Оценка дезинфицирующих свойств препарата «Глиосепт» на батистовых тест-объектах с использованием пробиотического штамма Escherichia coli М-17

Дезинфекция является одним из важнейших направлений в комплексе мероприятий по борьбе с заразными болезнями. В силу ряда обстоятельств в настоящее время дезинфекционные мероприятия приобретают все более высокую значимость в профилактике и ликвидации инфекций.

Снизить стоимость обеззараживания можно путем создания новых сбалансированных дезинфицирующих композиций, которые в качестве действующих веществ должны иметь биоцидные агенты разных химических групп.

Необходимость создания новой рецептуры препаратов, обладающих полифункциональным действием (таким, чтобы наряду с высоким дезинфицирующим эффектом они обладали моющими и обезжиривающими свойствами), имеет на сегодняшний день особую актуальность. Данным требованиям в полной мере соответствует препарат «Глиосепт». Дезинфицирующее средство с моющим эффектом «Глиосепт» (производства ЗАО «Альдомед», г. Томск) представляет собой водный концентрат, содержащий глиоксаль (10%), алкилдиметилбензиламмоний хлорид (15%), комплекс ПАВ, функциональные компоненты.

Контроль качества дезинфекции проводят в соответствии с методикой, изложенной в действующих «Правилах проведения дезинфекции и дезинвазии объектов Государственного и ветеринарного надзора» (2002 г.).

Материалы и методы. Оценку дезинфицирующей активности «Глиосепта» проводили с использованием тест-культуры штамм Escherichia coli М-17. Вид возбудителя, питательные среды и методы культивирования выбирали с учетом конкретных задач и условий работы. В работе руководствовались «Методическими рекомендациями по ускоренному определению устойчивости бактерий к дезинфицирующим веществам» от 10.01.2000 года [2], «Методическими указаниями о порядке испытания новых дезинфицирующих веществ для ветеринарной практики» от 07.01.1987 года [1], а также общепринятыми микробиологическими методами исследования.

Эффективным считали такой рабочий раствор «Глиосепт», который на основании опытов совпадающими результатами (три раза) обеспечивал стопроцентную гибель исследуемых микроорганизмов на опытных тест-объектах. Пробы на наличие микрофлоры отбирали через десять, пятнадцать и двадцать минут.

Изучение дезинфицирующих свойств с помощью батистовых тест-объектов

Батистовую ткань погружали на 24 часа в холодную питьевую воду для удаления аппрета. Затем ткань тщательно стирали с мылом, прополаскивали в холодной воде, кипятили, сушили и гладили утюгом. С помощью иглы в приготовленном куске батистовой ткани выдергивали нитки в продольном направлении на расстоянии 10 мм друг от друга и в поперечном - на расстоянии 5 мм друг от друга. По этим линиям ткань разрезали ножницами на отдельные тест-объекты, затем раскладывали по 50 штук в чашки Петри, которые завертывали в бумагу и автоклавировали в паровом стерилизаторе в течение 20 минут при температуре 132 °C (1,1 кгс/кв. см).

Готовили рабочую суспензию Е. coli в количестве, достаточном для контаминации используемых в опыте тест-объектов (из расчета 0,2 мл на тест).

Стерильные батистовые тест-объекты (в количестве 50 - 100 штук) в чашке.

Петри заливали 10-20 мл рабочей суспензии Е. coli, содержащей 2 млрд микробных тел, и, равномерно смачивая, оставляли тест-объекты в суспензии в закрытой чашке Петри. Через 30 мин. тест-объекты, контаминированные бактериальной суспензией, стерильным пинцетом с соблюдением асептики переносили в стерильную чашку Петри на поверхность двухслойной стерильной фильтровальной бумаги, прикрывали их сверху стерильной фильтровальной бумагой и закрывали чашку. Оставляли на 10 мин. с целью удаления избытка жидкости. Для фиксации микроорганизмов на батистовых тест-объектах, последние переносили на поверхность сухой стерильной фильтровальной бумаги в чашке Петри и сверху прикрывали стерильным листом фильтровальной бумаги, подсушивали в термостате при температуре 37 °C в течение 20 мин. с приоткрытыми крышками.

Замачивание тест-объектов в дезинфицирующем растворе препарата «Глиосепт»

При проведении экспериментов в стеклянную емкость объемом 50-100 мл пипеткой наливали 1 мл рабочего раствора «Глиосепта» из расчета 0,5 мл на каждый тест-объект. Отсчитывали в чашке Петри необходимое для опыта количество батистовых тест-объектов (по 2 на каждую экспозицию), контаминированных Е. coli, стерильным пинцетом погружали необходимое для проведения эксперимента количество контаминированных тест-объектов в пробирку с раствором дезинфектанта (объем дезпрепарата рассчитывали с учетом соотношения 1,0 мл раствора на 1 тест-объект), обеспечивая полное смачивание (погружение) тест-объектов, фиксировали время начала экспозиции и следили за соблюдением температурного режима (20±2 °C). Время экспозиции составляло 10, 15, 20 минут. Готовили четыре концентрации препарата -0,5%, 1% , 1,5% и 2%. Все опыты повторяли трехкратно.

Нейтрализации дезпрепарата после заданной экспозиции воздействия

По истечении заданного времени экспозиции стерильным пинцетом извлекали тест-объект из раствора и погружали его на 1-2 мин. в пробирку со стерильным раствором нейтрализатора при температуре 20±2 °C.

Инкубирование нейтрализованных тест-объектов на плотной питательной среде.

Затем при помощи пинцета размещали тест-объект на скошенную поверхность питательной среды МПА (на скошенную площадку питательной среды в пробирке можно разместить 3 тест-объекта, что позволяет увеличить без дополнительных затрат количество проб на каждую экспозицию, а значит и достоверность результатов оценки эффективности средства). Пробирки закрывали ватно-марлевыми пробками и помещали в термостат в наклонном положении под углом 30° таким образом, чтобы стекающий с теста посевной материал тоже равномерно распределился по поверхности питательной среды, и инкубировали при 37 °C в течение 24 часов.

Таблица 1. Оценка дезинфицирующих свойств препарата на батистовых тест-объектах

Концентра ция, %	Экспозиция, мин	Escherichia coli пробиотический штамм М-17
0,5	10	++
	15	+
	20	+
1	10	+
	15	+
	20	+
1,5	10	+
	15	+
	20	+
2,0	10	+
	15	+
	20	-

Примечание: + (плюс) – рост тест-микроорганизмов на питательных средах; - (минус) – отсутствие роста.

Учет и анализ результатов эксперимента. Учет результатов посевов проводили визуально путем подсчета выросших колоний на поверхности питательной среды.

Наличие роста колоний кишечной палочки на поверхности питательной среды показывает, что тестируемое дезинфицирующее средство «Глиосепт» в режиме применения при концентрации рабочего раствора 0,5, 1 и 1,5 % и при экспозиции воздействия 10, 15, 20 минут не

ЛИТЕРАТУРА: 1. Методические указания о порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики. М. , 1987. 34 с. 2. Методические рекомендации по ускоренному определению устойчивости бактерий к дезинфицирующим средствам. М., 2000. 25 с. 3. Колычев Н.М., Аржаков В.Н., Заболотных А.В., Аржаков П.В. Бактерицидные свойства препарата «Глиоксаль». Сборник науч. жв. Перспективы развития аграрной науки образования. Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2008, с. 70-177.

обеспечивает надежного бактерицидного эффекта. Концентрация раствора 2% и экспозиция 10, 15 минут также не обеспечивает желаемого эффекта.

Отсутствие роста колоний кишечной палочки на поверхности питательной среды свидетельствует о наличии у средства бактерицидной эффективности только в следующем режиме применения: 2% концентрация раствора и экспозиция 20 минут воздействия.

ОЦЕНКА ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТА «ГЛИОСЕПТ» НА БАТИСТОВЫХ ТЕСТ-ОБЪЕКТАХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПРОБИОТИЧЕСКОГО ШТАММА ESCHERICHIA COLI М-17

Кучкина М.А., Аржаков П.В.

Резюме

В статье даны результаты оценки дезинфицирующих свойств препарата «Глиосепт» на батистовых тест-объектах при различных режимах его применения.

EVALUATION OF DISINFECTANT PROPERTIES OF PRODUCT "GLIOSEPT" ON THE CAMBRIC TEST OBJECTS USING PROBIOTIC STRAINS ESCHERICHIA COLI M-17

Kuchkina M.A., Arzhakov P.V.