Оценка системы гемостаза кроликов после прижизненного экспериментального моделирования забрюшинной гематомы

Введение. Гемостаз охватывает строго регулируемые процессы свертывания крови, активации тромбоцитов и восстановления сосудов. После травмы система гемостаза задействует множество сосудистых и внесосудистых рецепторов, которые действуют совместно с компонентами крови, устраняя повреждения, нанесенные сосудистой сети и окружающим тканям [1].

Последствия нарушений системы гемостаза, как врожденных, так и приобретенных, часто представляют значительную проблему в диагностике и терапии. Логичное и эффективное лечение зависит: от правильной идентификации задействованных гемостатических компонентов; понимания сложных, тонко модулируемых взаимодействий различных систем ферментов / ингибиторов; знания механизма, с помощью которого различные, по-видимому, не связанные между собой патологические процессы могут ускорять нежелательные явления, такие как тромбоз, эмболия или кровотечение [2].

Фибрин играет важную роль в гемостазе как первичный продукт каскада свертывания и конечный субстрат для фибринолиза. На активность фибринолиза в значительной степени влияет структура сгустка, изоформы и полиморфизмы фибриногена, скорость образования тромбина, реактивность связанных с тромбом клеток (тромбоциты) и общая биохимическая среда. Регулирование фибринолитической системы, как и каскада свертывания, осуществляется широким спектром кофакторов, рецепторов и ингибиторов. Фибринолитическая активность может генерироваться либо на поверхности фибринсодержащего тромба, либо на клетках, которые экспрессируют профибринолити-ческие рецепторы [3].

Забрюшинные гематомы у животных могут иметь разное происхождение и характер [4–7], при этом специфика их образования и действие на гомеостаз организма остаются малоизученными, а сведения об оценке динамики показа- телей системы гемостаза при данной патологии в доступной литературе отсутствуют.

Цель исследования – изучить динамику показателей системы гемостаза у кроликов после прижизненного экспериментального моделирования забрюшинной гематомы.

Объекты и методы. Объектом исследования служили 50 самцов кроликов породы Серый Великан, из которых сформированы опытная (25 особей) и контрольная (25 особей) группы.

Животным опытной группы под неингаляционным наркозом проводили прижизненное моделирование забрюшинной гематомы по разработанному нами способу [8], включающему отбор крови из ушной артерии с добавлением антикоагулянта и с последующим введением аутокрови в забрюшинное пространство. Для этого животное фиксируют на операционном столе в боковом положении с подготовкой операционного поля в правой или левой поясничной области, после чего, отступив 2 см от поперечно-реберного отростка 3-го поясничного позвонка, проводят разрез кожи длиной до 1 см с последующим введением вращательно-поступательными движениями в операционную рану через внутреннюю косую брюшную мышцу под углом 45 градусов по отношению к остистым отросткам по направлению к брюшной полости канюли из хирургической стали с боковым отверстием размером G16 70 мм на глубину 3– 4 см. Убедившись в правильности положения канюли по рентгенографии, вводят предварительно отобранную из ушной артерии аутокровь. Объем введенной аутокрови в забрюшинное пространство составлял 1,0 % от массы тела кролика.

Животные контрольной группы подвергались только неингаляционному наркозу.

Отбор проб крови у животных опытной и контрольной группы проводили натощак посредством венепункции подкожной вены предплечья в вакуумные пробирки фирмы «МиниМед» (Россия) с цитратом натрия (1 : 9) 3,8 % через 1, 3, 7, 14 и 28 сут после проведения эксперимента. После забора крови животных выводили из эксперимента.

Определение протромбинового времени (ПТВ) с получением международного нормали- зованного отношения (МНО), а также активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ), тромбинового времени (ТВ) и уровня фибриногена проводили на автоматическом анализаторе коагуляции крови серии СА-600 производства Sysmex (Япония) с помощью реактивов фирмы Siemens (Германия).

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим множественным сравнением Ньюмена-Кейлса в программе Primer of Biostatistics 4.03. Достоверными считали различия при р < 0,05.

Результаты и их обсуждение. Показатели системы гемостаза кроликов после прижизненного экспериментального моделирования забрюшинной гематомы представлены в таблице.

Протромбиновое время является одним из наиболее важных лабораторных тестов для определения функциональности системы свертывания крови. Он используется для диагностики заболеваний свертывающей системы крови, оценки риска кровотечения у пациентов, перенесших оперативные вмешательства, наблюдения за пациентами, получающими терапию пероральными антикоагулянтами, и оценки функции печени [9]. Международное нормализованное отношение (МНО) – это стандартизированный показатель протромбинового теста, который рассчитывается на основании протромбинового времени пациента, протромбинового времени нормы и международного индекса чувствительности [10]. При изучении МНО у кроликов после прижизненного экспериментального моделирования забрюшинной гематомы установлено, что на 1-е, 3-и и 7-е сут после проведения эксперимента этот показатель в опытной группе имеет на 15,55 %, 7,53 и 5,76 % соответственно достоверно более низкие значения по сравнению с контрольной группой. На 14-е и 28-е сут после проведения эксперимента достоверных различий МНО между опытной и контрольной группой уже не определяется. При сравнении МНО между сроками исследования после проведения эксперимента в опытной группе достоверных различий не выявлено, при этом значение данного показателя имеет тенденцию к повышению (табл.).

Показатели системы гемостаза кроликов после экспериментального моделирования забрюшинной гематомы

Примечание: (*) – статистическая значимость различий (при р < 0,05) в идентичных сроках исследования у опытной группы по сравнению с контрольной; (#) – у каждого последующего срока исследо- вания опытной группы по сравнению с предыдущим.

Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) может отражать дефицит следующих факторов: высокомолекулярный кининоген; прекалликреин; XII, XI, IX, VIII, X и V факторы; протромбин и фибриноген [11]. Анализируя АЧТВ у кроликов после прижизненного экспериментального моделирования забрюшинной гематомы выяснено, что значение данного показателя у опытной группы достоверно выше только на 1-е, 3-и, 7-е и 14-е сут после проведения эксперимента на 52,63; 22,88; 26,02 и 18,28 % соответственно по сравнению с контрольной группой. В опытной группе АЧТВ у экспериментальных животных достоверно удлиняется только с 1-х до 3-х сут (на 11,18 %) и с 14-х до 28-х сут (на 12,80 %).

Фибриноген и фактор XIII являются двумя важнейшими белками, которые непосредственно участвуют в образовании фибринового геля в качестве заключительного этапа последовательности реакций, запускаемых прокоагулянтным стимулом, а также, в дополнение к их гемостатической функции, влияют на врожденный иммунитет, клеточно-опосредованные реакции, такие как заживление ран, реакция на повреждение ткани или воспалительные процессы [12]. Содержание фибриногена в плазме крови кроликов после прижизненного моделирования экспериментальной забрюшинной гематомы достоверно не изменяется по сравнению с контрольной группой. Однако в опытной группе значение этого показателя, имея волнообразную динамику, достоверно увеличивается с 1-х до 3-х сут после проведения эксперимента на 22,49 %, а с 7-х до 14-х сут – достоверно уменьшается на 37,12 %.

Тромбиновое время (ТВ) – это анализ свертываемости крови, который отражает превращение фибриногена в фибрин после добавления тромбинового реагента. Измерение свертываемости фибриногена и ТВ позволяет выявлять врожденные и приобретенные качественные и количественные нарушения фибриногена, которые могут привести к тромботическим явлениям или кровотечениям [13]. При оценке ТВ у кроликов после прижизненного экспериментального моделирования забрюшинной гематомы установлено, что значение данного показателя в опытной группе достоверно больше на 1-е, 3-и, 7-е и 14-е сут после проведения эксперимента – на 38,46; 23,86; 36,25 и 10,70 % соответственно по сравнению с контрольной группой. В опытной группе динамика изменения ТВ имеет волнообразный характер и с 1-х до 3-х сут после эксперимента достоверно уменьшается на 7,83 %; с 3-х до 7-х сут – достоверно воз- растает на 23,32; с 7-х до 14-х сут – достоверно уменьшается на 26,82 и с 14-х до 28-х сут – вновь достоверно уменьшается на 10,59 %.

Низкие значения МНО в первые 7 сут и АЧТВ в первые 14 сут, а также удлинение ТВ в первые 14 сут после проведения эксперимента дают основания полагать, что при забрюшинных гематомах в эти сроки повышается порог вероятности тромбообразования.

D-димер представляет собой растворимый продукт разложения фибрина, который образуется в результате упорядоченного расщепления тромбов фибринолитической системой. Многочисленные исследования показали, что D-димер служит ценным маркером активации свертывания и фибринолиза [14]. При анализе уровня D-димера в плазме крови кроликов после прижизненного экспериментального моделирования забрюшинной гематомы выяснено, что значение данного показателя в опытной группе на 1-е сут после проведения эксперимента достоверно выше в 2,2 раза; на 3-е сут – в 3,84; на 7-е сут – в 4,72; на 14-е сут – в 1,96 и на 28-е сут – в 2,98 раза, чем в контрольной группе. В опытной группе животных уровень D-димера в плазме крови достоверно увеличивается с 1-х до 3-х сут на 85,37 % и с 3-х до 7-х сут – на 49,64 %, а затем достоверно уменьшается с 7-х до 14-х сут на 78,21 % и с 14-х до 28-х сут на 14,52 %. Наивысший уровень D-димера в плазме крови животных опытной группы регистрируется на 7-е сут и, вероятно, свидетельствует, что при забрюшинных гематомах в это время происходят самые активные процессы фибринолиза.

Заключение. Прижизненное экспериментальное моделирование забрюшинной гематомы у кроликов приводит к ряду значимых изменений в системе гемостаза, которые наиболее выражены в первые 14 сут после проведения эксперимента. МНО в опытной группе животных имеет достоверно низкие значения по сравнению с контрольной только на 1-е, 3-и и 7-е сут, а АЧТВ – на 1-е, 3-и, 7-е и 14-е сут после проведения эксперимента. В уровне фибриногена плазмы крови между животными опытной и контрольной группы достоверных отличий выявлено не было. ТВ у животных опытной группы достоверно выше только на 1-е, 3-и, 7-е и 14-е сут, а содержание D-димера оказалось достоверно больше во всех исследуемых сроках после проведения эксперимента в сравнении с контрольной группой животных.