О лечении экспериментального афлатоксикоза белых крыс

В Российской Федерации и в целом мире значительная часть производимого зерна загрязнена микотоксинами, которые не только отрицательно влияют на организм животного, существенно снижая продуктивность и качество получаемой продукции, но и представляют серьезную опасность для человека (Л.У. Витлоу, У.М. Хеглер, 2002; В.А. Антипов, 2005; А. Гогин, 2005; И. Рябчик, 2009; С. Гулюшин и др., 2009).

В последние годы в связи с изменениями климата, ухудшением экологической обстановки на территории РТ увеличилась контаминация кормов токсигенными штаммами Aspergillus flavus, продуцирующими афлатоксин. Этим объясняется потенциальная и реальная угроза возникновения афлатоксикоза.

Для лечения и профилактики микотоксикозов в большинстве случаев используют различные сорбенты. В тоже время в литературе имеются сведения об эффективности пробиотических микроорганизмов при некоторых микотоксикозах (А.И. Нигматуллин, 2002; Н.В. Петрова, 2004).

В ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» из кишечника телят выделен и идентифицирован изолят Bifidumbacterin bifidum-2010, обладающий антагонистическими свойствами в отношении патогенных микроорганизмов: E. coli, Sal. typhimurium, St. aureus.

Целью наших исследований явилась оценка терапевтического эффекта Bifidumbacterin bifidum-2010 при экспериментальном афлатоксикозе белых крыс.

Материалы и методы исследований. Для определения лечебной эффективности пробиотической культуры Bifidumbacterin bifidum-2010 при экспериментальном афлатоксикозе было сформировано две группы крыс обоего пола, живой массой 180-200 г, по 20 в каждой. В течение 7 суток крысам обеих групп задавали корм искусственно контаминированный афлатоксином В 1 в количестве 0,4±0,02 мг/кг. На 8-е сутки всех животных переводили на обычный рацион.

Крысам первой группы вводили внутрижелудочно культуру Bifidumbacterin bifidum-2010 в дозе 1 мл (1 млрд. микр. кл. в 1 мл), вторая группа служила контролем - в аналогичной дозе вводили физраствор.

Забор крови и анализ кишечной микрофлоры проводили на 7-й , 14й и 21-й день эксперимента, в те же сроки проводили взвешивание животных.

Количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, лейкоцитарную формулу определяли по методике, описанной Кудрявцевым А.А. и соавт., 1974. Фагоцитарную активность нейтрофилов в периферической крови определяли по методике Кост и Стенко (1967).

Остаточное количество афлатоксина в печени определяли методом тонкослойной хроматографии (ТСХ), с подтверждением хроматомассспектрометрией.

Содержание в фекалиях бифидо- и молочнокислых бактерий и их количество определяли методом последовательных разведений в стерильном изотоническом растворе натрия хлорида с последующим посевом каждого разведения на специальные питательные среды согласно методики, описанной Г.И. Гончаровой (1970).

Полученные данные подвергались статистической обработке, с применением критерия достоверности по Стьюденту.

Результаты исследований. По результатам проведенных исследований установлено, что на 5-е сутки введения афлатоксина В₁ у 30% животных как контрольной, так и опытной групп отмечалось угнетение, снижение пищевой возбудимости, тусклость и взъерошенность шерстного покрова, нарушение координации движения и функций желудочно-кишечного тракта, снижение массы тела.

В динамике эксперимента у крыс в опытной группе на 5-6 день введения препарата наблюдалось значительное улучшение показателей клинического статуса крыс: восстановилась пищевая возбудимость, исчезали угнетение и взъерошенность шерстного покрова, нормализовались функции желудочно-кишечного тракта.

Средняя живая масса белых крыс, получавших Bifidumbacterin bifidum-2010 к 7-м суткам опыта была на 4,9% выше по сравнению с контрольной группой, так на 14 сут опыта увеличилась на 12,6%, на 21 сут - на 24,5% (P<0,01) соответственно.

При определении гематологичеких показателей на фоне применения пробиотической культуры Bifidumbacterin bifidum-2010 в опытной группе наблюдали увеличение общего количества эритроцитов на 7, 14 и 21-е сутки на 3,2; 9,5 и 15,3% (P<0,05) при одновременном снижении общего количества лейкоцитов на 6,4; 14,3 и 20,1% (P<0,01), соответственно. Что свидетельствует об уменьшении воспалительного процесса в организме.

На фоне применения пробиотической культуры Bifidumbacterin bifidum-2010 у животных опытной группы достоверно увеличилось количество гемоглобина на 8,3; 10,8 и 23,9% (P<0,01), соответственно.

В лейкограмме прослеживалось уменьшение количества нейтрофилов на 9,5; 15,4 и 23,1%, увеличение до нормы количества эозинофилов, что свидетельствует об уменьшении интоксикации и является благоприятным фактором при наличии воспалительных явлений в организме. Количество лейкоцитов значительно уменьшилось в опытной группе на 31,6; 58,3 и 64,1% (P<0,001), что характеризует иммуностимулирующее и иммуномодулирующее действие бифидумбактерий.

Менее выраженные изменения произошли в контрольной группе. Число эозинофилов сохранилось на нижней границе нормы, сумма лейкоцитов достоверно выше, чем в опытной группе.

Содержание общего белка в сыворотке крови крыс опытной группы увеличилось на 7, 14 и 21 сутки на 9,1; 14,7 и 25,5% (P<0,01), соответственно.

Фагоцитарная активность на 7-е сутки достоверной разницы не имела и находилась в пределах 33,1-34,7% (P<0,01). К 14-м суткам в опытной группе данный показатель изменился с тенденцией к увеличению на 3,6%. При этом, он был достоверно выше, чем в контрольной и составил 42,7% (P<0,001). Наибольшую фагоцитарную активность имела кровь крыс опытной группы на 21-е сутки и составила 51,8% (P<0,001), в контрольной группе - 42,5% (P<0,001).

При хроматографическом исследовании образцов печени подопытных животных установлена тенденция к снижению количества афлатоксина на 7 и 14 сут на 15,2 и 33,4% (P<0,001), соответственно.

Проведенный анализ состава кишечной микрофлоры свидетельствовал о том, что после применения пробиотической культуры Bifidumbacterin bifidum-2010 увеличивалось количество основных представителей нормофлоры кишечника: бифидумбактерий - на 25,7% (P<0,01), лактобактерий - на 21,3% (P<0,01). В контрольной группе -количество лакто- и бифидобактерий было достоверно ниже, практически преобладала условно-патогенная микрофлора.

Результаты проведенных нами клинических, гематологических, биохимических, хроматографических исследований печени, а также данных состава кишечной микрофлоры, свидетельствуют о положительных тенденциях состояния организма после применения в качестве лечебного средства при афлатоксикозе культуры Bifidumbacterin bifidum-2010.

ЛИТЕРАТУРА: 1 . Антипов, В.А. Микотоксикозы животных и птиц на Кубани / В.А. Антипов, В.Ф. Васильев, Т.Г. Кутищева // Материалы Международного симпозиума. - Часть I. - Казань. – 2005. - С. 42-47. 2.Витлоу, Л.У. Микотоксины в кормах / Л.У. Витлоу, У.М. Хеглер Мл.// Перепечатка из журнала Feedstuffs (Корма) от 10 июля 2002г. 3. Гулюшин, С. Микотоксикозы в современном птицеводстве / С. Гулюшин, Н. Садовникова, И.Рябчик // Комбикорма - № 5 – 2009. – С. 72-73. 4.Гогин, А. Микотоксины: эффективный контроль эффективное производство / А. Гогин // Комбикорма - № 2 - 2005 - С. 68. 5.Кудрявцев, А.А. Клиническая гематология животных / А.А Кудрявцев, Л.А. Кудрявцева // М.: Колос, 1974. – 399 с. 6.Нигматуллин, А.И. Фармако-токсикологическое обоснование использования пробиотика «Энтероспорина» при микотоксической диарее телят / А.И. Нигматуллин // Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. – Казань, 2002. – 119 с. 7.Петрова, Н.В. Фармако-токсикологическое и биологическое обоснование применения пробиотика энтероспорин при микотоксической диарее поросят: Автореф. Дисс. канд. биол. наук / Н.В. Петрова. - Казань, 2004. - 23с. 8.Рябчик, И. Профилактика хронических микотоксикозов / И. Рябчик // Птицеводство. - №4. - 2009. - С.45.

О ЛЕЧЕНИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО АФЛАТОКСИКОЗА БЕЛЫХ КРЫС

Шамилова Т.А., Матросова Л.Е., Тремасова А.М.

Резюме

Приведены результаты клинических, гематологических, биохимических, хроматографических исследований печени, а также данных состава кишечной микрофлоры при лечении экспериментального афлатоксикоза белых крыс с помощью культур Bifidumbacterin bifidum-2010.

ABOUT TRITMENT OF EXPERIMENTAL AFLATOXICOSIS WHIT RATS

Shamilova T.A., Matrosova L.Ye.,Tremasova A.M.