Оценка кумулятивных свойств комплексного средства З-88

В настоящее время в арсенале лекарственных средств значительное место занимают препараты, созданные на основе лекарственного сырья растительного или животного происхождения, продуктов пчеловодства, минералов.

Отличительной особенностью лекарственных средств природного происхождения (ЛСПП) является их сложный химический состав, включающий биологически активные вещества, относящиеся к различным классам химических соединений, в том числе к сильнодействующим и потенциально токсичным, наличие и содержание которых зависит от многих факторов.

Согласно Европейской Директиве 2004/24/ЕС, принятой в 2004 году Европейским парламентом и Советом Европы, ЛСПП должны иметь признанный уровень эффективности и безопасности, который должен быть оценен на основе данных доклинических и клинических исследований [5].

Ранее нами проведены исследования по определению параметров острой токсичности средства З-88 на лабораторных мышах и крысах при доставке его в организм подопытных животных разными путями и различных дозах. Экспериментально установлено, что предлагаемое средство не обладает острой токсичностью, хорошо переносится животными и относится к 4 классу опасности [2, 3]. Исходя из этого, целью настоящих исследований являлось изучение кумулятивных свойств комплексного средства З-88.

Материал и методы исследований. Данная серия опытов проведена в условиях вивария ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ. Теоретическая и аналитическая часть работы выполнена в условиях кафедры «Технологии животноводства и зоогигиены».

Оценку кумуляции проводили методом субхронической токсичности по Lim R.K. и соавт. [7]. Исследования проведены на 20 половозрелых аутбредных самках и самцах белых крыс с исходной массой 180-220 г., распределенных поровну с учетом массы тела и половой принадлежности в две равноценные группы.

Животные первой группы были опытными и им внутримышечно в область бедра вводили средство З-88, а контрольной группе аналогично 0,9 % стерильный раствор хлорида натрия. Указанный способ доставки предлагаемого средства в организм подопытных животных рассматривается как путь, рекомендуемый для клинического изучения.

Экспериментальным животным в первый день опыта испытуемые средства инокулировали в дозе 0,5 мл на одно животное, что составляет 1/10 от максимально введенного объема в опытах по определению параметров острой токсичности. З-88 вводили один раз в сутки на протяжении всего опыта. Начиная с пятого дня, каждые последующие четверо суток дозу препарата увеличивали в 1,5 раза. Для снижения нагрузки средства на мышцы конечности препарат вводили:

один день в левую заднюю конечность, а в другой – в правую.

Опыты проведены на интактных крысах, прошедших карантинные мероприятия в течение 12 суток. На протяжении опыта наблюдали за клиническим состоянием животных. Принимали во внимание динамику массы тела, поведенческие реакции, внешний вид, состояние и цвет визуализируемых слизистых оболочек, отношение их к корму и воде.

Наравне с указанными параметрами, оценивали и некоторые интерьерные показатели. В частности, давали оценку влияния З-88 на морфологический состав крови.

Все исследования проведены с учетом требований Директивы 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского Союза от 22.09.2010 по охране животных, используемых в научных целях [6] и Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях.

Результат исследований.

Наблюдения за клиническим состоянием подопытных крыс показали, что введение как средства З-88, так и физиологического раствора внутримышечно сопровождалось непродолжительным ограничением подвижности животных в первые минуты после инъекций. В то же время стоит отметить, что болевая реакция при использовании З-88 была более выраженной, чем у контрольных аналогов. В течение первых 4-х суток каждая особь получила суммарно 2,0 мл соответствующих инокулируемых средств (Таблица 1).

На пятые сутки, в соответствии с методическими рекомендациями, доза препаратов была увеличена в 1,5 раза и составила 0,75 мл. Клинически существенных различий в поведении животных в обеих группах не отмечали. Крысы сразу после инъекций становились агрессивными, затем собирались в кучу, дыхание становилось учащенным. Через 15-20 минут животные начинали двигаться по клетке, осуществляли груминг, некоторые из них подходили к поилкам. Суммарно за 4 дня объем вводимых средств в расчете на одно животное составил 3,0 мл, а по периодам введения – 5,0 мл.

Таблица 1 – Кумулятивные свойства комплексного средства З-88

Дни введения	Ежедневно вводимая доза, мл	Суммарная доза за 4 суток, мл	Суммарная доза по периодам введения, мл	Количество павших животных
1-4	0,5	2,0	2,0	0
5-8	0,75	3,0	5,0	0
9-12	1,12	4,5	9,5	0
13-16	1,7	6,8	16,3	0
17-20	2,5	10,0	26,3	0
21-24	3,8	15,2	41,5	0

С 9 по 12 сутки опыта ежедневно вводимая доза достигла 1,12 мл, суммарная – 4,5, а за весь период – 9,5 мл, соответственно. Аналогично предыдущим срокам наблюдали болезненность на месте введения, а также учащение дыхания.

На 13 сутки однократная доза вводимых жидкостей составила 1,7 мл на каждую особь. Стоит заметить, что крысы несколько больше времени оставались угнетенными (ориентировочно 20-30 минут). Всасывание препаратов происходило несколько дольше. На месте инъекции, в особенности средства З-88, появлялась припухлость. Во время движения крысы не полностью опирались на конечность, в которую инокулировали сравниваемые средства. Суммарно с 13 по 16 сутки они получили 16,3 мл испытуемых средств.

С 17 по 20 сутки каждой крысе были введены средства в дозе 2,5 мл. Суммарно за 4 суток каждое животное получило 10,0 мл, а за весь период – 26,3 мл.

Опыт был завершен на 24 сутки, так как объемы вводимых средств в последующие сроки могли превышать дозы, предусмотренные регламентом. Суммарно за весь период использования средства З-88 и изотонического раствора хлорида натрия животные получили 41,5 мл жидкостей. По мере увеличения дозы вводимых средств в динамике отмечали более выраженное угнетение подопытных животных и длительное восстановление естественных процессов, связанных с двигательной активностью, грумингом, а также приемом воды и корма. Гибели крыс подопытных групп во время эксперимента не наблюдали.

При оценке массы тела через 4 дня после последней инъекции испытуемого средства установлено, что данный показатель у крыс опытной группы снизился по отношению к исходным значениям на 4,1 % (Рисунок 1). В отличие от этого животные контрольной группы наоборот прибавили в массе тела и весили 211,0 г., что выше, чем у опытных аналогов на 10,7 %. Уменьшение значений абсолютного прироста у крыс, получавших З-88, на наш взгляд, связано с чрезмерным поступлением в организм биологически активных веществ, содержащихся в предлагаемом нами средстве.

Рисунок 1 – Масса тела подопытных крыс в субхроническом опыте

Оценка состава крови при включении крыс в опыт показала, что количество эритроцитов было равнозначным в обеих группах. Однако по завершении эксперимента (на 28 сутки) их количество в опытной группе оказалось достоверно ниже контрольных значений на 13,8 %. Уровень гемоглобина в обеих группах понизился по сравнению с исходными величинами, не имея достоверных различий.

При подсчете общего числа лейкоцитов отмечали увеличение их количества. В контрольной группе содержание белых клеток крови увеличилось по отношению к фоновым значениям на 39,1 %, а в опытной на 65,9 %. В то же время необходимо отметить, что в крови у крыс опытной группы лейкоцитов было достоверно выше, чем в контроле на 26,7 %.

Показатель СОЭ к концу исследований у животных, получавших средство З-88, оказался в 2 раза выше, чем у контрольных аналогов при р≤0,001.

Заключение. Таким образом, нашими исследованиями установлено, что длительное использование средства З-88 парентерально сопровождается снижением показателей массы тела, общего числа эритроцитов и гемоглобина, а также лейкоцитозом и ускорением скорости оседания эритроцитов.

Расчеты по определению коэффициента кумуляции показали, что величина средства З-88 находится на уровне 8,3, что выше значений, полученных в остром опыте, и в соответствии с классификацией химических веществ [1, 4] З-88 относится к группе веществ, обладающих слабо выраженной степенью кумуляции.