Персистирующие герпесвирусные инфекции у больных хроническим гломерулонефритом

Гломерулонефрит (ГН) является одной из наиболее частых причин развития почечной недостаточности. Важным патогенетическим механизмом развития ГН является отложение в клубочках почек иммунных комплексов, включающих IgG и различные, в том числе вирусные, антигены. Большинство исследований посвящены изучению роли вируса гепатита В [1-3]; приводятся данные и о роли инфекций, обусловленных вирусами простого герпеса 1го и 2-го типов (ВПГ-1 и ВПГ-2), цитомегаловирусной (ЦМВ) инфекции [4-6], особенно у больных с аллотрансплантатами почек [7, 8]. Системное поражение органов при хронических заболеваниях, вызываемых указанными выше герпес-вирусами, сопровождаемое вирусемией в период обострения инфекций, обусловило необходимость проведения специальных исследований по изучению частоты их выявляемости у больных хроническими формами ГН.

Материалы и методы

Исследовали материал от 75 больных ГН, находившихся на лечении в отделении нефро- логии Московского НИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РФ. Диагноз ГН (клинический и морфологический) ставили в соответствие с классификацией Г.Н. Сперанского и соавт., с дополнением М.С. Игнатовой и Ю.Е. Велти-щева (1993). Контрольную группу составили 30 детей без почечной патологии в возрасте от 3 до 15 лет. В группу сравнения вошли 24 ребенка того же возраста, из них 12 детей с пиелонефритом и 12 – с интерстициальным нефритом. Достоверных различий по полу и возрасту в обследуемых группах не отмечено.

Выявление ВПГ-1 и ВПГ-2, а также ЦМВ в биологических материалах от больных (кровь, слюна, моча) осуществляли путем заражения диплоидных клеток легких эмбриона человека и перевиваемой линии клеток почек обезьян Vero, полученных из лаборатории клеточных культур НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского. Диплоидные клетки легких эмбриона человека культивировали на среде Игла с 10% инактивированной прогреванием эмбриональной телячьей сывороткой в 96 луночных планшетах (Италия). Для определения вирусов в каждую лунку от больных вносили по 0,2 мл исследуемого материала, адсорбцию проводили в течение 1 часа при комнатной температуре, трижды отмывали раствором Хэнкса, и заливали инфицированные клетки средой Игла с 5% эмбриональной телячьей сывороткой. Учет проводили ежедневно в течение 4 суток – для ВПГ 1 и 2, и 14 дней – для выявления ЦМВ, до появления характерного для каждого вируса цитопатического эффекта. При отсутствии цитопатического эфекта на 6 сутки производили 2-й пассаж. Для дополнительного контроля пробы, содержащие по предварительным данным ВПГ-1 или ВПГ-2, пассировали на клетках линии Vero для исключения ЦМВ инфекции (ЦМВ инфекция не вызывает на используемой линии клеток Vero цитопатический эффект). Окончательное типирование изолятов осуществляли в реакции нейтрализации на культуре диплоидных клеток с использованием иммунных сывороток, как указано ранее [9].

Определение антигенов ВПГ-1 и ВПГ-2, а также цитомегаловируса в материалах от больных осуществляли и иммуноферментным методом. Для определения антигенов указанных выше вирусов использовался «сэндвич» – вариант иммуноферментного анализа, и иммуно-ферментные моноклональные тест-системы, разработанные в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН [10]. Учет результатов проводили спектрофотометрически по величине оптической плотности в лунках планшет («Медполимер» ) при длине волны 492 нм. Оп-редение IgG и IgМ антител к ВПГ-1 и ВПГ-2, а также к ЦМВ осуществляли иммунофермент-ным методом с использованием тест-систем, разработанных в нашем институте [9]. Учет результатов выполняли спектрофотометрически на спектрофотометре «Мультискан» при длине волны 492 нм. Исследуемые сыворотки оценивались как положительные при оптической плотности, превышающей 0,2.

Статистическая обработка результатов проводилась по общепринятым методам с использованием пакета МS Ехеll 4,0. Рассчитывали достоверность по критериям Стьюдента. Различия считались существенными при р< 0,05.

Результаты и обсуждение

При обследовании 75 больных с хроническими формами гломерулонефрита (ГН) у 95% биологическим или ИФА методами выявлялись герпесвирусные инфекции: либо ВПГ-1 или ВПГ-2 инфекции, либо ЦМВ инфекция, либо оба вируса выявлялись одновременно. Необходимо отметить, что процент совпадения результатов выявления антигенов вирусов в ИФА и обнаружения вирусов в культуре клеток составляет для ВПГ при исследовании крови – 92%, мочи – 90%, слюны – 83%. Для ЦМВ эти данные соответственно составляют 93, 90 и 78%. Клиническими проявлениями вирусемии, помимо основного заболевания, являются обнаружение у 14 из 75 обследованных детей герпетического стоматита или hег-реs lаbiаlis . При этом у всех 14 больных ВПГ в крови был выявлен при вирусологическом обследовании, а иммуноферментным методом вирус был обнаружен у 10 больных.

В группе детей без почечной патологии уровень инфицирования герпесвирусами был достоверно и значительно ниже, чем у детей с ГН (рис.). Вирусы в биологических жидкостях (кровь, моча, слюна) обнаружены только у 12% здоровых детей, при этом ВПГ-1 и ЦМВ идентифицированы, соответственно, у 9% и 3% детей (р< 0,05). ВПГ-2 не обнаружен ни у одного ребенка. Одновременное выявление ВПГ-1 и ЦМВ в биожидкостях детей контрольной группы не отмечено. В анамнезе у ряда детей без почечной патологии имели место герпетичесие

Гломерулонефрит

12%

| сочетанная инфекция

Контрольная группа

9%

| Вирусы не обнаружены

ВПГ

Рис. Частота выявления вирусов в биологических жидкостях у больных хроническим гломерулонефритом и у детей без почечной патологии.

заболевания кожи и слизистых. При хроническом ГН ВПГ-1 был выявлен у 34,4% , ЦМВ – у 12% детей, сочетанная инфекция ( ВПГ-1 и ЦМВ) у 46% больных. ВПГ-2 определялся редко и только в крови у 2-х человек (2,6%). Чаще всего ВПГ-1 и ЦМВ у больных ГН обнаруживались в крови (35% и 5% , реже – в моче ( 12% и 3%) и слюне (5% и 1% соответственно). У больных пиелонефритом реже выявлялась герпесвирусная инфекции (83%). У большинства пациентов с заболеваниями почек (94%), независимо от характера заболевания, определялся высокий уровень противовирусных антител класса IgG, что свидетельствует о хронической герпесвирусной инфекции. Особенно часто наблюдался повышенный уровень антител IgG класса к ВПГ-1 (88%). Этот показатель в контрольной группе (дети без почечной патологии) не превышал 60%. Повышенный уровень антител класса IgG к ЦМВ определялся достоверно чаще у больных ГН, чем у больных интерстициальным нефритом (85% и 50% соответственно). Установлена взаимосвязь между выявлением ВПГ-1 или ЦМВ из материалов от больных и определением повышенного уровня соответствующих противовирусных антител класса IgМ. Антитела класса IgМ к ВПГ-1 или ЦМВ определялись только у тех больных ГН детей, у которых был выделен соответствую- щий вирус. В случае, если вирусы не были выделены от больных ГН, антитела класса IgМ определялись очень редко.

Суммируя полученные результаты, следует отметить, что ВПГ-1 и ЦМВ выявлялись в материалах от больных ГН достоверно чаще, чем у детей без почечной патологии, а также от больных пиелонефритом. Проведенный анализ данных позволил установить, что высокая частота обнаружения этих герпесвирусов у больных ГН не связана ни с продолжительностью течения ГН, ни с возрастом больных этой почечной патологией детей, ни с их полом. Выделение вирусов сопровождается выявлением у больных ГН специфических IgМ антител, а также выявлением повышенного уровня про-тивогерпетических антител IgG класса, что свидетельствует о хроническом инфицировании. Системный характер поражения организма при герпесвирусных инфекциях отмечен нами ранее [11], а выявление вирусемии совпадало с началом клинического обострения [12]. Поэтому можно предположить, что у больных ГН детей, в связи с известным по данным литературы иммунодефицитным состоянием, обнаружена высокая инфицированность ВПГ и ЦМВ, или указанные вирусы имеют определенное патогенетическое значение в развитии и прогрессировании ГН.