Оценка влияния антигепатотоксического средства на регенерацию печени при хроническом токсическом гепатите у белых крыс

Потребность в лекарственной коррекции нарушенных функций гепатобилиарной системы в настоящий момент ощущается наиболее остро. Воздействие неблагоприятных экологических факторов, стрессовых ситуаций, применение некоторых лекарственных препаратов неизбежно приводят к нарушению функциональной активности печени. В настоящее время они занимают 2–3% общего числа заболеваний гепатобилиарной системы [3].

Для стимуляции регенерации патологически измененных органов особую актуальность приобретает поиск новых средств, ускоряющих восстановление поврежденных тканей и органов. В настоящее время большую роль отводят лекарственным средствам природного происхождения и в первую очередь наибольшего внимания заслуживают лекарственные растения, так как фитотерапия при достаточной фармакотера-певтической активности не оказывает побочного влияния на организм [4, 6].

Целью настоящей работы явилась оценка стимуляции регенерации печени белых крыс антигепатотоксическим средством при хроническом CCl 4 — гепатите.

Материал и методы

В работе использовали антигепатотоксическое средство, представляющее сухой экстракт из 5-ти компонентного сбора:

пижма обыкновенная (Fanacetum vulgare L.) — трава;

золототысячник обыкновенный (Gentrarium vulgaris L) — трава; девясил высокий (Inula helenium L) — корневище и корни;

боярышник кроваво-красный (Grataegus sanguineae Pall) — плоды;

шиповник (Rosa L) — плоды.

Хронический токсический гепатит вызывали у белых крыс массой 180–220 г подкожным введением 50% масляного раствора CCl 4 в объеме 0,25 мл/100г массы животного 2 раза в неделю в течение 2-х месяцев. После окончания введения CCl 4 крысам вводили per os ежедневно в течение месяца испытуемое средство внутрижелудочно в дозе 0,3 г/кг массы животного. В качестве препарата сравнения применяли силибор. Контролем служили белые крысы, получавшие только раствор CCl 4 .

Морфологическое состояние печени белых крыс исследовали на 14-, 28-, 35-е и 42-е сутки с момента введения антигепатотоксического средства на фоне хронического гепатита. При взятии гистологического материала кусочки печени фиксировали в 10%-ом растворе нейтрального формалина. При оценке влияния антигепатотоксического средства на течение репаративной регенерации печени после ее токсического повреждения были использованы морфофункциональные показатели, характеризующие регенераторный процесс. В частности, исследовали митотическую активность гепатоцитов и подсчет количества двуядерных и гипертрофированных клеток, количество которых подсчитывали в 100 полях зрения гистологического препарата. Митотический индекс выражали в промилле (% о ), т. е. содержание митозов на 1000 клеток способных к делению. Цифровые данные, полученные в эксперименте обрабатывали по параметрическому критерию Стьюдента-Фишера [5].

Результаты исследований и их обсуждение

Патологическая картина в печени белых крыс после окончания 2-месячных затравок CCl 4 сводилась к выраженным гемодинамическим нарушениям в виде полнокровия сосудов, а также к значительным дистрофическим и воспалительно-пролиферативным процессам. У животных контрольной группы перипортальный и портальный фиброз в печени отмечен у 66% животных, а в группе животных, получавших антигепато-токсическое средство — 50% случаев.

На 14-е сутки в отличие от контрольных животных после введения антигепатотоксического средства отмечалась меньшая по степени инфильтрация печени мезенхимальными элементами. В печени животных обнаруживались в большем количестве, чем в контроле, крупные гиперх-ромные и двуядерные гепатоциты.

На 28-е сутки исследований в печени крыс, получавших антигепато-токсическое средство, определялась менее выраженная, чем в контроле, полиморфно-клеточная инфильтрация, сопровождающаяся фибриллоге-незом. Фиброз портальных полей в печени крыс встречался, как и в предыдущий срок наблюдения в 50% случаях. Однако волоконца соединительной ткани были тоньше, нежнее и не пронизывали дольку печени в отличие от контроля. У животных, получавших антигепатотоксическое средство, в большем количестве, чем в контроле, были видны гипертрофированные гепатоциты с увеличенными гиперхромными ядрами, а также двуядерные клетки и фигуры митоза. Нарастание объема ядер в гепатоцитах и возрастание доли крупных клеток в печени животных получаемых изучаемое средство следует объяснить повышением функционального состояния гепатоцитов, в которых увеличивается синтетическая активность.

На 35-е сутки в печени животных, получавших антигепатотоксиче-ское средство, еще обнаруживались умеренная круглоклеточная инфильтрация и перипортальный фиброз (в 30% случаев). В контроле подобная картина наблюдалась гораздо чаще (50–70% случаев).

Что касается регенераторных процессов, то показатели митотической активности двуядерных и гипертрофированных клеток в контрольной группе животных свидетельствовали о вялом течении регенераторных процессов в печени. Так, митотический индекс практически прослеживался на одном уровне на все сроки наблюдения (табл. 1).

Таблица 1

Влияние антигепатотоксического средства на митотическую активность гепатоцитов белых крыс (‰) при хроническом гепатите;

М ± m; n=7

Группы животных	Сроки исследования, сутки
	14	28	35	42
CCl 4 (контроль)	1,8 ± 0,03	2,2 ± 0,01	2,0 ± 0,01	2,2 ± 0,92
CCl 4 + антигепато-токсическое средство	3,4 ± 0,01 ⃰	5,2 ± 0,07 ⃰	2,2 ± 0,04	1,6,± 0,81
Интактный контроль	1,2 ± 0,02	1,2 ± 0,02	1,4 ± 0,01	–

Примечание : ⃰ — различия достоверны по сравнению с контролем р ≤ 0,05; n — количество животных в группе.

В группе животных, получавших изучаемое средство, митотический индекс в клетках печени возрастал по сравнению с контролем в 2,2–2,5 раза на первые сроки исследований 14 и 28 сутки эксперимента.

Число двуядерных гепатоцитов в группе животных, получавших анти-гепатотоксическое средство увеличивалось по сравнению с контролем (табл. 2).

Таблица 2

Влияние антигепатотоксического средства на регенерацию печени при хроническом гепатите; М ± m; n=7

Группы   жи вотных	Сроки исследования, сутки
	Число двуядерных клеток			Число гипертрофированных клеток
	14	28	35	14	28	35
CCl 4 (контроль)	19,2±1,20	13,9±0,60	14,0±0,8 1	21,2±1,18	19,5±1,19	22,1±1,33
CCl 4 + антиге-пато-токсическое средство	2 ±2,11⃰	29,7±2,29⃰	41,9± 1,23	49,2±2,12	43,4±2,11⃰	69± 4,31⃰
Интактный контроль	7,8±0,22	77,9±0,78	7,4 ±011	11,2±0,41	10,4±0,41	16,7±0,68

Примечание : ⃰ — различия достоверны по сравнению с контролем Р ≤ 0,05; n — количество животных в группе.

Число двуядерных гепатоцитов возрастало к концу исследований по сравнению с контролем в три раза. Среднее число гипертрофированных клеток у крыс на фоне введений антигепатотоксического средства увеличивалось до 69,7 ± 0,3 при контроле 22,1 ± 1,3. Все эти явления свидетельствовали о том, что в печени крыс, получавших антигепатотоксиче-ское средство, регенераторные процессы проходили значительно активнее в сравнении с таковыми у крыс контрольной группы.

По мере восстановления структуры и функции органа, снижались митотическая активность гепатоцитов и возрастало число гипертрофированных клеток.

По мере восстановления структуры и функции органа, снижались митотическая активность гепатоцитов и возрастало число гипертрофированных клеток (табл. 3).

Таблица 3

Показатели регенерации печени белых крыс при действии антигепатотоксического средства при хронической токсическом гепатите;

М ± m; n=7

Срок, исследования, сутки	Интактный контроль	Контроль CCl 4	Силибор	Антигепато-токсическое средство
Общее количество митозов (‰)
14	1,2 ± 0,02	1,8 ± 0,03	2,9 ± 0,01	3,4 ± 0,01
28	1,2 ± 0,02	2,9 ± 0,01	3,3 ± 0,07	5,2 ± 0,07
35	1,4 ± 0,01	2,0 ± 0,01	2,7 ± 0,04	2,9 ± 0,04
42	1,3 ± 0,01	2,3 ± 0,93	1,0 ± 0,27	1,6 ± 0,52
Число гипертро	ированных клеток (абс. ед.)
14	11,2 ± 0,43	21,2 ± 1,21	34,1 ± 1,07	49,2 ± 2.10
28	10,4 ± 0,41	19,5 ± 1,21	23,4 ± 1,20	43,4 ± 2,12
35	10,0 ± 0,22	22,1 ± 1,32	36,1 ± 1,02	69,7 ± 4,31
42	-	21,6 ± 1,81	26,0 ± 1,41	40,7 ± 2,02

Примечание : Достоверность разницы между опытом и контролем во всех случаях p ≤ 0,05.

Как видно из данных таблицы 3 регенераторные процессы в печени проявлялись в наибольшей степени в первые сроки исследований в группе животных, получавших антигепатотоксическое средство. По мере восстановления структуры и функции органа снижалась митотическая активность гепатоцитов, число гипертрофированных клеток оставалось повышенным а последующие сроки, по сравнению с контролем.

В печени животных контрольной группы восстановительные процессы запаздывали, митотическая активность и число гипертрофированных клеток во все сроки наблюдения колебались в незначительной степени. Активнее чем в контроле, протекали процессы регенерации в пече- ни животных, принимавших силибор. При анализе данных приведенных в таблице 3, для каждой группы животных в первые сроки была установлена обратная зависимость между митотической активностью и числом гипертрофированных клеток.

На 42-е сутки у животных, получавших антигепатотоксическое средство, значительно быстрее, чем в контроле, шли репаративные процессы в печени. Гепатоциты в дольках располагались радиально. Фиброз в печени крыс отмечен только в одном случае в виде тонких и нежных нитей коллагена, проходящих преимущественно по периферии дольки. Налицо были в печени крыс признаки активной регенерации (гипертрофированные и двуядерные гепатоциты, фигуры митоза). Репаративные процессы в условиях патологии во многом определяют исход заболевания, полноту восстановления структуры и функции органа [2].

Заключение

Таким образом, увеличение числа гипертрофированных и двуядерных клеток, способность делиться митозом свидетельствуют об их жизнеспособности и высокой функциональной активности. Такие клетки за счет большого размера и особенностей строения быстро осуществляют структурно-функциональную замену погибших одноядерных клеток.

В целом, анализ экспериментальных данных подтверждает, что применение многокомпонентного лекарственного антигепатотоксического средства стимулировало клеточное размножение, способствовало обратному развитию соединительной ткани и других патоморфологических изменений в печени и восстановлении ее нормальной структуры.