Оценка эффективности РСК и ИФА при выявлении хламидийных антител в сыворотках крови крупного рогатого скота

Хламидийные инфекции наносят существенный экономический ущерб различным отраслям животноводства и птицеводства .

Хламидийные инфекции часто протекают в виде стертых , латентных , смешанных и вторичных инфекций , что в значительной степени затрудняет правильную оценку эпизоотической ситуации . В связи с этим при диагностике хламидиозов широко используют серологические методы .

Ретроспективная диагностика хламидиоза у животных в настоящее время осуществляется с помощью РСК , которая из - за низкой чувствительности и специфичности не позволяет в полной мере оценивать динамику противохламидийных антител .

В последнее время широкое распространение в ретроспективной диагностике инфекционных заболеваний получил иммуноферментный анализ ( ИФА ). ELISA- тест отличается высокой специфичностью , превышающую в несколько раз рутинные методы ретроспективной диагностики инфекционных болезней . Чувствительность фермент - зависимых методов исследования позволяет обнаруживать минимальные количества антител . Антитела в ИФА определяются в первые 2-3 дня и отслеживаются в организме на протяжении 10-12 месяцев после взаимодействия с антигеном . К преимуществам ИФА , кроме этого , относят также : экспрессность , возможность исследовать антикомплементарные сыворотки , воспроизводимость , простота постановки реакции и учета результатов , стабильность реагентов при хранении , автоматизация некоторых операций и т . д .

ИФА широко применяется в практике медицинских диагностических лабораторий для диагностики хламидиоза. Применение иммуноферментного метода ветеринарными специалистами во многом сдерживается отсутствием в достаточном количестве необходимых компонентов (тест-систем и оборудования), но, учитывая его диагностическую важность, можно утверждать, что в перспективе ИФА станет достоянием ветеринарных лабораторий.

Целью наших исследований являлась сравнительная оценка эффективности реакции связывания комплемента и иммуноферментного анализа для индикации хламидийных антител в сыворотках крови крупного рогатого скота .

Материалы и методы исследований . РСК проводили общепринятыми методами , согласно “ Методическим указаниям по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных “, утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 30.06.99 г . ( № 13-7-2/643).

ИФА выполняли по непрямому методу , на отечественных микротитрационных планшетах из полистирола , изготовленных на ПО ВНИИ медицинской техники ( г . Москва ). В качестве конъюгата использовали белок А , меченный пероксидазой хрена , который получали из НПО “ Пептоскрин -2“ ( г . Электросталь ).

Исследуемые и контрольные сыворотки разводили 1:100. Результаты ИФА регистрировали с помощью спектрофотометра Multiskan.

Результат подлежал учету , если среднее значение ОП отрицательных контролей ( ОП ср . К -) не превышало 0,2 оптические единицы ( о . е .), а среднее значение ОП положительных контролей ( ОП ср . К +) составляло не менее 0,8 о . е . Положительными считали образцы исследуемых сывороток , ОП которых превышала критическое значение ОП ( ОП крит .), которое рассчитывали по формуле : ОП крит .= ОП ср . К - + 0,2.

Результаты исследований . В наших опытах в РСК и ИФА параллельно были испытаны 1153 пробы сывороток крови крупного рогатого скота , подозрительного по заболеванию хламидиозом .

Результаты этих исследований представлены в таблице 1.

1. Исследования сывороток крови крупного рогатого скота , подозрительного по заболеванию хламидиозом , в РСК и ИФА

РСК +/ ИФА +		РСК +/ ИФА -		РСК -/ ИФА +		РСК -/ ИФА -		Общее количество проб
кол - во	%	кол - во	%	кол - во	%	кол - во	%
14	1,2	2	0,2	368	31,9	769	33,1	1153

Из 1153 сывороток крови крупного рогатого скота в РСК с хламидийным антигеном прореагировали положительно и сомнительно 16 проб (1,4%).

При исследовании в ИФА было установлено , что из 16 реагирующих в РСК сывороток , 14 (1,2%) были также позитивными в ИФА , а 2 сыворотки (0,2%) дали отрицательный результат в иммуноферментном тесте .

В ИФА реагировали положительно 368 проб (31,9%), ранее негативных в РСК .

Общее количество реагирующих в ИФА проб составило 382 (33,1%).

Отрицательными и в РСК , и в ИФА оказались 769 сыворотка крови (66,7%) крупного рогатого скота . Общее число отрицательных в ИФА проб составило 771 (66,9%).

Количество сывороток , результаты которых совпали в обоих реакциях составило 785 (68,3%).

Значение показателя " РСК отрицательно / ИФА положительно ", равное 31,9%, говорит о более высокой чувствительности иммуноферментного теста .

Таким образом , установлено , что разработанная нами “ Иммуноферментная тест - система для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота ” показывает высокую по сравнению с РСК чувствительность и специфичность в производственных условиях .

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ РСК И ИФА ПРИ ВЫЯВЛЕНИИ ХЛАМИДИЙНЫХ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКАХ КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Банзузи Б . А . С ., Равилов Р . Х ., Герасимов В . В .

Резюме

Разработанная нами иммуноферментная тест - система для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота показала высокую по сравнению с РСК чувствительность и специфичность в производственных условиях .

ESTIMATION OF EFFICIENCY COMPLIMENT FIXATION REACTION AND ELISATEST AT REVEALING OF CHLAMYDIAL ANTIBODIES IN CATTLE BLOOD SERA

Banzouzi B.A.S., Ravilov R.Kh., Gerasimov V.V.