Перекисное окисление липидов во внутренних органах крыс при тревожно-депрессивных расстройствах

В настоящее время доказано, что повышенный уровень тревожности связан с чрезмерной активацией гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы (ГГАС). В свою очередь, это обусловлено нарушением регуляции последней по механизму «отрицательной обратной связи», проявляющимся в повышении гипоталамического порога чувствительности к ингибирующему действию глюкокортикоидных гормонов. Поэтому при стрессорных ситуациях, обуславливающих тревожно-депрессивные расстройства, наблюдается повышенный уровень стрессорных гормонов. Однако «тяжесть» стресса определяется не только содержанием катехоламинов и глюкокортикоидов, но и уровнем чувствительности к ним органов-мишеней. Это, в свою очередь, может отразиться и на процессах свободнорадикального окисления в клетках органов-мишеней.

Цель исследования: изучить влияние стрессорных воздействий с пассивно-тревожным характером поведенческой активности на чувствительность к глюкокортикоидам и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными системами в крови и во внутренних органах.

Исследования проведены на 100 половозрелых беспородных крысах обоего пола массой 190220 г. Все животные были распределены на 4 экспериментальные группы. Крыс двух изученных групп подвергали четырёхкратному иммобилиза-ционному стрессу по методу В.Э. Цейликмана и соавт. (1991). Длительность однократной иммобилизации составляла 60 минут, стрессовые воздействия повторяли с интервалом в 72 часа. Описанное является способом моделирования анксиоген-ного стресса, т. е. данный временной интервал между отдельными стрессорными эпизодами затрудняет развитие габитуации и содержит определённый элемент внезапности. Поэтому данный метод иммобилизационного стресса гомологичен «стрессу повседневной жизни» и сопровождается развитием поведенческих расстройств тревожнодепрессивного характера.

С целью моделирования стрессорной активации ГГАС подкожно вводили пролонгированный глюкокортикоидный препарат триамцинолона аце тонид («кеналог», Veb Berlin Chemie, Германия) в дозе 2 мг/кг. Животные другой группы получали эквиобъёмное количество 0,9 %-ного раствора NaCl. Еще две группы крыс получали аналогичные инъекции без предварительного стрессирования.

Через 96 ч с момента подкожного введения триамцинолона ацетонида или 0,9 %-ного раствора NaCl крыс забивали под эфирным наркозом. Чувствительность к ГКГ оценивали по степени кена-логиндуцированного снижения массы вилочковой железы [1].

Поведенческие реакции животных исследовались в актографе «открытое поле». Содержание продуктов перекисного окисления липидов оценивали спектрофотометрически в липидном экстракте исследуемых тканей (И.А. Волчегорский и соавт., 2000). Кроме того, в гомогенатах тканей органов определяли каталазную активность по методу М.А. Королюк и соавт. (1988) и активность супер-оксиддисмутазы по методу С. Чевари и соавт. (1985).

Исследованный режим стрессирования вызывал уменьшение локомоции и исследовательской активности крыс в актографе «открытое поле», кроме того, снижение частоты груминга. Подобные сдвиги рассматриваются как результат подавления мотивации изучения незнакомого пространства, а также выполнения гигиенического стереотипа (груминг). Отмеченные мотивационные нарушения сопровождались нарастанием частоты дефекаций, что считается вегетативным эквивалентом тревоги у крыс (см. рисунок). Полученные результаты соответствуют ранее опубликованным данным и согласуются с критериями тревожно-депрессивных расстройств поведения [2-5].

О наличии активации гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы свидетельствует факт увеличения содержания кортикостерона через 24 часа после завершения повторных стрессорных эпизодов (с 21,61 ± 4,30 нмоль/л в контроле (п = 8) до 25,61 ± 5,31, в опытной (и = 8) группе, Р = 0,015 WW). Это может быть обусловлено гипоталамической гиперпродукцией кортиколиберина, который рассматривается как медиатор стрессогенной тре-

Проблемы здравоохранения

Влияние повторных четырехкратных иммобилизаций на поведенческую активность крыс в актографе «открытое поле»: стрессогенные сдвиги локомоции (1), исследовательской активности (2); стрессогенные сдвиги груминга (4) и анксиогенной дефекации (5); * - р < 0,05 в сравнении с контролем

вожности, вызывающий состояние «сверхбодрствования» и центральную активацию симпатико-адреналовой системы. Повышенное в течение длительного времени содержание глюкокортикоидов может повлечь за собой десенситизацию к ним со стороны органов-мишеней. Это предположение подтвердилось в экспериментах, в которых исследовалось действие глюкокортикоидного препарата триамцинолона ацетонида на фоне предварительного анксиогенного стресса.

У животных, получавших ТА без предшествующего иммобилизационного стресса, наблюдалась атрофия вилочковой железы. Это проявлялось в снижении массы органа при одновременном уменьшении значения тимического индекса и количества тимоцитов.

Предварительные иммобилизации отменяли эффекты глюкокортидного препарата по отношению к вилочковой железе. Введение экзогенного глюкокортикоида на фоне стресса приводило к увеличению общего количества тимоцитов и массы тимуса в сравнении с соответствующими показателями группы «триамцинолона ацетонид».

Таким образом, при редко чередующихся иммобилизациях развитие пассивно-тревожного характера поведенческой активности ассоциируется с активацией гипоталамо-гипофизарно-адренало-вой системы и сниженной чувствительностью к глюкокортикоидам.

Наши исследования показали, что десенсити-зация органов-мишений к глюкокортикоидным гормонам при редкочередующихся иммобилизациях сопровождается модифицикацией органотропных эффектов глюкокортикоидного препарата.

Так, в группе «стресс» наблюдалось достоверное увеличение содержания всех категорий молекулярных продуктов ПОЛ в костном мозге и селезенке, в тимусе выявлено статистически значимое увеличение содержания всех категорий молекулярных продуктов ПОЛ в изопропанольной фазе, увеличение первичных продуктов с одновременным снижением вторичных продуктов - в гептановой.

Далее показано, что стрессорные воздействия отразились на глюкокортикоид-зависимой модификации изменений ПОЛ в печени и почках. В обоих случаях четырехкратный иммобилизаци-онный стресс вызывает активацию ПОЛ, выраженность которой уменьшается под действием триамциналона ацетонида и сопряжена со снижением МАО-активности в этих органах.

Одновременно с этим в тимусе отмечено относительное снижение (по сравнению с группой «стресс») всех категорий молекулярных продуктов ПОЛ в изопропанольной фазе и диеновых конъюгатов в гептановой. В костном мозге и селезенке одновременно со снижением уровня нейтрофилов в группе «стресс+ТА» относительно группы «стресс» отмечено статистически значимое снижение всех

Влияние иммобилизационного стресса и триамцинолона ацетонида на некоторые характеристики тимуса

Показатель	Контроль (п=12)	Стресс (п = 12)	ТА (п=12)	Стресс +ТА (п=12)
Масса тимуса (мг)	240,3 ± 19,0	241,5 ±26,4	123,8 ± 13,9*	201,6 ±24,4**
ЯСК(х106) масса тимуса (мг)	2,75±0,29	3,22±0,28	2,07±0,3	4,53±0,51**
Количество тимоцитов (х106)	692,9± 105,9	767,5±105	263,2±58*	898,7±163**

Примечание. * - статистически значимые различия от показателей контрольной группы. ** - между группами «ТА» и «стресс + ТА». Статистическая обработка проведена с использованием критериев Манна-Уитни, Вальда-Вольфовица, Колмогорова-Смирнова и точного критерия Фишера; различия считали достоверными при р < 0,05.

Цейликман В.Э., Козочкин Д.А., Синицкий А.И.

категорий молекулярных продуктов липоперок-сидации (см. таблицу).

Таким образом, введение триамцинолона ацетонида после завершения редко чередующихся иммобилизаций предотвращает постстрессорную активацию липопероксидации в паренхиматозных и в иммунных органах.

Исследование проведено в рамках реализации ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009—2013 гг.