Особенности цитокиновой регуляции при хронических вирусных гепатитах у детей

Ключевую роль в патогенезе формирования вирусных инфекций играют изменения функционального статуса иммунокомпетентных клеток, проявляющиеся, в частности, модуляцией их цитокинпродуцирующей и рецеп-торэкспрессирующей способности [6-8]. Иммунодиагностика при всех процессах имеет значение для изучения этиопатогенеза заболевания, прогнозирования обострения, для выбора метода лечения и оценки его эффективности [9]. По литературным данным в развитии и течении вирусных поражений печени важная роль принадлежит цитокинам. Нарушение баланса между про- и противовоспалительными цитокинами играет важное значение в иммунных механизмах поражения печени.

Цель работы: изучение уровней ИЛ-1, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ФНО-α, γ-интерферон у больных детей с хроническими вирусными гепатитами В (ХВГВ) и хроническими вирусными гепатитами С (ХВГС) в репликативной и интегративной фазе с различной степенью выраженности цитолитического синдрома.

Для характеристики иммунного ответа у больных с ХВГВ и ХВГС в репликативной и интегративной фазе нами изучен достаточный спектр цитокинов. Он включал группу провос-палительных цитокинов, продуцируемых в ответ на прямое действие вируса – ФНО-α, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, противоспалительных цитокинов – ИЛ-4 и группу цитокинов – активаторов Т-лимфоцитов и регуляторов иммунного воспаления – γ-интерферон, ИЛ-4, ИЛ-10.

Материалы и методы исследования: Проведено исследование цитокинового профиля у 177 детей с ХВГВ и ХВГС. Под наблюдением находилось 177 детей с хроническими вирусными гепатитами в возрасте от 7 месяцев до 18 лет. Пациенты были разделены на 2 группы в зависимости от этиологии ХВГ: I группа – 87 детей с ХВГВ, II группа включала 90 детей с ХВГС. Из обследованных детей у 34,5% с ХВГВ, 56,7% с ХВГС наблюдалась фаза репликации. У остальных больных была фаза интеграции.

В соответствии с поставленными задачами были проведены клинические наблюдения и исследования с применением общеклинических, биохимических, инструментальных, иммунологических методов, позволяющих получить наиболее полную и объективную информацию о наблюдаемых детях, больных ХВГ. Верификация диагноза проводилась методом ПЦР и иммуноферментного анализа (ИФА). Диагноз ставился в соответствии с современными требованиями, с учетом классификации хронических гепатитов (Лос-Анжелес, 1994) и МКБ 10 пересмотр (1995). Иммунологические исследования проводились на базе Института экспериментальной медицины и биотехнологий Самарского государственного медицинского университета. Вышеуказанные цитокины в сыворотке крови определяли методом ИФА с применением наборов реагентов, выпускаемых ООО «Протеиновый контур» (г. Санкт-Петербург, 2004) по прилагаемым инструкциям, результаты выражали в пг/мл. Полученные в ходе работы данные, регистрировались в индивидуальных картах с одновременным кодированием для последующей компьютерной обработки. Для оформления результатов исследований применялись пакеты из системы Microsoft Office-2010 и CorelDraw-13.

Результаты исследования и их обсуждение. Нами было проведено исследование сыворотки крови детей, больных ХВГВ и ХВГС в репликативной и интегративной фазе на соотношение уровня цитокинов (табл. 1).

Таблица 1. Соотношение уровня цитокинов при хронических вирусных гепатитах В и С у детей

Примечание: уровни достоверности различия с контролем: * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001

Как видно из представленной таблицы, уровень ФНО-α в сыворотке крови у обследуемых детей был повышен у всех групп. Наименьшие показатели данного цитокина были выявлены при ХВГС в интегративной фазе (22,74±0,77 пг/мл). Более выраженное повышение этого показателя наблюдалось при ХВГВ в репликативной фазе (69,1±4,53пг/мл). Полученные результаты подтверждают данные литературы о повышении этого цитокина у больных ХВГ как медиатора, отражающего интенсивность воспаления [10, 11]. ФНО-α (как и ИЛ-1 и ИЛ-6) участвует в реализации многих местных и системных проявлений воспалительной реакции.

Одним из главных цитокинов, ответственных за развитие местной воспалительной реакции и острофазного ответа на уровне всего организма, является интерлейкин-1 (ИЛ-1) [1]. Он стимулирует продукцию противоспалительных цитокинов – ИЛ-6, ФНО-α, ИФН-γ. Наибольшая продукция ИЛ-1β связана с активацией макрофагов, что происходит на ранних этапах заболевания. Наибольшие значения ИЛ-1 мы наблюдали в репликативной фазе ХВГВ (13,75±1,01 пг/мл), в интегративной фазе ХВГС (12,58±0,58 пг/мл). В интегративной фазе происходит деструкция печеночных клеток.

ИФН-γ – эндогенный модулятор, индуктор II типа. По литературным данным ИФН-γ играет центральную роль в развитии хронического воспаления. Он усиливает действие ФНО-α рядом клеток. ИФН-γ усиливает выработку ИЛ-8, активирует синтез белков острой фазы клетками печени. При хронических вирусных гепатитах В и С у детей в интегративной фазе показатель ИФН-γ выше, чем в репликативной, и составил 22,91±1,43 пг/мл и 14,1±0,66 пг/мл соответственно.

При определении концентрации противовоспалительных цитокинов ИЛ-6, ИЛ-8 у детей с ХВГВ отмечалось достоверное увеличение их уровня по сравнению с показателями в контрольной группе (табл. 1). Можно предположить, что повышенный уровень противо-спалительных цитокинов обусловлен стимуляцией мононуклеарных фагоцитов и усилением цитотоксической реакции, результатом чего является элиминация HBV и HCV инфицированных гепатоцитов у детей с ХВГВ и ХВГС. Более повышенные показатели цитокинов ИЛ-6, ИЛ-8 при ХВГВ и ХВГС – в интегративной фазе ХВГВ и ХВГС (41,85±1,64пг/мл) и 72,58±2,96пг/мл), чем в репликативной.

ИЛ-10 является мощным противоспали-тельным цитокином [12-14]. Он ингибирует продукцию ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-α. Показатели ИЛ-10 в обе фазы ХВГВ и ХВГС находятся в пределах нормы. ИЛ-4 – противоспа-лительный цитокин – в обе фазы остается в пределах нормы, но несколько выше в фазу репликации по сравнению с фазой интеграции. Дефицит ИЛ-4 способствует увеличению апоптоза мононуклеарных клеток крови [15]. Поскольку этот показатель по сравнению ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-α ниже, воспалительная реакция не подавляется, поэтому идет хронизация процесса.

Если сравнить показатели цитокинов в репликативной и интегративной фазе при хронических вирусных гепатитах В и С у детей, то следует отметить, что в репликативной фазе вышеуказанные показатели усугублены. Это говорит о том, что в репликативной фазе ХВГ более тяжело протекает заболевание (рис. 1, 2). Отклонение уровня ИЛ-1, ИЛ-10, ФНО-α цитокинов в сыворотке крови больных с ХВГ от нормальных показателей является индикатором серьезности протекания воспалительного процесса в печени.

- ♦ - ХГВ РФ

■ ХГВ ИФ

Рис. 1. Показатели уровня цитокинов в репликативной и интегративной фазе при хронических вирусных гепатитах В у детей

Рис. 2. Показатели уровня цитокинов в репликативной и интегративной фазе при хронических вирусных гепатитах С у детей

Выводы: при ХВГС происходит снижение противовоспалительных цитокинов ИЛ-4, ИЛ-10 и нарастание провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, что говорит о хронизации процесса. ИЛ-1 – важный прогностический критерий, так как он участвует в деструктивных процессах. Нарастание ИЛ-1 при ХВГС (в 2 раза) в интегративной фазе является прогностически неблагоприятным показателем. При ХВГВ ИЛ-1 в интегративной фазе снизился, поэтому несмотря на то, что прогрессирование процесса хронизации идет, в прогностическом отношении прогноз более благоприятный. Данный показатель свидетельствует о том, что у ХВГВ более благоприятное течение, чем у ХВГС. Особенностями ХВГ являются диссоциации между уровнем провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-α и противоспа-лительных ИЛ-4, ИЛ-10. Это свидетельствует о дезинтеграции воспалительного процесса с переходом в хроническое течение.