Особенности репаративной активности озонированного оливкового масла при нанесении его на раневую поверхность у крыс породы Wistar

Заживление ран представляет собой сложный активный динамический процесс, который включает в себя несколько фаз: фаза воспаления, фаза регенерации и пролиферации, фаза реорганизации рубца и эпителизации. При этом эффективность репарации повышается при ускорении протекания как всех трех фаз, так и одной или двух из них.

На скорость репаративных процессов положительно влияют множество лекарственных средств и схем их применения. Хороший терапевтический эффект даёт использование жирных растительных масел с параллельным применением антимикробных препаратов. Однако в последнее время, на фоне неоднозначного отношения общества к антибиотикам современная фармакология вновь обратила свое внимание на известные антисептики из ряда окислителей. Одним из таких веществ является озон, который позволяет не только предотвратить образование гноя в ране (не используя антибиотики), но и улучшить кровообращение, что в свою очередь стимулирует регенеративные процессы.

Применяют озон в виде озоновоздушной смести озоно-кислородной смеси, озонированных, как органических, так и неорганических растворов, а применение его с растительным маслом, как например с оливковым, может даже предоставить необходимые энергоресурсы для восстановления поврежденных клеток.

Одним из способов ускорения заживления является использование оливкового масла. Его применение позволяет ускорить фазы раневого процесса, за счет своего химического состава [3].

Мы разработали способ, позволяющий озону на длительное время задерживаться в оливковом масле, образуя лекарственную субстанцию, содержащую мононенасыщенные жирные кислоты, благодаря чему, при их контакте с О 3 , образуются озониды.

Целью нашей работы было доказать способность озонированного оливкового масла, полученного разработанным нами способом (патент № 2794469) ускорять заживления ран, нанесенных искусственно, специально разработанным механическим способом у крыс породы Wistar.

Материал и методы исследований. Для проведения опыта использовались 18 особей аутбредных половозрелых крыс линии Wistar мужского пола одинакового веса (450±20 г); животные содержались в поликарбонатных клетках с решетчатым потолком, кормление производилось один раз в день зерносмесью из злаковых (пшеницы, кукуруза, минералы) в объеме 80 г, доступ к воде в пластиковых поилках с силиконовой пробкой и металлическим носиком был постоянен.

Для погружения крыс в глубокий сон подготавливали эксикатор объемом 3 л, в который помещали кусочек ваты, весом 10 г, хорошо смоченный в эфире, затем туда по одному сажали животных и закрывали сосуд крышкой. Животное засыпало спустя 15 минут. После чего на спине в области холки, от затылка до 4 поясничного позвонка, лезвием забривали участок, размерами 6х5 см.

Для изучения репаративного действия озонированного оливкового масла крысам с помощью иглы G25 с загнутым концом, изготовленные нами по авторской методике; и набора лезвий марки Gilette и Rapira platinym lux наносили ранки. Иглой, с загнутым концом в виде крючка, поддевали и натягивали участок кожи, затем лезвием срезали круглые кусочки равного диаметра (Рисунок 1).

Рисунок 1 – Схема нанесения ранок на спины крыс

Рисунок 2 – Период заживления ран

По окончании всех манипуляций крыс разделили на 3 группы, по 6 животных в каждой.

1-ю группу обрабатывали озонированным оливковым маслом марки Spainolli Extra Virgin, по разработанной нами методике (патент № 2794469);

2-ю – оливковым маслом Spainolli

Extra Virgin, без О 3 ;

3-я группа оставалась контрольной.

Результат         исследований.

Обработку маслом осуществляли 2 раза в день с интервалом в 12 часов, до полного заживления раны. Опыт проводился в течение двух недель. Весь период заживления ран был представлен в виде графика (Рисунок 2).

• -    I фаза – фаза воспаления, у животных 1,2,3 группы начиналась сразу после нанесения раны, характеризовалась болевой реакцией, вызванной высвобождением медиаторов воспаления, и продолжалась 3 дня.

Однако изменения локальных размеров раневого участка от момента нанесения и до истечения третьих суток различались существенно и увеличились у животных 1 группы на 29 %, составив 0,22 см2.

У животных второй группы увеличение площади ран, составило 53 %, достигнув площади в 0,33 см2, что на 34 % превышало размеры ран у животных 1 группы.

У животных контрольной группы увеличение площади ран составило 56 %, достигнув площади в 0,353 см2, что на 6,6% превышало размеры ран у животных 2 группы и на 37,7 % площадь ран у животных 1 группы.

Таким образом, применение озонированного оливкового масла существенно (на 37,7 %) сокращало площадь разрастания раны, снижая последствия фазы воспаления. На наш взгляд это связано с тем, что в период фазы воспаления активную роль играет олеокантал – фенольный компонент оливкового масла, способный ингибировать активность циклооксигеназы, тем самым препятствуя образованию медиаторов воспаления, имитируя действие нестероидных противовоспалительных средств. Это позволяет утверждать, что озон может выступать в качестве анальгезирующего средства, за счет своей способности окислять соединения, состоящие из двойных связей, как например, арахидоновую кислоту и синтезируемые из нее простагландины (медиаторы воспаления).

• -    II фаза – фаза регенерации и пролиферации, которая характеризовалась образованием и созреванием грануляционной ткани, у крыс 1,2,3

группы наступала после окончания фазы воспаления, но длилась у каждой группы в разном временном промежутке. У первой группы – трое суток, у второй – четверо, а у третьей – шесть суток.

У животных, обработанных озонированным оливковым маслом заживление ранок происходило без осложнений, наблюдали размягчение струпьевидных корочек на 3-4 день, что приводило к уменьшению площади ран на 22,8 % и снижению болевого эффекта при отторжении корочек. К шестому дню фаза регенерации заканчивалась, при этом площадь поражения сократилась до 0,07 см2.

Во второй группе у животных отмечался легкий зуд и покраснения вокруг пораженных тканей, подопытные крысы выражали беспокойство, пытались содрать корочки. На 4-5 день уменьшение площади раны составило 0,166 см2, сократившись по сравнению с фазой воспаления на 50 %. Однако по сравнению с животными, получавшими в качестве терапии озонированное оливковое масло площадь ран была больше на 22,3 %.

У крыс контрольной группы на 4-6 день наблюдался ярко выраженный зуд, болевые ощущения в области ран, гиперемия, окружающие ткани были уплотнены и отечны. Активная фаза регенерации и пролиферации началась только на 5-6 сутки и продолжалась до 8 суток. Уменьшение площади ран к восьмым суткам составило 55,6 %. При этом интенсивность заживления ран у животных первой группы к 8 суткам в двое превышало аналогичный показатель у животных группы контроля.

У животных первой группы период регенерации и пролиферации протекал быстрее на 25 %, чем у второй и на 50 %, чем в контрольной группе животных. В то же время, во второй группе заживление протекало на 34 % быстрее по сравнению с контрольной группы. Что на 16 % меньше, чем в группе, где применялся озон.

Мы считаем, что данная динамика связана с тем, что озон, находящийся в оливковом масле, распадался на молекулярный и атомарный кислород, позволяя обеспечить тканевую оксигенацию, что поддерживало клеточный метаболизм и стимулировало образование энергии, используемую организмом подопытных животных на репаративные процессы.

Кроме этого, оливковое масло содержит большое количество мононенасыщенных жирных кислот, а именно олеиновую кислоту, которая является структурным элементом клеточных мембран, что способствует быстрой регенерации и пролиферации.

Фаза эпителизации у животных первой группы закончилась к 7 дню опыта. При осмотре ран было установлено окончательное заполнение их соединительной тканью и максимальное сближение краев раны.

У крыс, обработанных оливковым маслом рубцевание поврежденных тканей происходило на 9 день. У животных контрольной группы полное заживление фиксировали только к 14 дню опыта.

Заключение. Проведенные исследования дают возможность нам сделать вывод, что применение озонированного оливкового масла, полученного разработанным нами способом (патент № 2794469), позволяет ускорять заживления ран, нанесенных искусственно, специально разработанным механическим способом у крыс породы Wistar .