Обоснование ресурсосберегающих технологий получения лекарственных средств на основе кассии

Муркина Евгения Владимировна, студентка

«Листья сенны» включает лишь пробирочные реакции [1], хотя одним из перспективных методов определения подлинности сырья, используемых за рубежом, является тонкослойная хроматография [8, 10, 11]. Методика количественного определения суммы антраценпро-изводных в листьях кассии, включенная в фармакопейную статью на данное сырье [1] имеет ряд недостатков: является громоздкой, многостадийной и небезопасной, включающей такие стадии, как кислотный гидролиз, многократную экстракцию сырья, обработку диэтиловым эфиром – легкокипящим огнеопасным растворителем. Кроме того, в методике используется фотоэлектроколориметрия, предусматривающая измерение оптической плотности при аналитической длине волны около 523 нм, а расчет содержания суммы производных антрацена осуществляется с использованием построения громоздкого калибровочного графика раствора кобальта хлорида в пересчете на хризофановую кислоту. Целесообразность внедрения новых современных методов анализа связана еще и с тем, что для подходов к анализу не в полной мере используется все разнообразие фитохимического состава сырья кассии.

На наш взгляд, является совершенно неоправданным игнорирование, как по содержанию, так и по вкладу в фармакологическое действие флавоноидов, главным образом, производных кемпферола и изорамнетина. Кроме того, в соответствии с этим в зарубежных фармакопеях в качестве методов анализа используются хроматография и спектрофотометрия, однако и в этом случае необоснованно громоздко выглядит методика количественного определения суммы антраценпроизводных, тем более, что сырье листьев кассии имеет богатый состав.

Цель исследований: разработка методологических подходов к стандартизации сырья в плане обоснования необходимости разработки новых методик качественного и количественного определения антраценпроизводных.

Материалы и методы. Фитохимические исследования выполнялись с использованием традиционных и современных инструментальных методов физико-химического анализа (тонкослойная хроматография, спектрофотометрия) в сочетании с экстракционными методами при выполнении технологической части работы. В ходе проведенных исследований нами был изучен в сравнительном плане компонентный состав промышленных образцов сырья (ПКФ ООО «Фитофарм» Краснодарского края, ОАО «Красногорлексредства» и др.), при этом анализировались как полученные нами в лабораторных условиях образцы настоек, так и препараты на основе кассии («Сена-де», «Сенадексин»). В ходе разработки подходов стандартизации суммы антраценпроизвод-ных в листьях кассии нами изучены УФ-спектры водно-спиртовых извлечений из изучаемых видов растительного сырья. Регистрацию спектров проводили с помощью спектрофотометра Specord 40 (Analytik Jena).

Для качественного метода анализа как сырья, так и препаратов на основе кассии, нами предлагается тонкослойная хроматография (пластинки «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ»); оптимальной системой растворителей, на наш взгляд, является хлороформ-этанол-вода в соотношении 26:16:3. Результаты оценивались при просмотре хроматограмм в УФ-свете при длине волны 254 и 366 нм, а также после проявления щелочным раствором и раствором диазобензолсульфокислоты. При этом на хроматограмме обнаруживается пятно антраценпро-изводного, однако доминирующим компонентом листьев кассии являются флавоноиды, выделенные и идентифицированные нами как кемпферол-3-O-софорозид и производные изо-рамнетина (рис. 1). На наш взгляд, это может быть успешно применено для целей стандартизации, как качественного, так и количественного определения. Этот вывод подтверждает и данный УФ-спектр, с помощью которого можно определить, что значительный вклад в кривую поглощения водно-спиртового извлечения вносят флавоноиды (λ max около 270 нм).

Пластина "Сорбфил ГГГСХ-АФ-А-УФ" хлороформ:этанол:вода (26 16:3)

О О О О О о о о о о

® ® @ ® ®

Рис. 1. Схема хроматограммы ТСХ-анализа извлечений из лекарственного растительного сырья и препаратов кассии:

1 – препарат «Сенадексин» (растворитель-вода); 2 – препарат «Сенадексин» на 70% спирте; 3 – препарат «Сенаде» (растворитель – вода); 4 – препарат «Сена-де» на 70% спирте; 5 – водное извлечение из листьев кассии (ОАО «Красногорлексредства); 6 – извлечение из листьев кассии на 70% этиловом спирте (ОАО «Красногорлексредства); 7 – водное извлечение из листьев кассии (ПКФ ООО «Фитофарм»); 8 – извлечение из листьев кассии на 70 % этиловом спирте (ПКФ ООО «Фитофарм»); 9 – торахризон-8-O-β-D-глюкозид; 10 – антраценпроизводное; 11 – кемпфе-рол-3-O-софорозид

Рис. 2. УФ-спектры исходного раствора (1) и кемпферола-3-O-софорозида (2) (разведение 1:750)

Результаты проведенного нами анализа доказали эффективность и целесообразность применения метода ТСХ для идентификации биологически-активных соединений, содержащихся в сырье кассии и препаратах на ее основе. С целью разработки методики количественного определения суммы антраценпроиз-водных нами определены оптимальные условия экстракции антраценпроизводных в листьях кассии: экстрагент - вода или 60% этиловый спирт; соотношение сырье-экстрагент – 1:50; время экстракции – извлечение на кипящей водяной бане в течение 60 мин (табл. 1).

Таблица 1. Зависимость полноты извлечения суммы антраценпроизводных из кассии

№ п / п	Экстр агент	Соотно шение сырье: экстраг ент	Время экстра кции, мин	Содержание суммы антраценпро изводных (в %)
1	вода	1:50	60	1,86±0,14 нм
2	50% этилов ый спирт	1:50	60	1,52±0,17 нм
3	60% этилов ый спирт	1:50	60	1,59±0,19 нм
4	70% этилов ый спирт	1:50	60	1,44±0,21 нм

Рис. 3. УФ-спектр исходного раствора (1) и ще-лочно-аммиачного раствора водно-спиртового извлечения из листьев кассии (2) (разведение 1:1250)

Рис. 4. Дифференциальный УФ-спектр исходного раствора (разведение 1:1250)

Для получения данных, указанных в таблице мы использовали следующую формулу:

_X = D ∗ 50 ∗ 25 ∗ 100 ∗ 100 m ∗ 230 ∗ (100 - W )

где D – оптическая плотность испытуемого раствора; m – масса сырья, г; 230 – удельный показатель поглощения (E 1см ) сеннозида В; W – потеря в массе при высушивании в процентах.

Исследование УФ-спектров показало, что максимум поглощения щелочно-аммиач-ного раствора водно-спиртового извлечения из листьев кассии в длинноволновой области спектра находится при 530±2 нм. Следовательно, в качестве аналитической длины волны может быть использовано значение 530 нм, хотя в настоящее время для целей стандартизации используются и другие длины волн – 523 нм [1]. Кроме того, в кривую поглощения вносят вклад и нафталеновые производные, имеющие максимум поглощения при λ=230 нм, λ= 257 нм и λ=338 нм. При анализе прямого и дифференциального спектров можно сделать вывод о сопоставимости их значений.

Выводы: в результате фитохимических исследований лекарственного растительного сырья кассии (листья) и препаратов на ее основе были подобраны оптимальные параметры извлечения БАС, включая анализ антрацен-производных, флавоноидов, производных нафталена; показана целесообразность использования новых подходов стандартизации сырья и препаратов кассии, заключающиеся в определении антраценпроизводных и флавоноидов с использованием ТСХ и спетрофотометрии.