Отработка иммунизирующей дозы поливидовой вакцины против хламидиоза животных на крупном рогатом скоте

Несмотря на неоспоримые достижения в разработке ветеринарных профилактических препаратов проблема инфекционных болезней продуктивного поголовья скота (вирусной и бактериальной этиологии) является актуальной [1, 4]. Хламидийные инфекции вызывают ряд клинических проявлений инфекционного процесса у инфицированных животных, среди которых наиболее экономически затратными являются аборты и рождение слабого и нежизнеспособного потомства [5, 6].

Учитывая полученный опыт многолетнего изучения проблемы хламидиоза животных и практического применения различных мер борьбы с этим заболеванием установлено, что применение антибактериальных препаратов для лечения инфицированных животных в условиях производства малоэффективно, трудозатратно и экономически невыгодно. Наиболее перспективным направлением борьбы с хламидиозом животных является вакцинопрофилактика [6, 7], поэтому разработка и внедрение в ветеринарную практику новых эффективных средств специфической профилактики животных остается актуальной задачей.

Одним из важных этапов, при внедрении вакцины в производство является разработка схемы применения препарата, изучение его эффективности при разных способах введения, кратности и дозы прививки, обеспечивающей наилучшую защиту животных от развития инфекций. Изучение и отработка оптимальной дозы введения препарата позволяет добиться положительного эффекта от специфической профилактики нанося минимальный вред животному от введения антигена, при этом не допуская не обоснованного расхода, используемого для специфической профилактики дорогостоящего биопрепарата.

В течение последних нескольких лет в ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» были проведены исследования по разработке поливидовой вакцины против хламидиоза [3, 8, 9]. Были изучены антигенная активность экспериметальных серий вакцины на лабораторных животных, а также их токсичность, реакция гиперчувствительности замедленного типа и иммуногенность [2]. На следующем этапе исследований было целесообразно определить оптимальную иммунизирующую дозу поливидовой вакцины против хламидиоза животных на одном из видов целевых животных (крупный рогатый скот), что и явилось целью данного исследования.

Материал и методы исследований. Исследование проводили в одном из животноводческих хозяйств, благополучном по инфекционным заболеваниям животных, на разных возрастных группах крупного рогатого скота, а именно на 16 телятах в возрасте от 1 до 3 мес, живой массой от 50 до 60 кг и 16 коровах в возрасте от 1 до 2 лет, живой массой от 300 до 500 кг. Животные были клинически здоровы и серонегативны в РСК к специфическому хламидийному антигену.

Телята были разделены на 4 группы по 4 животных в каждой. Первую, вторую и третью группы животных иммунизировали поливидовой вакциной против хламидиоза животных в объемах 0,5 см3, 1,0 см3 и 2,0 см3 соответственно. Четвертую группу не вакцинировали (контроль). Вакцину вводили строго внутримышечно в область верхней трети шеи.

Коров аналогично поделили на 4 группы по 4 животных. Три группы вакцинировали в объемах 1,0 см3, 2,0 см3 и 3,0 см3. Животные четвертой группы являлись контролем.

На 30, 60, 90 и 180 сут проводили забор проб сывороток крови у животных всех групп, которые в дальнейшем исследовали в реакции связывания комплемента с целью определения наличия в них специфических хламидийных антител.

За оптимальную прививочную дозу вакцины принимали минимальный объем биопрепарата, вызывающий максимальный уровень выработки хламидийных антител в крови вакцинированных животных, введение которого не вызывало реактогенных реакций у иммунизированных животных.

Реакцию связывания комплемента ставили в соответствие с инструкцией утвержденной заместителем руководителя Россельхознадзора от 3 марта 2008 года для «Набора антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных (РОСС RU.ФВ01.Н00022).

Реакцию ставили в объеме 1,0 см3 в пробирках Флоринского. Антиген при постановке реакции применяли в рабочей дозе, сыворотки инактивировали 30 мин и титровали путем двукратных разведений, начиная с 1:5. Перед постановкой реакции проводили титрование комплемента в гемолитической системе, используя его удвоенную дозу, с целью контроля специфичности реакции. Гемолитическую систему готовили из 2,5%-ной смеси отмытых эритроцитов барана и стандартной гемолитической сыворотки в двойном титре. Реакцию проводили в водяной бане при 370С. За диагностический титр принимали разведение сыворотки 1:10, разведение 1:5 считали сомнительным результатом.

Статистическая обработка полученных данных проводилась на персональном компьютере с использованием пакета программного обеспечения Microsoft Excel 2010 .

Результат исследований.

Результаты исследования сывороток крови телят представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, в группе животных, иммунизированных в объеме 0,5 см3 на протяжение всего исследования титры антител, варьировались в пределах от 1:5 до 1:40. Максимальные титры хламидийных антител были выявлены на 30 сут после вакцинации в титрах от 1:20 до 1:40. Далее их концентрация снижалась. На 180 сут у двух животных были выявлены специфические антитела в титре 1:10 и у двух других телят в титре 1:5.

В группе животных, иммунизированных вакциной в объеме 1 см3, на 30 сут после прививки, хламидийные антитела выявлялись в титрах от 1:40 до 1:80. Далее на 60, 90 и 180 сутки их концентрация снижалась. На 180 сут исследования у трех животных из группы специфические антитела выявлялись в титрах 1:20 и у одного теленка в титре 1:10.

В третьей группе телят, привитых поливидовой вакциной в объеме 2 см3, максимальные титры антител также наблюдали на 30 сутки после вакцинации в титрах от 1:40 до 1:80. На 60 сут концентрация хламидийных антител в сыворотке крови вакцинированных животных варьировалась в пределах титров 1:80 у одного теленка и в титре 1:40 у трех оставшихся. Аналогичные показатели также были выявлены на 60 сут в группе животных, вакцинированных в объеме 1 см3. На 90 сут у трех животных хламидийные антитела находились в пределах титра 1:20 и у одного теленка в титре 1:40. На 180 сутки у всех животных концентрация комплементсвязывающих антител была равна титру 1:20.

Для наглядности на рисунке 1 представлена динамика накопления специфических хламидийных антител в сыворотках крови иммунизированных животных, выраженных в средних титрах по каждой группе.

Таблица 1 – Результаты серологических исследований сывороток крови телят, привитых

Рисунок 1 – Динамика выработки специфических антител у телят при различных дозах

разными дозами вакцины

Номер группы Доза вакцины Номер животного Титр антител в РСК До вакцинации 30 сутки 60 сутки 90 сутки 180 сутки 1 0,5 см3 1 – 1:20 1:20 1:20 1:10 2 – 1:20 1:20 1:10 1:5 3 – 1:20 1:10 1:10 1:5 4 – 1:40 1:20 1:20 1:10 Средний титр антител по группе – 1:25 1:17,5 1:15 1:7,5 2 1 см3 5 – 1:80 1:80 1:40 1:20 6 – 1:80 1:40 1:20 1:10 7 – 1:40 1:40 1:40 1:20 8 – 1:40 1:40 1:20 1:20 Средний титр антител по группе – 1:60 1:50 1:30 1:17,5 3 2 см3 9 – 1:80 1:40 1:20 1:20 10 – 1:40 1:40 1:20 1:20 11 – 1:80 1:80 1:40 1:20 12 – 1:80 1:40 1:20 1:20 Средний титр антител по группе – 1:70 1:50 1:25 1:20 4 Контроль 13 – – – – – 14 – – – – – 15 – – – – – 16 – – – – – Средний титр антител по группе – – – – – введения поливидовой вакцины. Примечание: Ось X – срок после иммунизации; Y – обратная величина титров специфических хламидийных антител

Исходя из экспериментальных данных, представленных на рисунке 1, установлено, что во всех опытных группах максимальные титры антител были выявлены на 30 сутки. Наивысшие средние титры были зафиксированы в группах животных, вакцинированных в объемах 1 см3 (титр 1:60) и 2 см3 (титр 1:70). Далее на протяжении последующих пяти месяцев концентрация комплементсвязывающих хламидийных антител в сыворотках крови телят второй и третьей групп снижались.

Значительной разницы антигенной активности, связанной с объемом введенного препарата, на протяжение этого срока у животных этих групп выявлено не было. Исходя из этого оптимальной прививочной дозой вакцины для телят является объем биопрепарата равный 1 см3.

Результаты исследования сывороток крови коров представлены в таблице 2.

Таблица 2 – Результаты серологических исследований сывороток крови коров, привитых разными дозами вакцины

Номер группы	Доза вакцины	Номер животного	Титр антител в РСК
			До вакцинации	30 сутки	60 сутки	90 сутки	180 сутки
1	1 см3	1	–	1:20	1:20	1:20	1:10
		2	–	1:20	1:20	1:10	1:5
		3	–	1:40	1:20	1:20	1:20
		4	–	1:20	1:20	1:20	1:5
Средний титр антител по группе			–	1:30	1:20	1:12,5	1:6,25
2	2 см3	5	–	1:40	1:80	1:40	1:40
		6	–	1:80	1:40	1:20	1:20
		7	–	1:40	1:40	1:20	1:10
		8	–	1:40	1:40	1:20	1:10
Средний титр антител по группе			–	1:50	1:40	1:30	1:20
3	3 см3	9	–	1:40	1:40	1:20	1:20
		10	–	1:80	1:40	1:40	1:20
		11	–	1:80	1:40	1:40	1:20
		12	–	1:40	1:20	1:20	1:10
Средний титр антител по группе			–	1:60	1:35	1:30	1:17,5
4	Контроль	13	–	–	–	–	–
		14	–	–	–	–	–
		15	–	–	–	–	–
		16	–	–	–	–	–
Средний титр антител по группе			–	–	–	–	–

Как видно из таблицы 2, наименьшие титры специфических антител в сыворотках крови коров, вакцинированных поливидовой вакциной против хламидиоза животных, на протяжение всего исследования, были выявлены в группе животных, иммунизированных в объеме 1 см3.

В группе животных, вакцинированных в объеме 2 см3, на 30 сутки, концентрация хламидийных антител находились в пределах титров от 1:40 до

1:80. Далее их концентрация снижалась и на 180 сутки была равна титрам от 1:10 до 1:40.

В третьей группе животных, вакцинированных в объеме 3 см3, на 30 сутки наблюдали максимальные титры антител, которые варьировались в пределах от 1:40 до 1:80. На 180 сутки хламидийные антитела в крови вакцинированных коров выявлялись в титрах от 1:10 до 1:20.

На рисунке 2 представлена динамика накопления комплементсвязывающих антител в сыворотках крови животных трех групп, иммунизированных разными дозами вакцины, выраженных в средних титрах по группе.

До вакцинации          ЗОсут              бОсут              9Осут             180 сут

^^—1смЗ        ^^—2 см3        ^^ЗсмЗ

Рисунок 2 – Динамика выработки специфических антител у коров при различных дозах введения поливидовой вакцины. Примечание: ось X – срок после иммунизации; Y – обратная величина титров специфических хламидийных антител

Как видно из рисунка 2, на протяжение всего исследования самые низкие показатели антигенной активности вакцины были выявлены в первой группе животных, иммунизированных в объеме 1 см3.

Во второй и третьей группах максимальные титры антител были выявлены на 30 сутки после вакцинации и равнялись титрам 1:50 и 1:60 соответственно. Далее их концентрация снижалась. Несмотря на то, что в третьей группе животных на 30 сутки уровень специфических хламидийных антител был несколько выше, чем во второй, на протяжении последующих пяти месяцев исследования концентрация хламидийных иммуноглобулинов в группе коров, иммунизированных в объеме 2 см3 была выше или равна средним титрам у животных третьей группы. Исходя из этого проводить иммунизацию животных в объеме 3 см3 нецелесообразно, и оптимальная иммунизирующая доза поливидовой вакцины против хламидиоза животных для коров определена в объеме 2 см3.

Заключение. Таким образом, опытным путем было установлено, что оптимальная иммунизирующая доза экспериментальных серий поливидовой вакцины против хламидиоза для телят и коров при внутримышечном однократном введении составила 1,0 см3 и 2,0 см3 соответственно. Эти дозы стимулировали выработку специфических противохламидийных антител в высоких титрах и не вызывали осложнений у животных после введения.