Оптимизация состава питательной среды для культивирования бактерий Moraxella bovis

При получении высокоактивных биопрепаратов в условиях промышленного производства большое значение имеет подбор питательной среды, которая обеспечивала бы высокое накопление бактериальной массы для создания вакцины. В качестве основы для приготовления питательных сред применяют мышечную ткань, которая является дорогим и ценным пищевым продуктом (В.И.Заерко, 1996; А.З.Равилов с соавт., 1999). Поэтому изыскание альтернативных и дешевых белковых источников является актуальной задачей.

Нами на первом этапе проводилась работа по изысканию жидкой питательной среды на основе гидролизата непищевых отходов мясокомбината для культивирования бактерий Moraxella bovis. Данные экспериментальных исследований свидетельствуют о том, что по сравнению с другими использованными в опытах питательными средами при стационарном культивировании наиболее высокая концентрация микробных клеток достигнута в среде на основе ферментативного гидролизата маточно-плацентарно-эмбриональной массы коров (ФГМПЭМ) с добавлением сыворотки крови крупного рогатого скота.

Однако для промышленного производства вакцины необходим более высокий выход биомассы бактерий.

Исходя из этого, целью данной работы явилось испытание различных ростовых добавок, в качестве которых были предложены гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, гидролизат соевой муки.

Материалы и методы. Культивирование осуществляли в стационарных условиях в течение 24 часов при температуре 36-37°С. Для посева использовали культуры Moraxella bovis, выращенные на кровяном агаре, которые смывали изотоническим раствором натрия хлорида. Концентрацию общего количества микробных клеток определяли фотоэлектрокалориметрическим методом. Количество жизнеспособных клеток (колониеобразующих единиц - КОЕ) вычисляли по количеству сформировавшихся колоний при высеве на плотные питательные среды 0,1 мл микробной суспензии из 10-кратных разведений исходной культуры.

Мазки из суточной культуры окрашивали по Граму. Протеолитическая активность возбудителя оценивалась по его способности разжижать желатину. Реакцию на оксидазу устанавливали с помощью 1%-ного раствора парааминодиметиланилина. Для определения ферментативных свойств культура пересеивалась на среды Гисса с 1%-ным содержанием глюкозы, сахарозы, лактозы и маннита.

Результаты исследований. Результаты исследований представлены в таблицах №1 и №2.

• 1.    Результаты оптимизации питательной среды для культивирования моракселл при использовании дрожжевого экстракта гидролизата казеина

  № опыта	Дрожжевой экстракт, %	Гидролизат казеина, %	Концентрация млрд. м.к. / мл
  1	0	0	0,25
  2	2	0	0,29
  3	0	2	0,26
  4	2	2	0,28
  5	5	0	0,32
  6	0	5	0,27

• 2.    Результаты оптимизации питательной среды для культивирования бактерий моракселл при использовании гидролизата соевой муки.

  № опыта	Гидролизат соевой муки, %	Концентрация млрд. м.к. / мл
  1	0	0,25
  2	5	0,29
  3	10	0,34
  4	20	0,36
  5	30	0,43

Результаты проведенных исследований показали, что оптимальным является добавление в питательную среду на основе ФГМПЭМ 5% дрожжевого экстракта и 30% гидролизата соевой муки. Добавление гидролизата казеина не привело к резкому увеличению численности популяции бактерий.

Во всех исследованных образцах моракселл, полученных при культивировании, морфология и биохимические свойства были типичными. Опыты по изучению влияния ростовых добавок на увеличение концентрации микробных клеток при глубинном культивировании продолжаются.

ЛИТЕРАТУРА:1.3аерко В.И. Производство живых вакцин против сальмонеллеза животных на питательных средах из непищевого сырья: Автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. вет. наук /В.И.Заерко. -Москва, 1996.-18с. 2.Равилов А.З., Гильмутдинов Р.Я., Хусаинов М.Ш. Микробиологические среды. - Казань: Фэн, 1999.- с. 78. З.Хабаров А.К. Оптимизация состава питательных сред для культивирования гемофильных бактерий //Ветеринарная биотехнология: Настоящее и будущее. Материалы международной конференции. - Щелково. - 2004. -с.69-70.

ОПТИМИЗАЦИЯ СОСТАВА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ MORAXELLA BOVIS

Нургалиева А.Р.

Резюме

Проведено испытание различных ростовых добавок с целью увеличения численности популяции бактерий Moraxella bovis в питательной среде на основе ферментативного гидролизата маточно-плацентарно-эмбриональной массы коров (ФГМПЭМ). Полученные экспериментальных исследований позволяют сделать вывод о том, что оптимальным является добавление в исходную питательную среду 5% дрожжевого экстракта и 30% гидролизата соевой муки.

OPTIMIZATION MEDIUM FOR CULTIVATION MORAXELLA BOVIS

Nurgalieva A.R.