Особенности регенерации слизистой оболочки подвздошной кишки детей с различным течением болезни Крона

Введение. Болезнь Крона (БК) – это хроническое рецидивирующее заболевание, характеризующееся трансмуральным гранулематозным воспалением с сегментарным поражением разных отделов пищеварительного тракта [1, 2]. В течение последних 15 лет отмечен неуклонный рост болезни Крона у детей, в том числе с ранней мани- фестацией заболевания, осложненным течением и множественной локализацей патологического процесса [3].

Согласно Монреальской классификации 2005 года в зависимости от фенотипического варианта болезни Крона выделяют: воспалительную (или инфильтративную, неосложненную), стенозирующую (или стриктурирующую) и пенетриру-ющую (или свищевую) формы заболевания. Две последние относятся к осложненным вариантам течения БК.

При БК воспалительный процесс, начинаясь в подслизистом слое, далее распространяется на все слои кишечной стенки [4]. Центральное место среди клеток-участников воспалительного процесса занимают макрофаги, которые, по-ви-димому, посредством различных медиаторов, координируют и модулируют активность воспалительной реакции и процессы регенерации [5, 6]. Учитывая неоднозначный характер данных по репаративным возможностям СО кишечника при болезни Крона, данная патология остается предметом для дальнейшего пристального изучения и уточнения, особенно у детей [7-11].

Цель исследования - изучить особенности регенерации СО кишечника при различном течении болезни Крона у детей.

Материал и методы исследования. Для проведения ретроспективного исследования были отобраны 23 первичных больных с БК в возрасте от 3 до 18 лет в илеобиоптатах которых не определялась лимфоидная ткань, и выявлялся воспалительный процесс. Было сформировано 2 группы: I группа - 10 пациентов с неосложненным течением заболевания (инфильтративная форма), II группа - 13 пациентов с осложненным течением (8 пациентов со стенотической формой и 5 пациентов – со свищевой). Группу сравнения составили биоптаты пациентов с болезнью Крона, где гистологически определялась СО подвздошной кишки без выраженных воспалительных изменений (10 илеобиоптатов).

Биопсийный материал, полученный при илеоколоноскопии, фиксировали в 10% забу-ференном формалине подвергали стандартной гистологической обработке, срезы окрашивали гематоксилином и эозином, альциановым синим и реактивом Шиффа. Подсчет клеточной плотности инфильтрата в строме ворсинок и межкриптально с вычислением абсолютного числа клеток на 1 мм2 производили с помощью программного обеспечения NIS-Elements Basic Research. Иммуногисто-химичское исследование с использованием Кi-67 антигена (MIB-1, “Novocastra») проводили для оценки пролиферативной активности эпителия крипт. При 400-кратном увеличении микроскопа определяли индекс пролиферации (ядерная метка Кi-67) как долю (в %) положительно окрашенных ядер эпителиоцитов в 10 случайно выбранных полях зрения. Просмотр гистологических препаратов осуществляли на микроскопе Nicon Eclipse E400.

При статистической обработке материала применяли непараметрический критерий Ман- на-Уитни. Различия считались статистически значимыми при р<0,05. Описательная статистика признака была представлена медианой (Ме) и интерквартильным размахом (Q25-Q75). Все полученные результаты обрабатывались с помощью пакета прикладных статистических программ Statistica 6,0.

Результаты исследования и их обсуждение. Характер и выраженность структурных изменений слизистой оболочки тонкой кишки у больных с БК обусловлены непрерывным хроническим воспалением и являются важной составляющей, определяющей характер течения данной патологии у конкретного пациента и результат регенерационного гистогенеза.

Наши исследования показали, что структурные показатели СО подвздошной кишки – высота ворсинок и глубина криптального слоя - при неосложненном течении БК достоверно не отли-

Таблица 1.

Морфометрические показатели эпителиального пласта слизистой оболочки подвздошной кишки у детей с неосложненным и осложненным течением болезни Крона

Примечание: Me [Q25-Q75] –медиана и квартильный размах, n – количество пациентов

Таблица 2.

Морфометрические показатели собственной пластинки слизистой оболочки подвздошной кишки у детей с неосложненным и осложненным течением болезни Крона

Примечание: Me [Q25-Q75] – медиана и квартильный размах, n – количество пациентов чаются от данных показателей группы сравнения. При осложненном течении болезни выявлено достоверное снижение высоты ворсинок (406,0 мкм [379,0-423,0], 425,0 мкм [378,0-430,0]; p=0,030), сопровождаемое снижением высоты их эпителия (р=0,002). Базальная мембрана эпителия в данной группе сохраняла свою четкость и шик-позитив-ную окраску лишь в 37% случаев, в 63 % случаев отмечалась ее разрыхленность и альцианофилия.

Морфометрическое исследование эпителиального пласта показало при неосложненном течении заболевания угнетение наиболее долгоживущих высокоспециализированных клеток: клеток Панета (р=0,038) и эндокринных клеток (р=0,011). Бокаловидные клетки сохраняли свою численность, но при этом изменялся профиль синтезируемых ими муцинов – секрет бокаловидных экзокриноцитов приобретал альцианофильную окраску.

При осложненном течении заболевания достоверно снижалось количество всех видов высокоспециализированных клеток: бокаловидных экзокриноцитов – в 1,5 раза, причем лишь единичные из них (до 8%) имели ШИК-позитивную окраску, остальные имели окраску смешанного типа (57%) и альцианофильную окраску (35%), клеток Панета – в 2,2 раза, энтероэндокринных клеток – в 4,3 раза, последние имели достоверную разницу в зависимости от течения заболевания (р=0,024).

Сравнительный анализ инфильтрации эпителиального пласта ворсинок выявил и в I и во II группах достоверное повышение межэпителиальных лимфоцитов (р=0,04 и р=0,009, эозинофильных гранулоцитов (р=0,011 и р=0,0006) и нейтрофильных гранулоцитов (р=0,047 и р=0,002) Достоверное повышение инфильтрации крипталь-ного эпителия эозинофильными гранулоцитами выявлено в обеих группах (р=0,0082 и р=0,0006), а увеличение числа межэпителиальных лимфоцитов (р=0,0015) и нейтрофильных гранулоцитов (р=0,0011) отмечалось лишь при осложненном течении заболевания.

Анализ собственной пластинки СО подвздошной кишки выявил, что еще в начале болезни, в период до развернутой клинической картины и развития осложнений при различном течении болезни Крона, имеются значительные различия морфометрических показателей. Так в группе детей с осложненным течением болезни Крона клеточная плотность воспалительного инфильтрата по отношению к этому показателю у детей I группы была выше в 1,3 раза (р=0,039). В инфильтрате преобладали клетки лимфо-плазмоцитарного ряда с присутствием нейтрофильных и эозинофильных гранулоцитов (табл. 2), что характеризует клеточное окружение в очаге воспаления и определяет угнетение клеток - продуцентов экстрацеллюлярного матрикса: зрелых фибробластов, обладающих выраженной синтетической активностью, тучных клеток, ассоциированных с базальными мембранами эпителия, продуцирующие гепарансульфатный протеогликан. При неосложненном течении заболевания отмечено достоверно более высокое содержание макрофагов.

Заключение. Нарушение соотношения клеток – продуцентов экстрацеллюлярного матрикса к клеткам инфильтрата, снижение стабильности эпителиального пласта определяют изменение регенераторного процесса при болезни Крона. Показатель пролиферативной активности регенераторной зоны крипт был достоверно выше в участках с выраженным воспалением: при неосложненном течении он повышался на 28% (р=0,031), при осложненном – на 18,5% (р=0,013). В рамках данного исследования нами не установлено достоверной разницы этого показателя в зависимости от течения болезни Крона. Однако, выявленное повышение пролиферативной регенераторной зоны крипт с целью восполнения структурной целостности эпителиального пласта при неблагоприятном течении заболевания происходит с максимальным нарушением постмитотической дифференцировки клеток, проявляемое достоверным снижением всех видов высокоспециализированных энтероцитов.

Важным критерием полноценной регенерации ткани является восстановление ее морфофункциональных единиц. Стимуляция пролиферативных процессов в условиях хронического воспаления при болезни Крона не приводит к полноценному восстановлению эпителиального пласта, а гиперрегенераторная реакция в эпителии может рассматриваться как неспецифический механизм адаптации. Стойкое рассогласование эпителиально-соединительнотканных взаимодействий у детей с неблагоприятным течением болезни Крона, сопровождается снижением количества и качества высокоспециализированных клеток эпителия и приводит к потере специализации поврежденной ткани, что свидетельствует о длительном нарушении ее функциональных возможностей.