Оценка степени гемодилюции аспиратов костного мозга при анализе минимальной остаточной болезни у больных множественной миеломой



М.Л. Морозова, Н.В. Исаева, А.С. Лучинин

ОЦЕНКА СТЕПЕНИ ГЕМОДИЛЮЦИИ АСПИРАТОВ КОСТНОГО МОЗГА ПРИ АНАЛИЗЕ МИНИМАЛЬНОЙ ОСТАТОЧНОЙ БОЛЕЗНИ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», Киров

Введение . В онкогематологической практике костный мозг является основным объектом лабораторных исследований при оценке минимальной остаточной болезни (МОБ). Определение МОБ имеет ключевое значение для выбора лечебной тактики и оценки прогноза при всех заболеваниях системы крови. Для установления МОБ используют метод проточной цитометрии, который обладает высокой специфичностью и чувствительностью. Проблема гемодилюции (разбавление образца костного мозга периферической кровью) принципиальна при оценке МОБ, так как искажает представление о реальном количестве резидуальных опухолевых клеток в аспирате.

Цель . Оценить влияние степени гемодилюции аспиратов костного мозга на точность анализа МОБ у больных множественной миеломой.

Материалы и методы. Материалом служили образцы костного мозга 41 пациента, наблюдавшегося в ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России в 2022 г. с диагнозом множественная миелома, которые окрашивали флуорохром-меченными моноклональными антителами CD16-FITC, СD13-PЕ-Cy7, CD45-Per-CP. Исследования проводили на проточном цитофлуориметре BD FACSCantoTM II (BD Biosciences, США) с использованием программного обеспечения “BD FACS Diva” версии 7.0 (BD Biosciences, США). Степень гемодилюции костного мозга оценивали с помощью различий профилей экспрессии CD16 на мембранах клеток из региона гранулоцитов, в том числе: зрелых клеток крови с высокой экспрессией CD16 (CD16high) и созревающих элементов костного мозга со слабой экспрессией CD16 (CD16dim). Коэффициент разбавления костного мозга периферической кровью рассчитывали с учетом интенсивности экспресcии CD16dim по формуле: 80% / Процент клеток CD16dim.. Полученный коэффициент умножали на процент МОБ, тем самым корректируя содержание остаточных опухолевых плазматических клеток. Статистическую значимость показателей оценивали при помощи непара- метрического критерия Мак-Немара для парных сравнений с поправкой Эдвардса при p<0,05.

Результаты . Полностью непригодными были признаны 8 (19,5%) образцов костного мозга с крайне высокой степенью гемодилюции из 41, а именно, с содержанием клеток с характеристикой CD16high в регионе гранулоцитов более 90%. Причиной гемодилюции является использование первой порции аспирата для оценки морфологии клеток при приготовлении мазков. Для иммунофенотипирования в пробирки забирается следующая порция аспирата. В 33 (80,5%) образцах костного мозга из 41 относительное содержание клеток с CD16high варьировало от 23,7 до 90%, данные образцы пригодны для дальнейшего анализа. Только в 1 образце (2,4%) относительное содержание клеток с характеристикой CD16high не превышало 40%, что согласно критериям М.R. Loken, 2008, позволило считать образец не разбавленным периферической кровью. В 32 аспиратах костного мозга (78,0%) относительное содержание клеток с характеристикой CD16high составило более 40%, полученные значения МОБ были пересчитаны с коэффициентом гемодилюции от 1,38 до 7,14, что позволило сделать корректное заключение о МОБ-статусе с учетом погрешности анализа за счет разведения периферической кровью. Без введения поправки на гемодилюцию МОБ-негативный статус (на уровне менее 10-4) мог быть присвоен 14 образцам (43,8%) из 32. После применения коэффициента гемодилюции МОБ-негативный статус присвоен 5 (15,6 %) аспиратам (p=0,013) за счет перевода 9 (28,1%) образцов с необоснованно заниженными результатами в категорию МОБ-позитивных.

Выводы . Внедрение метода оценки степени гемодилюции аспиратов костного мозга при исследовании МОБ позволяет избежать ложно-негативных результатов, что повышает точность и корректность данных.