Острая токсичность нового антиоксидантного препарата «Полиоксидол»

В последние годы внимание многих ученых в области ветеринарной медицины привлекает проблема развития свободнорадикальной патологии у животных. Современный взгляд на патогенез многих болезней позволяет говорить о том, что нарушение оксидантного – антиоксидантного равновесия в организме является причиной накопления высоких концентраций свободных радикалов, а это, в свою очередь, выступает в качестве одного из этиологических факторов возникновения патологии вначале на уровне клетки, а затем и на уровне ткани, органа, системы и организма в целом [1, 5].

Контроль за течением свободнорадикальных реакций осуществляет многоуровневая система антиоксидантной защиты организма. При нарушении в ее функционировании в организме животных происходят метаболические сбои.

Разработка современных антиоксидантных препаратов, удовлетворяющих по своим параметрам ветеринарно-санитарные нормы и по своим ценовым характеристикам являющихся приемлемыми для применения в условиях отечественного продуктивного животноводства, а также регламента их использования является актуальной задачей ветеринарной науки. Одним из обязательных пунктов доклинического исследования новых лекарственных форм препаратов для животных значится изучение острой токсичности. Именно на основании их результатов, в том числе, появляется возможность суждения о безопасности субстанции и целесообразности ее использо- вания в ветеринарной практике [2, 6].

Целью настоящего исследования явилось установление параметров острой токсичности нового препарата «Полиоксидол» обладающего антиоксидантными свойствами.

Материалы и методы. Местом проведения экспериментов являлся виварий факультета ветеринарной медицины Ставропольского ГАУ. В качестве лабораторных моделей использовались белые мыши весом 25±3 г и не линейные белые лабораторные крысы весом 143,2±12,1 г. Испытуемый препарат «Полиоксидол» разработан на кафедре терапии и фармакологии Ставропольского ГАУ и представляет собой водорастворимый комплекс для инъекций [3]. Исследования выполняли в соответствии с требованиями Методических указаний по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных [4]. Для нахождения максимальнопереносимых доз препарата (МПД) белых мышей и лабораторных крыс делили на 10 групп по 6 животных в каждой. Препарат им вводили внутрижелудочно в виде раствора с водой для инъекций в возрастающих дозах, затем в течение 14 суток проводили клиническое наблюдение и взятие крови для гематологического исследования. Для определения летальных доз было сформировано 6 групп белых мышей и 6 групп белых лабораторных крыс, в каждой из которых было по 8 особей. Препарат внутрижелудочно вводили в возрастающих дозах с равным интервалом, первой из которых являлась максимально переноси- мая. Регистрировали количество выживших и погибших животных в группах, выражали летальность в процентах и пробитах. Нахождение среднесмертельной дозы и значение ошибки средней величины дозы проводили расчетным методом, а дозы LD16 и LD84 определяли графическим методом.

Результаты исследований. Исходя из данных, полученных при проведении гематологического анализа крови белых мышей и белых лабораторных крыс, в качестве максимально переносимых доз были приняты не те, при введении которых наблюдалась гибель животных или выраженная клиническая кар- тина токсикологического воздействия, а те, при воздействии которых отмечены первые статистически значимые различия в гематологических показателях. Такие изменения отмечены относительно уровня гемоглобина у белых мышей при введении дозы испытуемого действующего вещества равной 580 мг/кг, она и была взята за основу для дальнейшего изучения параметров острой токсичности для данного вида животных в остром опыте. У крыс достоверная разница в уровне гемоглобина, количестве лейкоцитов и моноцитов отмечены при введении дозы равной 710 мг/кг массы тела.

Таблица 1 - Схема опыта и результаты изучения острой токсичности полиоксидола

X s й m S в й	В в &	Доза препарата, мг/кг	Количество животных в группе на начало опыта, гол	c	в 4 й £ m «	|=:	С
s a w	1	580	8	0	8	0	3,13
	2	730	8	1	7	12,5	3,85
	3	880	8	2	6	25	4,33
	4	1030	8	6	2	75	5,67
	5	1180	8	7	1	87,5	6,15
	6	1330	8	8	0	100	6,87
о К ° a св В о X kO i=:	1	710	8	0	8	0	3,13
	2	860	8	1	7	12,5	3,85
	3	1010	8	3	5	37,5	4,68
	4	1160	8	5	3	62,5	5,32
	5	1310	8	7	1	87,5	6,15
	6	1460	8	10	0	100	6,87

С учетом результатов опытов по определению максимально-переносимых доз были спланированы и реализованы эксперименты по исследованию параметров острой токсичности препарата «Полиоксидол» (табл. 1). При расчете дозировки для белых мышей исходили из того, что в первой группе вводилась максимально-переносимая доза для данного вида животных, которая увеличивалась с постоянным шагом, составлявшим 150 мг/кг по действующему веществу. Таким образом, во второй группе ввели дозу из расчета 730 мг/кг, в третьей – 880 мг/кг, в четвертой – 1030 мг/кг, в пятой – 1180 мг/кг и в шестой – 1330 мг/кг соответственно.

После четырнадцатидневного наблюдения за подопытными белыми мышами установлено, что в первой группе все животные выжили, во второй – наступила гибель одной белой мыши, в третьей – погибли две особи, в четвертой – пало шесть животных, в пятой – выжила только одна мышь, а в шестой – соответственно зафиксирована стопроцентная летальность (LD100).

В аналогичном опыте на белых лабораторных крысах увеличение дозы препарата производили с таким же шагом, как и у белых мышей, составлявшим 150 мг/кг. В итоге во второй группе лабораторные крысы получили препарат из расчета 860 мг/кг, в третьей – 1010 мг/кг, в четвертой – 1160 мг/кг, в пятой – 1310 мг/кг и в шестой – 1460 мг/кг. После четырнадцати суток наблюдения в первой группе летальных исходов не отмечено, во второй группе погибло одно лабораторное животное, в третьей группе летальный исход зарегистрирован у трех крыс, в четвертой группе погибли 5 животных, в пятой – семь, а в шестой группе пали все животные.

Полученные результаты позволили математически вычислить LD50 с использованием расчетных параметров, указанных в используемой методике.

В результате проведенных расчетов установили, что среднесмертельная доза для белых мышей равна 955 мг/кг по действую- щему веществу, а для лабораторных крыс аналогичная доза составляет 1085 мг/кг.

После этого графическим способом провели расчет LD 16 иLD 84 (рис. 1, 2), при этом исходили из того, что на построенном расчетном пробитном графике первой из них будет соответствовать пробит 4, а второй – пробит 6.

Пробиты          3,13 3,85 4 4,33 5,67 6 6,15 6,87

Рисунок 1 - Острая токсичность полиоксидола для белых лабораторных мышей

Рисунок 2 - Острая токсичность полиоксидола для белых лабораторных крыс

Располагая данными о значении всех летальных доз представилась возможность вычислить показатель ошибки средней величины дозы, который рассчитывали по формуле:

SLD 50 =

LD 84 - LD 16

^{2 n}      , где

LD16 и LD84 – дозы эффекта, мг/кг;

n – суммарное количество животных в группах для которых значения пробитов находятся в пределах 3,5 – 6,5.

В результате проведенных исследований установлены параметры острой токсичности полиоксидола (табл. 2).

Таблица 2 - Острая токсичность препарата «Полиоксидол» при однократном внутрижелудочном введении

Вид животных	Параметры токсичности, мг/кг					SLD 50
	МПД	LD 16	LD 50	LD 84	LD 100
Белые мыши	580	755	955	1135	1330	±5,94
Белые крысы	710	885	1085	1280	1460	±6,17

Заключение. Исходя из результатов, полученных в проведенных экспериментах, препарат «Полиоксидол» можно отнести по ГОСТ 12.1.007-76 к 3-му классу опасности – вещества умеренно-опасные, поскольку среднесмертельная доза при однократном внутри-желудочном введении находится в интервале 151-5000 мг/кг.

Резюме

В статье представлены результаты изучения максимально-переносимых доз и определения параметров острой токсичности нового антиоксидантного препарата «Полиоксидол». Установлено, что он при однократном внутрижелудочном введении относится к третьему классу опасности в соответствии с действующей нормативно-технической документацией.