Параметры токсичности препарата «Ферсел»

В условиях промышленной технологии ведения свиноводства широкое распространение имеют заболевания незаразной этиологии. Они занимают свыше 95% всех заболеваний (В.Т. Самохин, 1981; А.Г. Шахов, 2003). Среди них наиболее часто встречаются болезни обмена веществ, связанные с недостатком или неправильным соотношением макро- и микроэлементов, витаминов, других биологически активных веществ. Они протекают медленно, без выраженных клинических признаков и наносят значительный экономический ущерб. Своевременные меры профилактики и лечения болезней минеральной и витаминной недостаточности позволяют значительно снизить падеж и заболеваемость животных. Радикальным путем решения этой проблемы следует считать изыскание эффективных и безопасных лечебно-профилактических средств.

В качестве функциональных стимуляторов в последние годы активно исследуются дикарбоновые кислоты и их производные (Бажов Г.М., Бахирева Л.А., 1996; Папуниди Э.К., Иванов А.В., Шагеев М.И., 1995), а их применение имеет большую практическую значимость как для млекопитающих (Кондрашова М.Н., 1976), так и для птиц. Органические кислоты обладают антистрессовым действием, препятствуют микробной колонизации в желудочно-кишечном тракте, оказывают благоприятное влияние на перевариваемость и усваиваемость питательных веществ (Малюк В.И., 1976).Одной из таких органических кислот является янтарная кислота. Она участвует в ряде биохимических реакций энергетического, структурного и ферментного обеспечения организма. Янтарная кислота стимулирует рост животных, повышает резистентности их организма, нормализует гемопоэз.

В связи с этим сотрудниками ФГОУ ВПО КГАВМ имени Н.Э. Баумана с нашим участием был синтезирован новый препарат «Ферсел» на основе янтарной кислоты в состав которого входит железо и селен для профилактики, как железодефицитной анемии, так и беломышечной болезни, дистрофии печени, миопатии и других заболеваний, связанных с нарушением обмена веществ.

Чтобы применять «Ферсел» по назначению необходимо изучить его фармакотоксикологические свойства на лабораторных животных.

Исследование токсичности профессиональных ядов принято начинать с острого опыта, в результате проведения которого предусматривается получение данных о смертельных дозах и концентрациях. В диапазоне смертельных доз и концентраций основным показателем токсичности вещества является наиболее статистически достоверная величина, вызывающая гибель 50% подопытных животных (Д 50 , С 50 ) (И.В. Саноцкий, 1970).

Цель исследования: определение острой и хронической токсичности препарата «Ферсел», а также его кумулятивных свойств.

Материалы и методы. Острую токсичность препарата «Ферсел» изучали на 30 белых мышах обоего пола с живой массой 18-20г, при внутрижелудочном применении по методу Кербера. Каждая группа подбиралась по принципу аналогов. Препарат вводили мышам в желудок в виде 10%-ной суспензии на рафинированном масле при помощи иглы с оливой на конце. Животные были разделены на 5 групп по 6 голов в каждой. Препарат применяли в дозах: 1 группа – 5000мг/кг; 2 группа – 5500 мг/кг; 3 группа – 6000 мг/кг; 4 группа – 6500 мг/кг; 5 группа – 7000 мг/кг. Контрольная группа состояла из 6 животных, которым вводили 10%-ную суспензию в дозе 0,5 мл на голову. Наблюдение за животными вели в течение 24 дней с момента введения препарата. Во время наблюдения учитывали сроки развития интоксикации, клиническую картину отравления, сроки и процент гибели животных, а у выживших мышей определяли быстроту восстановления функции организма. Всех погибших мышей подвергли вскрытию.

Опыты по определению хронической токсичности препарата «Ферсел» были проведены на 20 белых мышах обоего пола массой 18-22 г в течение 36 суток. Животные были подобраны и распределены по группам по принципу аналогов, содержались с идентичными условиями кормления и содержания. Количество животных в группах определяли целесообразностью объективной оценки полученных результатов и их статистической достоверности. Препарат вводили ежедневно внутрижелудочно в виде суспензии на растительном масле при помощи иглы с оливой на конце. В первые 4 дня каждой мыши вводили 1/10 от ранее установленной однократной дозы ЛД50. Затем каждые последующие 4 дня доза увеличивалась в 1,5 раза от предыдущих ежедневно вводимых доз.

За всеми животными вели клиническое наблюдение в течение всего срока назначения дачи препарата. Во время наблюдения учитывали сроки развития интоксикации, клиническую картину отравления, сроки и процент гибели животных, а у выживших мышей определяли быстроту восстановления функции организма. Всех погибших мышей подвергли вскрытию.

Результаты исследований. При изучении острой токсичности препарата установлено, что при оральном введении препарат «Ферсел» легко всасывается и быстро проявляет свое действие на животных. В результате исследований установлено, что доза 5000мг/кг препарата «Ферсел» не вызывала гибели подопытных животных. Через 20-30 минут после введения препарата в вышеуказанной дозе отмечали незначительное угнетение общего состояния животных. Спустя 60 минут отмеченные признаки исчезали, а через 2-3 часа животные внешне не отличались от интактных.

При введении препарата в дозах 5500мг/кг через 20-40 минут отмечали повышенную рефлекторную возбудимость, судорожные движения конечностями; гибель части животных наступала через 4-7 часов после применения препарата. Остальные мыши приходили в нормальное состояние спустя 4-10 часов. Введение препарата в дозах 6000-6500мг/кг вызывало гибель соответственно 3 и 5 животных. Гибель мышей наступала от остановки дыхания в период судорог. Оставшиеся в живых мыши проявляли признаки беспокойства, бегали по клетке, вставали на задние конечности (в результате передачи возбуждения на нижележащие области центральной нервной системы, в частности спинной мозг). Через 1-2 часа признаки возбуждения сменялись угнетением, а спустя 8-16 часов состояние животных начинало приближаться к норме. На 2-е сутки опытные животные внешне не отличались от контрольных.

Введение препарата «Ферсел» в дозе 7000 мг/кг вызывало гибель всех опытных мышей через 20-40 минут после применения.

1. Данные по токсичности препарата «Ферсел»

Доза препарата мг/кг	5000		5500		6000		6500		7000
Всего животных (голов)	6		6		6		6		6
Выжило	6		5		3		1		0
Пало	0		1		3		5		6
Z		0.5		2		4		5.5
d		500		500		500		500
Z ∗ d		250		1000		2000		2750

∑=250+1000+2000+2750=6000

При вскрытии погибших животных наблюдали выраженную гиперемию легких, полнокровие печени, селезенки и почек, асфиксическое сердце.

На основании выживаемости животных в опытных группах после введения препарата «Ферсел» была рассчитана среднесмертельная доза (ЛД 50 ) по формуле Кербера, а среднеарифметическую ошибку рассчитывали по формуле Геддема с соавт.

∑ ( z ∗ d )

ЛД50=ЛД100 - , где: ЛД100 – доза, вызвавшая гибель всех n подопытных животных, Z – половина суммы числа животных, погибших от 2х последующих доз, d – разница числового значения двух доз, стоящих рядом, ∑ - знак суммирования, n – число животных в каждой группе.

ЛД =7000- ⁶⁰⁰⁰ =6000мг/кг 6

ЛД 16 и ЛД 84 вычисляли графическим методом Миллера и Тейнтнера с использованием программы Excel. Кривая токсичности препарата «Ферсел» приведена на рисунке. ЛД 16 (по графику) составляет 5500 мг/кг, а ЛД 84 равна 6600 мг/кг, стандартное отклонение рассчитывали по формуле Геддема:

_                                                _ ЁД

SЛД 50 = ^ksd , где k = 0,564, d = 500; S = ^ËÄ

n

-

ËÄ 16

;

S=

6600 - 5500

= 550

Кривая токсичности

_ V 0,564 ∗ 550 ∗ 500

SЛД 50 =              =65, 6

мг/кг

ЛД 50 =6000 ± 65,6мг/кг

При изучении хронической токсичности препарата «Ферсел» установлено, что при оральном введении препарат «Ферсел» легко всасывается и быстро проявляет свое действие на животных. В процессе опыта регистрировали явления токсикоза и гибель животных.

Первые клинические признаки отравления препаратом «Ферсел» в виде угнетения наблюдались на 5-8-й день непосредственно после введения препарата в дозе 900 мг/кг. После 8-го применения препарата « Ферсел» погибла одна мышь, которая получила суммарно 3600 мг/кг. У остальных животных спустя 1-1,5 часа отмеченные признаки исчезали, а через 2-5 часов животные внешне не отличались от интактных.

На 9-12-й день введения препарата в дозе 1350 мг/кг у животных отмечали угнетение, взъерошенность шерсти, отказ от корма. После 12-го применения препарата погибли три белых мыши, которые получали суммарно 5400 мг/кг. У остальных признаки угнетения проходили через 810 часов после введения препарата. Начиная с 13-го дня и до конца опыта (36 сут.), у мышей отмечали повышенную рефлекторную возбудимость, судорожные движения конечностями, гибель части мышей наступала через 1-12 часов после введения препарата. После 16-го применения препарата «Ферсел» погибло пять белых мышей, которые получали суммарно 8100 мг/кг , что в 1,35 раза превышает ЛД₅₀ при однократном введении. Остальные мыши приходили в норму через 5-18 часов, при этом отмечали снижение массы животных. На 20-й день пало 8 мышей, на 24-й день – 12, на 28-й – 15 и на 32-й – 18. Дозы, вызывавшие гибель мышей, превышали ЛД 50 препарата « Ферсел» при однократном применении более, чем в 2,03-6,83 раза. На 36-й день от начала опыта пала последняя мышь от дозы ЛД 50 , превышающей в 10,25 раза.

Все животные, погибшие в течение опыта, подверглись вскрытию для установления характера повреждающего действия препарата «Ферсел». При вскрытии погибших мышей наблюдали выраженную гиперемию легких, полнокровие печени, селезенки и почек, асфиксическое сердце.

Для определения коэффициента кумуляции использовали метод, основанный на учете гибели животных при повторном введении фармакологических средств, в частности тест субхронической токсичности (Лим с сотр., 1961).

2. Данные по хронической токсичности препарата «Ферсел»

Дозы препарата	Пало	Z	d	Z*d
600	0	0	0	0
900	1	0.5	300	150
1350	3	2.0	450	900
2025	5	4.0	675	2700
3037.5	8	6.5	1012.5	6581,25
4556.3	12	10	1518.8	15188
6834.4	15	13.5	2278.1	30754,35
10251.6	18	16.5	3417.2	56383,8
15377.3	20	19.0	5125.7	97388,3

∑= 210045, 7

Расчет хронической токсичности препарата «Ферсел»: 21004.75

ЛД 50 хроническая = 15377,3-        = 10502,29мг/кг

Коэффициент кумуляции рассчитывали по следующей формуле:

К кум = ЛД 50 хроническая : ЛД 50 острая ; К кум

1050,229

=1,75

Заключение. Таким образом, вычисленный коэффициент кумуляции препарата «Ферсел» составил 1,75. Согласно методике Limm с соавт. (1966) коэффициент кумуляции больше 1, то это говорит об отсутствии кумулятивных свойств исследуемого препарата. Учитывая полученные результаты, можно считать, что препарат «Ферсел» не обладает кумулятивными свойствами, а по классификации Ходже и Стернера относится к 4 классу опасности. Что позволяет использовать этот препарат в дальнейшем для изучения лечебно - профилактирующего действия при болезнях, связанных с нарушением обмена веществ.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Бажов, Г.М., Бахирева Л.А. Прогнозирование воспроизводительных качеств свиноматок // Актуал. пробл. пр-ва свинины. - Персиановка, 1996.-18с. 2. Кондрашова, М. Н. Выпускаемые лечебные препараты янтарной кислоты и их применение. //Терапевтическое действие янтарной кислоты. 3. Малюк, В.И. и др.

Клиническое изучение эффективности ЯНА при лечении пороков сердца // Терапевтическое изучение эффективности янтарной кислоты. Пущино, 1976.   с.86….102.   4. Папуниди, Э.К., Иванов А.В., Шагеев

М.И.Использование цеолитов для профилактики острых расстройств пищеварения у телят // Тез. докл. республ. научно-произв. конф. По актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. – Казань, 1995. – с.86. 5. Самохин, В.Т. Профилактика нарушений обмена микроэлементов у животных.- М.: Колос, 1981. 6. Саноцкий, И.В. Основные понятия токсикологии // Методы определения токсичности и опасности химических веществ /токсиметрия/ /под ред. Саноцкого. – М.: Медицина, 1970. 7. Шахов, А.Г. Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Ветеринарная патология, №2, 2003.

ПАРАМЕТРЫ ТОКСИЧНОСТИ ПРЕПАРАТА «ФЕРСЕЛ»

Ржанникова И.С.

Резюме

Проведено изучение острой и хронической токсичности препарата «Ферсел". Выявлено, что препарат «Ферсел» не обладает кумулятивными свойствами, а по классификации Ходже и Стернера относится к 4 классу опасности.

PARAMETRES OF TOXICITY OF A PREPARATION OF «FERSEL"

Rzhannikova I.S.