной группы.

У животных, получавших цеолиты, интенсивность развития ДВС крови была выражена в заметно меньшей степени, чем в контроле (ослабление коагулопатии, тромбоцитопении, прироста активированных клеточных форм). На этом фоне возросла толерантность животных к введению тромбина и увеличилась скорость нормализации показателей плазменного и тромбоцитарного гемостаза.

При экзогенной тромбинемии через 0,1 ч после воздействия у животных контрольной группы наблюдалась существенная интенсификация тром-биногенеза, проявляющаяся ускорением непрерывно протекающего свертывания крови на уровне ДВС I—II стадии. На 135 % выросла концентрация РКМФ, заметно укоротилось тромбиновое время - на 23 %, увеличилась концентрация фибриногена (43 %), что может быть связано с уменьшением объема циркулирующей плазмы. Одновременно произошло интенсивное потребление антитромбина-Ш и удлинение АЧТВ (рис. 2). Последнее, на наш взгляд, объясняется ускоренным потреблением факторов внутреннего пути активации протромбиназы в ответ на развивающуюся катехоламинемию.

К 1 ч в еще большей степени выросло содержание маркеров тромбинемии (РКМФ), фибриногена, произошло удлинение тромбинового времени (рис. 3) в согласовании с приростом содержания антитромбина-Ш. Время образования фибринового сгустка в тесте АЧТВ существенно укоротилось, но не достигло показателей интактного контроля. Схожие результаты обнаружились к 3 ч после воздействия. Лишь к 6 часу нормальных значений достигли показатели тромбинового времени, а содержание фибриногена и РКМФ превышало исходную норму.

Рис. 1. Изменения содержания фибриногена у животных, получавших и не получавших природные цеолиты, в различные сроки после введения тромбина

Рис. 2. Динамика изменения содержания АЧТВ у животных, получавших и не получавших природные цеолиты, в различные сроки после комбинированного («холодового-водоплавающего») стресса

Никулина Е.Г.

Неспецифическая профилактика осложнений стресса природными цеолитами

Рис. 4. Динамика изменения содержания АТ-HI у животных, получавших и не получавших природные цеолиты, в различные сроки после комбинированного («холодового-водоплавающего») стресса

Рис. 3. Динамика изменения содержания тромбинового времени у животных, получавших и не получавших природные цеолиты, в различные сроки после комбинированного («холодового-водоплавающего») стресса

Таблица

Показатели	Интактный контроль	Контроль с ишемией	Интактные цеолиты	Цеолиты с ишемией
Количество Тц	1004,8 ±9,6	1241,3 ±26,3	1006,7 ± 4,3	1047,9 ± 14,3
Дискоциты, %	54,5 ± 1,7	34,3 ± 1,8	58,0 ± 0,7	46,6 ± 0,5
Активированные формы, %	45,5 ± 1,7	65,7 ± 1,8	42,0 ±0,7	53,4 ± 0,5
Малые агрегаты (на общее число клеток)	1,8 ±0,3	1,1 ±0,1	1,3 ±0,2	0,7 ± 0,2
Большие агрегаты (на общее число клеток)	0,1 ±0,1	1,0 ±0,2	0,1 ±0,1	0,6 ± 0,2
РКМФ, мг/100 мл	3,0 ±0,1	10,0 ±2,0	3,0 ±0,1	4,5 ± 0,7
ТВ, с	19,7 ±0,6	52,1 ±2,2	22,0 ± 1,0	31,5 ±0,6
АТ-Ш, %	148,3 ± 0,9	160,3 ± 1,4	146,7 ± 0,4	153,2 ±0,7
ТПВ, с	16,2 ±0,3	11,7 ±0,3	16,1 ±0,3	14,5 ± 0,3

Оценивая в целом динамику отдельных показателей, отметим следующее: стресс-воздействие в течение всего наблюдаемого времени вызвало у животных, не получавших цеолиты, стойкий прирост содержания фибриногена и РКМФ, «волнообразное» изменение показателей клоттинговых тестов (АЧТВ и тромбинового времени) и уровня антитромбина-Ш.

У животных, получавших цеолиты, последствия стресс-воздействия были выражены в гораздо меньшей степени. Через 0,1 ч уровень РКМФ не превышал контрольные значения, что наблюдалось и в течение всего эксперимента. Содержание фибриногена незначительно возросло к 0,1 ч, однако в последующем его прироста не наблюдалось. АЧТВ к 0,1 ч увеличилось лишь на 30 %, а в дальнейшем не отличалось от показателей контроля. Тромбиновое время к 0,1 ч незначительно укоротилось (на 9,6%), а в последующем возвратилось к показателям нормы, и лишь к 6 ч вновь снизилось.

В отличие от контрольных животных, содер жание антитромбина-Ш постепенно возрастало (рис. 4) и возвращалось к норме к 6 ч, т. е. эндогенная тромбинемия не приводила к значительному потреблению данного антикоагулянта, что свидетельствует (как и показатель РКМФ) о меньшей интенсивности тромбиногенеза.

Ишемия, создаваемая пережатием магистрального сосуда, привела у контрольных животных к приросту количества тромбоцитов и их активации: содержание дискоцитов снизилось на 37 %. Наблюдались и другие признаки развивающегося ДВС-синдрома: укорочение тромбопластинового времени, существенное удлинение тромбинового времени, прирост антитромбиновой активности и РКМФ.

У животных, получавших цеолиты, перечисленные сдвиги были выражены достоверно в меньшей степени (см. таблицу). Это подтверждает результаты предыдущих экспериментов, свидетельствующих о том, что изучаемые цеолиты позитивно изменяют толерантность животных к тромбинемии.

Заключение

Анализируя результаты исследований, мы пришли к убеждению, что цеолиты обладают свойствами, обеспечивающими повышение защитного ответа на действие эндогенных факторов, способных трансфертировать стрессовую ситуацию в реакцию защитного характера и реализовывать комплекс адаптивных механизмов.

Результаты настоящего исследования подтверждают полученные ранее в нашей лаборатории данные о том, что природные цеолиты оказывают протективное влияние на биохимический и клеточный компоненты гемостаза в условиях диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови.

Дополнительное введение природных цеолитов повышает толерантность животных к эндогенной тромбинемии, что проявляется ограничением вызываемых гемокоагуляционных сдвигов и сокращением периода их нормализации, т. е. реализуется за счет изменения коагуляционного потенциала.