Оценка эффективности универсальной вакцины против хламидиоза сельскохозяйственных животных на кроликах

Хламидиозы сельскохозяйственных животных представляют потенциальную угрозу не только животноводческой сфере, но и здоровью людей, контактировавших с ними.

Установлено, что хламидии чувствительны к целому ряду антибиотиков. Однако ввиду уникального жизненного цикла хламидий, включающего внутриклеточную стадию развития возбудителя, использование антибиотиков с лечебной и профилактической целью не эффективно и экономически не оправданно. Поэтому вакцинация является основным методом борьбы с хламидиозом и его профилактики у сельскохозяйственных животных. Для этого отечественными и зарубежными авторами разработан целый ряд вакцин [2, 3, 4, 5, 6].

Одним из ведущих учреждений по данной проблематике в России является ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»). За годы исследований в данной области в ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» были изучены основные проблемы, связанные с заболеваемостью животных этой инфекцией. Кроме того, разработаны средства диагностики и специфической профилактики, позволяющие эффективно бороться с данной инфекцией [1, 7, 8].

Однако на данном этапе на базе накопленных знаний и опыта назрела необходимость создания универсальной вакцины, позволяющей осуществлять эффективную специфическую профилактику хламидийных инфекций, если не у всех, то по крайней мере у большинства видов животных (КРС, козы, овцы, свиньи, лошади).

Исходя из этого, целью настоящего исследования явилась оценка эффективности «Универсальной вакцины против хламидиоза сельскохозяйственных животных» на кроликах. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: изучение антигенной активности вакцины; оценка иммуногенности вакцины.

Материал и методы исследований. Исследования проводили на базе отделения вирусологии ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» и каф. хирургии, акушерства и ПМЖ, ФГБОУ ВО КГАВМ имени Н.Э. Баумана .

Исследования проводили согласно «Методическим указаниям по лабораторным исследованиям на хламидийные инфекции животных», утвержденным заместителем руководителя Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ от 30 июня 1999 г. №13-7-2/643.

Для создания вакцины использовали антигены трех гетерологичных штаммов хламидий, выделенных от разных видов сельскохозяйственных животных (КРС, свиньи, козы) при различных клини- ческих патологиях.

Испытания на стерильность проводили согласно ГОСТу 28085-2013 путем высева на МПБ, МПА, Сабуро-агар и среду Китт-Тароцци.

Безвредность препарата определяли посредством постановки биопробы на белых мышах.

Изучение антигенной активности проводили на 8 кроликах, которые были разделены на две группы: опытную (6 голов) и контрольную (2 головы). Животные первой группы были иммунизированы универсальной вакциной внутримышечно в дозе 0,5 мл. Через 14 дней была проведена ревакцинация в той же дозе.

Для оценки антигенной активности на 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180 и 195 дни после первого введения вакцины, были проведены заборы крови с целью исследования сывороток на наличие специфических хламидийных антител в реакции связывания комплемента. Реакцию ставили с использованием «Набора антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных» производства ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Испытание иммуногенности вакцины в остром опыте на кроликах проводили в 6 этапов.

На 1 этапе 6 самок кроликов были иммунизированы универсальной вакциной против хламидиоза сельскохозяйственных животных внутримышечно в дозе 0,5 мл, животные контрольной группы не иммунизировались. Через 14 дней проводили ревакцинацию иммунизированных животных в той же дозе.

• 2 этап включал в себя проведение серологических исследований сывороток крови кроликов в РСК с целью выявления специфических комплементсвязывающих хламидийных антител. Исследования проводились на 7, 14, 30 и 45 дни после иммунизации и на 7, 14, 30 и 45 дни после заражения кроликов. На 3 этапе, через месяц после иммунизации, животные обеих групп (опытная и контрольная) были скрещены с самцами. На 17-19 день беременности (4 этап) было проведено заражение кроликов 2 групп тремя штаммами

хламидий, которые были выделены от разных видов животных (козы, КРС и свиньи). Каждым штаммом заражали по 2 группы животных (опытную и контрольную), внутримышечно в дозе 1,0 мл.

На 5 этапе проводили оценку исхода беременности кроликов опытной и контрольной групп после экспериментального заражения вирулентными культурами хламидий

Заключительный (6-ой) этап включал в себя проведение бактериологических исследований патологических материалов

Уровень иммунитета, созданного универсальной вакциной, по отношению к 3 штаммам хламидий, выделенных от разных видов животных, оценивали по результатам исхода беременности кроликов, наличию или отсутствию клинических признаков хламидийной инфекции и по результатам бактериологических исследований.

Результат исследований. Исследования на стерильность и безвредность показали, что вакцинный препарат не обсеменен микрофлорой не соответствующей стандарту антигенной композиции вакцины и не вызывает гибели и выраженной ответной реакции на введение у белых мышей. На основании этого было подтверждено, что препарат стерилен и безвреден.

В результате изучения антигенной активности универсальной вакцины против хламидиоза сельскохозяйственных животных нами было установлено, что новый вакцинный препарат, после введения животным, вызывает выработку специфических хламидийных антител. Максимальный уровень комплементсвязывающих антител был выявлен на 60 день исследования и был равен в среднем по группе 1:200. Далее концентрация хламидийных антител в крови кроликов начала снижаться и к 180 дню достигла среднего показателя 1:60. На протяжении последующих 15 суток концентрация хламидийных антител оставалась на том же уровне (рисунок 1). У животных контрольной группы на протяжении всего исследования хламидийных антител в сыворотке крови выявлено не было.

до вак 30     45     60     90     120    150    180    195

Средний титр хламидийных антител

Рисунок 1 – Динамика накопления специфических комплементсвязывающих хламидийных антител у иммунизированных кроликов

Рисунок 2 – Динамика накопления хламидийных антител у вакцинированных и контрольных

кроликов до и после заражения

Таблица 1 – Результаты исхода беременности кроликов опытной и контрольной групп после экспериментального заражения вирулентными культурами хламидий

Наименование группы	№	Вид животного, от которого был выделен штамм для заражения	Исход беременности	Кол-во плодов	Результаты исследований: 1.Микроскопически 2.Реизолированы на РКЭ
Опытная (вакцинированные)	1 2	МРС	Роды Роды	3 2	отрицательно отрицательно
	3 4	КРС	Роды Роды	2 3	сомнительно отрицательно
	5 6	Свиньи	Роды Роды	3 2	отрицательно отрицательно-
Результат исхода бе	ременности по группе		Роды	15	отрицательно
Контрольная	1	МРС	Аборт	4	положительно
	2 3	КРС	Мертворождение Мертворождение	2 3	положительно положительно
	4	Свиньи	Рождение недоразвитых крольчат	2	положительно
Результат исхода беременности по группе			Аборт, мертворождение рождение недоразвитых крольчат	11	положительно

На рисунке 2 представлена динамика накопления хламидийных антител в сыворотке крови вакцинированных и контрольных кроликов до и после заражения.

До вакцинации опытные кролики не контактировали с хламидийным антигеном. Накопление специфических антител в сыворотке крови было выявлено на 7 сутки после введения вакцины, в среднем титре 1:6. Максимальный титр хламидийных антител в опытной группе кроликов был выявлен на 7 день после заражения и был равен в среднем по группе показателю 1:160. На 14 день после инфицирования концентрация комплементсвязывающих хламидийных антител снизилась до среднего титра 1:106. На 30 день после заражения средний титр снизился до 1:80. В течение последующих 15 дней концентрация антител оставалось на том же уровне. У животных контрольной группы наблюдали рост специфических антител после введения инфекционного материала, титр которых к 45 дню после заражения, в среднем, был равен 1:65.

Результаты исхода беременности кроликов в опытной и контрольной группах представлены таблице №1.

В опытной группе родились 15 голов живых и развитых крольчат, а в контрольной группе животных наблюдались аборты, рождение слабых и мертвых крольчат.

В ходе проведения лабораторных исследований внутренних органов крольчат опытной группы обнаружить хламидии не удалось. При исследовании внутренних органов животных контрольной группы хламидии были обнаружены и реизолиро-ваны на развивающихся куриных эмбрионах, что подтверждало хламидийную этиологию абортов и мертворождений.

В ходе проведения патологоанатомического вскрытия кроликов нами были отмечены ярко выраженные поражения внутренних органов у животных контрольной группы, которые характеризовались увеличением печени и селезенки, а также воспалительными процессами в легких.

Испытание универсальной вакцины против хламидиоза сельскохозяйственных животных в остром опыте на 10 кроликах показало, что введение вакцины в дозе 0,5 мл обеспечивало формирование стойкого иммунитета, способного защитить беременных крольчих от экспериментального заражения вирулентными штаммами хламидий, вызывающими аборты у разных видов сельскохозяйственных животных.

Заключение. В ходе проведения лабораторных исследований опытных образцов универсальной вакцины на кроликах было доказано, что вакцина стерильна, безвредна, обладает выраженной антигенной активностью, а также способна вызывать формирование стойкого иммунитета, способного защищать лабораторных животных от экспериментального заражения вирулентными штаммами хламидий,