Обеспечение сохранности антигенных и генетических свойств штаммов возбудителей бруцеллёза

Бруцеллез - зоонозная инфекция , вызываемая бактериями , объединёнными под общим родовым названием Brucella, которые передаются человеку от больных животных (2). По различиям некоторых биологических свойств и способности паразитировать преимущественно в организме определённых видов животных ( главным образом по эпизоотологическим и эпидемиологическим признакам ) род «Brucella» подразделён на 6 видов : B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. neotome, B. ovis, B. canis .(1)

Бруцеллёз является одной из особо опасных инфекционных болезней, наносящих значительный экономический ущерб животноводству и представляющих большую угрозу здоровью человека. В России бруцеллёз регистрируется у сельскохозяйственных и домашних животных (крупный рогатый скот, овцы, козы, северные олени и др.).

На сегодняшний день установлено , что основная передача возбудителя от больных животных здоровым происходит при контаминации бруцеллами объектов окружающей среды за счёт выделений больных животных (3, 4).

Важнейшим и перспективным методом борьбы с инфекционными болезнями является иммунопрофилактика . Опыт 50- летней борьбы с бруцеллёзом в РФ также доказывает исключительную роль специфической профилактики (6).

Известно , что при формировании противобруцеллёзного иммунитета антителам принадлежит не ведущая , а вспомогательная роль , которые в создании противобруцеллёзного иммунитета никакого участия не принимают (5).

Одним из важнейших противобруцеллёзных мероприятий является диагностика болезни .

Производство диагностических и вакцинных препаратов требует сохранять стабильность антигенных и генетических свойств эталонных , производственных и музейных штаммов возбудителей бруцеллеза .

В этих целях необходимо периодическое освежение , оценка антигенных и генетических свойств согласно методикам , рекомендованным ФАО / ВОЗ (1993 г .).

Материалы и методы . Нами была проведена проверка условий хранения штаммов возбудителей бруцеллеза , пересчет количества ампул с лиофилизированной микробной массой . При этом обращали внимание на целостность ампул и сохранность этикеток . Все штаммы хранятся в металлических контейнерах в холодильниках при температуре + 4 + 6⁰ С , проверенные ампулы сохранили целостность .

Изучение культурально - морфологических , тинкториальных , биохимических и агглютинабельных свойств штаммов бруцелл проводили по методикам , рекомендованным ФАО / ВОЗ , 1993 г .

Для изучения были взяты следующие штаммы бруцелл :

• -    B. abortus: 163, 316, 15, 208 и НИВИ Казань -86;

• -    B. melitensis: 498- Т , 356, 2503 и Кожевников ;

• -    B. rangiferi: 0277, 030, 0315;

• -    B. suis: 1908, 12, 002, 4;

Культивирование бруцелл проводили с использованием мясо пептонного печеночного глюкозо - глицеринового бульона ( ППГГБ ), мясо пептонного печеночного глюкозо - глицеринового ( ППГГА ) и триптозного агара .

Взятые для изучения ампулы с возбудителями бруцеллеза вскрывали, суспендировали содержимое в 1 мл ППГГБ и проводили посев в пробирки с агаром. Для изучения соответствия свойств бруцелл паспортным данным использовали 2-х суточные культуры бруцелл 2 и 3 генерации.

Штаммы возбудителя бруцеллеза проверяли на диссоциацию в реакции агглютинации на стекле со специфическими сыворотками , термоагглютинацией , пробой с акрифлавином и методом Уайт - Вилсона . Результаты исследований приведены в таблице 1.

1. Диссоциация штаммов бруцелл

№ п / п	Наименование штамма	РА с сывортками		Проба с акрифла вином	Термо агглютинация
		S - сыворотка	R - сыворотка
1	B. abortus 163	+	–	–	–
2	B. abortus 316	+	–	–	–
3	B. abortus 15	+	–	–	–
4	B. abortus 208	+	–	–	–
5	B. abortus НИВИ Казань - 86	+	–	–	–
6	B. melitensis 498- Т	+	–	–	–
7	B. melitensis 356	-	+	–	+
8	В . melitensis 2503	+	–	–	–
9	B. melitensis Кожевников	+	–	–	–
10	B. rangiferi 0277	+	–	–	–
11	B. rangiferi 030	+	–	–	–
12	B. rangiferi 0315	+	–	–	–
13	B. suis       1908	+	–	–	–
14	B. suis       12	+	–	–	–
15	B. suis       002	+	–	–	–
16	B. suis       4	+	–		–

Из таблицы 1 видно , что все штаммы бруцелл , кроме штамма B. melitensis 356, не имеют признаков диссоциации , находятся в S- форме . Штамм B. melitensis 356 имеет такие реакции согласно паспортным данным и является R- формой .

Дальнейшие исследования проводили, отбирая S-формы колоний бруцелл методом Уайт-Вилсона. Для этого готовили 1 млрд. взвесь бруцелл на стерильном физиологическом растворе согласно отраслевому стандартному образцу мутности ГИСК им. Тарасевича с последующим разведением до 10 6 и 105 м.к., которую рассевали по 0,2 мл на чашки Петри с триптозным агаром. Четырех -, пяти - суточные колонии заливали раствором кристаллического фиолетового на 30 сек, затем краситель сливали в дезинфицирующий раствор, а колонии просматривали под микроскопом. S-колонии - краситель не воспринимают или имеют только ободок красителя, а колонии находящиеся в R-форме - окрашиваются в фиолетовый цвет. Колонии S-форм отсевали на пробирки с ППГГА, в случае со штаммом B. melitensis 356, отсевали R-формы колоний.

Агглютинабельные свойства штаммов бруцелл исследовали в РА с антибруцеллезными «S», «R» и моноспецифическими « А », « М » сыворотками .

Для проверки видоспецифических признаков штаммов бруцелл были проведены посевы на питательные среды с анилиновыми красителями : фуксином ( в разведении 1:50 тыс .; 1:100 тыс .) и тионином (1:25 тыс .; 1:50 тыс .; 1:100 тыс .).

Кроме того , проводились тесты на образование сероводорода . Приготавливали 2- х млрд . взвесь двухсуточной культуры , которую засевали на поверхность скошенного агара ( ППГГА ). В пробирки с испытуемыми культурами поместили подсушенные полоски фильтровальной бумаги с насыщенным раствором уксуснокислого свинца .

Результаты исследований . Результаты биохимических исследований штаммов представлены в таблице 2.

2. Биохимические и серологические свойства изучаемых культур

№ п / п	Наименование штаммов Brucella	Обра зов . H 2 S	РА с сыворотками				Рост на средах с красками
			антбруцел лезные		моноспе - цифические		фуксин		тионин
			S	R	A	M	1:50	1:100	1:25	1:50	1:100
1	B. abortus 163	-	+	-	+	-	+	+	-	-	-
2	B. abortus 316	+	+	-	+	-	+	+	-	-	-
3	B. abortus 15	+	+	-	+	-	+	+	-	+	+
4	B. abortus 208	+	+	-	+	-	+	+	-	-	-
5	B. abortus НИВИ Казань -86	+	+	-	+	-	+	+	+	+	+
6	B. melitensis 498 Т	-	+	-	-	+	+	+	+	+	+
7	B. melitensis 356	-	-	+	-	-	+	+	+	+	+
8	В . melitensis 2503	-	+	-	-	+	+	+	+	+	+
9	B. melitensis Кожевников	-	+	-	-	+	+	+	+	+	+
10	B. rangiferi 0277	+	+	-	+	+	-	+	-	-	+
11	B. rangiferi 030	+	+	-	+	+	+	+	+	+	+
12	B. rangiferi 0315	+	+	-	+	+	+	+	+	+	+
13	B. suis 1908	+	+	-	+	-	+	+	+	+	+
14	B. suis 12	-	+	-	+	+	-	+	+	+	+
15	B. suis 002	-	+	-	+	+	-	+	+	+	+
16	B. suis 4	-	+	-	+	+	-	+	+	+	+

Обозначение « + » указывает на очень слабый рост . Все изученные свойства , приведенные в таблице 2, соответствуют паспортным данным .

По окончании исследований нами проведена лиофилизация микробной массы бруцелл в сахарозо - желатиновой среде . После лиофилизации каждый штамм проверили на жизнеспособность и чистоту популяции . Все ампулы запаяли , этикетировали и заложили на хранение согласно описи .

Выводы . Изучены жизнеспособность , тинкториально - морфологические , культурально - биохимические и агглютинабильные свойства 16 штаммов бруцелл , установлено соответствие их паспортным данным . Эти штаммы освежены , размножены , лиофилизированы , вновь проверены на жизнеспособность и однородность популяции и заложены на хранение .

ЛИТЕРАТУРА : 1. Вершилова , П . А . Бруцеллёз / П . А . Вершилова . - М ., 1972. 2. Вершилова , П . А . Патогенез и иммунология бруцеллёза / П . А . Вершилова , М . И . Чернышева , Э . Н Князева . - М ., 1974. - 6 с . 3. Григорьева , Г . И . Бруцеллы и бруцеллёз / Г . И . Григорьева , В . В Сочнев , Н . П . Бацанов , Н . В Филиппов и др // Микробиология , иммунология , биотехнология . - Н . Новгород : Нижегородская гос . с .- х . академия , 1998, 10 - с . 4. Иванов , Н . П . Бруцеллёз животных и меры борьбы с ним / Н . П . Иванов / 2- е изд . Испр ., доп . - Алматы , 2007, 11 - с . 5. Плотникова , Э . М . Разработка тест - систем на основе био - и нанотехнологий при бруцеллёзе / Э . М . Плотникова , Е . В . Панкова . Материалы Международной научно - практической конференции « От теории - к практике : вопросы современной ветеринарии , биотехнологии и медицины ». - Саратов , 2011, 221 - 225 - с . 6. Триленко , П . А . Бруцеллёз сельскохозяйственных животных / П . А . Триленко .- Л ., 1976, 96 - с .

ОБЕСПЕЧЕНИЕ СОХРАННОСТИ АНТИГЕННЫХ И ГЕНЕТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ШТАММОВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БРУЦЕЛЛЁЗА

Панкова Е . В .

Резюме

Изучены жизнеспособность , тинкториально - морфологические , культурально - биохимические и агглютинабильные свойства 16 штаммов бруцелл , эти штаммы освежены , размножены и лиофилизированы .

STORAGE CONDITION SUPPLY OF BRUCELLOSIS STRAIN’S ANTIGENIC AND GENETIC FEATURES

Pankova E.V.