Особенности электрофоретической подвижности эритроцитов у пациентов на программном гемодиализе

систирующих в течение более трех месяцев вне зависимости от нозологического диагноза. ХБП ассоциирована с высоким риском кардиоваскулярных заболеваний, преждевременной (ранней) смертностью, резким снижением качества жизни [1–3], поэтому важно использовать методы диагностики, спо- собные выявить прогрессирование патологических процессов при данном заболевании.

В последние годы все больше уделяется внимание диагностике состояния клеточных мембран в изучении патогенетических механизмов многих заболеваний. Причина лежит в том, что мембрана эритроцитов — универсальная модель клеточной мембраны, так как ей присущи общие принципы организации и функционирования мембран других клеток [4]. Одним из перспективных методов исследования является определение электрофоретической подвижности эритроцитов (ЭФПЭ), способной отражать не только изменение заряда мембран, но и состояние организма в целом [5]. К плюсам метода можно отнести то, что он более чувствителен к изменениям гомеостаза организма в отличие от иных клинико-лабораторных исследований [6], а также возможность в некоторых случаях судить о выраженности патологического процесса на основании того, что снижение ЭФПЭ коррелирует с тяжестью развивающейся патологии [5]. Из минусов следует отметить неспецифич-ность метода в отношении какой-либо этиологии [6]. К сожалению, существует довольно немногочисленное количество исследований касаемо изменения ЭФПЭ при хронических заболеваниях, в том числе при ХБП. Исходя из актуальности проблемы и ее недостаточной разработанности, нами была сформулирована цель исследования.

Цель — провести анализ электрофоретических свойств эритроцитов у пациентов, получающих лечение программным гемодиализом.

Материалы и методы. В исследование включены 100 пациентов, получавших лечение программным гемодиализом. Критериями включения в группу исследования служили наличие установленного диагноза «Хроническая болезнь почек, 5d-стадия» и получение лечения в виде заместительной почечной терапии методом программного гемодиализа в выбранных медицинских организациях. Средний возраст пациентов составил 56,5±11,8 года (от 30 до 80 лет). Группа исследования разделена по нескольким признакам: по полу, возрасту (по критериям Всемирной организации здравоохранения) и длительности диализного периода. Процедуры гемодиализа проходили в городе Ижевске (БУЗ Удмуртской Республики «Городская клиническая больница № 6 Министерства здравоохранения Удмуртской Республики», ОАО «Медицинские сервисные решения», обособленном подразделении ООО «ФРЕЗЕНИУС НЕФРОКЕА» г. Ижевска). Процедуры выполнялись по 4–4,5 часа 3 раза в неделю с применением полисульфоновых диализаторов. Для выявления особенностей нарушений клеточных мембран была взята группа сравнения, в которую включены 17 практически здоровых лиц (доноры крови ГУЗ «Республиканская станция переливания крови Министерства здравоохранения Удмуртской Республики»), сопоставимые по возрасту и полу.

Определение ЭФПЭ проводили с помощью комплекта «Цито-эксперт» (ОАО «Аксион холдинг», г. Ижевск, ЮМГИ. 941413.0012010 г.) и программного обеспечения WT-Cell (предоставлена ООО «Ве-стрейд»), обеспечивающего возможность регистрации и оценки параметров движения живых клеток под действием знакопеременного электрического поля с заданными характеристиками, используя ви- деокамеру, подключенную к окуляру светового микроскопа «Биолам». Для исследования забирали венозную кровь из фистулы пациента перед процедурой гемодиализа. Суспензионная среда для осуществления электрофореза имеет следующий состав: 1 мл 5%-го раствора глюкозы + 1 капля (0,05 мл) нативной крови исследуемого. В центр рабочей зоны выдвижной платформы дозатором помещали 40–50 мкл полученной суспензии эритроцитов. Каплю накрывали покровным стеклом, расположив его строго симметрично относительно черных графитовых электродов, после чего на электроды подавалось напряжение в 30 В с частотой смены полярности направления тока на электродах в 0,25 Гц. При этом в рабочей зоне поддерживался ток, равный 0,01 мА.

В ходе исследования выделены следующие показатели, зарегистрированные программой в ходе анализа суспензионной среды: средняя амплитуда колебания эритроцитов, средняя доля подвижных клеток, средняя эллиптичность эритроцитов и средний индекс агрегации.

Статистическая обработка результатов исследования проведена с использованием прикладных программ Statistica 13 (2018 г., версия 13.5.0.17) и Microsoft Excel 2016. Данные были описаны в виде М ±σ ( M — средняя арифметическая, σ — стандартное отклонение). Функцию нормальности распределения значений оценивали при помощи критерия Колмогорова — Смирнова. Значимость различий результатов исследования подтверждена определением критерия Манна — Уитни ( Т ). За величину уровня статистической значимости различий принимали p ≤0,05.

Результаты. Средняя амплитуда колебаний эритроцитов крови пациентов на гемодиализе составила 10,2±4,7 мкм, в группе сравнения — 21,3 ±8,5 мкм ( p <0,001). Средняя доля подвижных клеток в группе исследования была 69,5±18,6%, в группе сравнения — 89,8±9,9% ( p >0,05). Средняя эллиптичность в исследуемой группе (70,2±3) и в контрольной группе (68,6±2,9) отличалась незначительно ( p <0,05). Средний индекс агрегации в исследуемой группе составил 24,8±16,2, в группе сравнения — 20,9±11,7 ( p >0,05).

На следующем этапе пациенты, получающие лечение программным гемодиализом, разделены на группы по полу, возрасту, стажу диализа, в их пределах проанализированы различия по указанным показателям.

При разделении по гендерному признаку (табл. 1) в группе исследования 46 человек составили женщины в возрасте 57,8±13,9 года, 54 человека — мужчины в возрасте 55,4±13,9 года, длительность диализного периода для женщин составила в среднем 4,0±4,3 года, для мужчин — 3,5±3,7 года. В ходе анализа было выявлено, что значимых гендерных различий по всем четырем показателям в исследуемой группе нет.

Разделение по возрастному признаку согласно критериям Всемирной организации здравоохранения (табл. 2). В первую группу (молодой возраст, 25–44 года) вошли 25 пациентов, среди которых 14 мужчин (56%) и 11 женщин (44%) в возрасте 37,2±4,48 года. Во вторую группу (средний возраст, 45–60 лет) вошли 29 пациентов, среди которых 19 ужчин (65,5%) и 10 женщин (34,5%) в возрасте 53,7±4,8 года. В третью группу (пожилой возраст, 61–

Таблица 1

Распределение средних показателей электрофоретической подвижности эритроцитов по полу, М ±σ

Показатель	Женщины	Мужчины	p
Амплитуда колебаний, мкм	10,0±5,0	10,2±4,4
Доля подвижных клеток, %	68,8±20,7	70,2±16,8	>0,05
Эллиптичность	70,0±2,8	70,4±3,2
Индекс агрегации, %	25,1±16,8	24,5±15,9

Таблица 2

Распределение средних показателей электрофоретической подвижности эритроцитов по возрасту, М ±σ

Показатель	Группа (возраст)				p
	I (молодой)	II (средний)	III (пожилой)	IV (старческий)
Амплитуда колебаний, мкм	9,0±4,9	9,9±4,6	10,9±4,9	11,7±1,8	p 1-4 =0,048
Доля подвижных клеток, %	65,5±21,0	73,4±15,6	68,6±19,5	73,4±15,0	>0,05
Эллиптичность	70,4±3,0	69,8±2,5	69,9±3,1	73,4±3,3	p =0,040 p 2 3 - - 4 4 =0,035
Индекс агрегации, %	22,2±17,1	24,3±13,7	26,7±16,7	25,5±22,6	>0,05

Таблица 3

Распределение средних показателей электрофоретической подвижности эритроцитов по диализному стажу, М±σ

Показатель	Группа (стаж)					p
	I (менее года)	II (1 год)	III (2–5 лет)	IV (6–10 лет)	V (более 10 лет)
Амплитуда колебаний, мкм	11,7±5,4	11,2±4,3	9,9±4,6	9,4±5,4	7,4±2,5	p =0,029 p 1 2 - - 5 5 =0,026
Доля подвижных клеток, %	69,5±18,0	74,4±17,8	69,8±17,7	66,1±22,0	59,5±18,6	>0,05
Эллиптичность	70,2±4,3	70,83±2,9	70,0±2,6	69,7±2,1	70,8±4,2
Индекс агрегации, %	32,5±19,4	23,3±14,3	21,6±17,7	25,6±10,5	30,6±13,8	p =0,044 p 1 3 - - 3 5 =0,035

75 лет) вошли 40 пациентов, среди которых 18 мужчин (45%) и 22 женщины (55%) в возрасте 67,2±3,7 года.

В четвертую группу (старческий возраст, 76–90 лет) вошли 6 пациентов, среди которых 3 мужчины (50%) и 3 женщины (50%) в возрасте 79,5±2,9 года. Статистический анализ показал, что статистически значимая разница ( p <0,05) средней амплитуды колебаний выявляется только между пациентами молодого и старческого возрастов. При сравнении возрастной динамики эллиптичности эритроцитов выявлено ее увеличение у пациентов ГД старческого возраста в сравнении со всеми другими возрастными группами, кроме молодого ( p <0,05). Возрастных отличий по доле подвижных клеток, индексу агрегации не получено ( p >0,05).

По признаку длительности диализного стажа (периода) разделение было произведено на пять групп. В I группу (стаж диализа меньше года) вошли 14 пациентов, среди которых 10 мужчин (71,4%) и 4 женщины (28,6%) в возрасте 63,9±13,1 года, длительность диализного периода составила 0,5±0,2 года. Во II группу (стаж диализа 1 год) вошли 23 пациента, среди которых 10 мужчин (43,5%) и 13 женщин (56,5%) в возрасте 59,4±14,5 года, длительность диализного периода составила 1,1±0,2 года. В III группу (стаж диализа от 2 до 5 лет) вошли 40 пациентов, среди которых 22 мужчины (55%) и 18 женщин (45%)

в возрасте 53,2±13,8 года, длительность диализного периода составила 2,8±0,9 года. В IV группу (стаж диализа от 6 до 10 лет) вошли 16 пациентов, среди которых 9 мужчин (56,3%) и 7 женщин (43,7%) в возрасте 55,1±10,8 года, длительность диализного периода составила 7,8±1,3 года. В V группу (стаж диализа более 10 лет) вошли 7 пациентов, среди которых 3 мужчин (42,9%) и 4 женщины (57,1 %) в возрасте 54,7±15,9 года, длительность диализного периода составила 14,9± 2,8 года. По данным статистического анализа, увеличение стажа диализа ведет к прогрессивному ухудшению показателей ЭФПЭ (табл. 3): средняя амплитуда колебаний снижена в 5-й группе в сравнении с I и II группами 1,5 раза (с 11,7±5,4 мкм до 7,4±2,5 мкм, p <0,05). Наблюдались различия среднего индекса агрегации между I и III группами ( p <0,05) и III и V группами ( p <0,05). Эллиптичность и доля подвижных клеток достоверно значимым изменениям с увеличением стажа гемодиализа не подвергались.

Обсуждение. В периодической научной литературе чаще представлены исследования, которые касаются влияния относительно непродолжительных негативных факторов на изменение ЭФПЭ, которыми могут являться действие активных форм кислорода [4], острые воспалительные заболевания, например пневмония [5]. При этом менее многочисленны дан- ные об изменениях, возникающих на фоне хронических заболеваний [7, 8], в том числе касающиеся пациентов с ХБП, получающих лечение программным гемодиализом [9]. В нашей работе мы представили данные о различиях ЭФПЭ между здоровыми и людьми с ХБП на гемодиализе, а также внутри выборки пациентов по возрастным и половым признакам, по стажу проведения гемодиализа. Полученные данные могут являться дополнением к существующим знаниям об исследуемом вопросе. Ограничением данной работы является небольшой объем выборки в некоторых группах пациентов, поэтому в данном направлении желательно провести более прицельное исследование.

Касательно выявленного снижения средней амплитуды колебания эритроцитов у пациентов на гемодиализе относительно контрольной группы можно предположить, что данное изменение обусловлено вовлечением стрессреализующих систем в ответ как на само заболевание, так и на процедуру гемодиализа. По данным ряда авторов, в этом случае нарушается нормальное состояние цитоплазматических мембран, отчего и изменяется их заряд [5, 10]. Изменения эллиптичности эритроцитов могут быть обусловлены изменениями цитоскелета пациентов, связанными с процедурой гемодиализа [11].

Меньшее среднее значение амплитуды колебаний эритроцитов у молодых пациентов по сравнению с пожилыми можно попытаться объяснить тем, что пациенты, достигшие ХБП 5d-стадии в более молодом возрасте, имеют более высокие темпы прогрессирования заболевания и бóльшую его тяжесть. Однако допускается, что данная аномалия может быть обусловлена погрешностью в связи с малой выборкой пациентов пожилого возраста. Увеличение значения эллиптичности у пациентов пожилого возраста по сравнению с остальными (кроме молодых) можно связать с возрастными изменениями мембран эритроцитов — повышением жесткости и морфометрических показателей [12].

Прогрессивное ухудшение показателей средней амплитуды колебаний с увеличением стажа диализа предположительно связано с влиянием хронического стресса на мембраны эритроцитов в виде усиления ПОЛ, изменения Na/КАТФ-азы и истощения системы глутатиона [7]. Выявленные отличия в индексе агрегации эритроцитов между группами I–III и III–V можно связать с несколькими причинами, возможно взаимодополняющими друг друга. Во-первых, описывается прямо пропорциональное отношение индекса агрегации и тяжести течения некоторых заболеваний [13, 14], из чего, возможно, следует, что в течение первого года и после 10 лет проводимого программного гемодиализа патологический процесс, обусловленный ХБП 5d-стадии, проявляет себя наиболее активно. Во-вторых, показано, что агрегационные свойства связаны в том числе с состоянием мембран эритроцитов [15], что предположительно указывает на особенно выраженные изменения в их структуре именно в указанные периоды. Тем не менее обнаруженные изменения могут быть результатом погрешности вследствие малых выборок.

Заключение. Таким образом, по результатам проведенного анализа с уверенностью можно сказать только то, что показатели ЭФПЭ достоверно изменяются лишь у группы пациентов с ХБП 5d-стадии на гемодиализе в общем, при этом предположительно прослеживается тенденция к прогрессивному снижению средней амплитуды колебания эритроцитов при увеличении диализного стажа. Однако выявленные отличия среди пациентов при разделении на группы по указанным признакам при текущем объеме выборки могут считаться показанием для повторного исследования с увеличением числа участников.