Перспективы реализации индивидуализированных подходов в выборе противоопухолевой терапии на основе изучения химиочувствительности бластных клеток

Введение: Концепция пациент-специфич-ного подхода к терапии не является новым подходом в современной медицине. В рутинной практике этими принципами руководствуются прежде всего при выборе антибактериальных, противовирусных, антимикотических препаратов. Тогда как попытки индивидуализированного выбора противоопухолевой терапии,основанные на определении химиочувствительности злокачественных клеток пока рассматриваются только в качестве перспективного метода. Сложности в практическом применении наработок клеточной онкологии основаны на трудностях в получении достаточного количества однородных опухолевых клеток из солидных новообразований,гете-рогенностью опухолей как в рамках одной нозологической формы у различных пациентов так и в пределах одного новообразования,не-возможностью получения дополнительного биопсийного материала в терапевтических целях. С этих позиций наиболее перспективным направлением в плане скорейшего внедрения в практическую медицину является онкогематология. При таких заболеваниях как миелодиспластический синдром (МДС) или острые миелоидные лейкозы (ОМЛ), когда достаточное для экспериментального изучения количество однородных опухолевых (бластных) клеток может быть получено из костномозговых пунктатов или даже периферической крови, экспериментальные исследования химиочувствительности in vitro могут способствовать обоснованному индивидуальному выбору и улучшению исходов терапии.

Цель . Оценить возможность обоснования выбора терапии на основе изучения генотоксичности лекарственных препаратов при резистентном ОМЛ.

Материалы и методы. Бластные клетки периферической крови пациента с полирези-стентным ОМЛ отсортировывали на сортере MoFlo Astrios EQ (Beckman Coulter) в 2 пробирки со сложной средой для культивирования, в одну из которых сразу добавляли противоопухолевый препарат (опробован только децитабин). После культивирования (24 часа) сравнивали количество жизнеспособных клеток в пробе и контроле (по маркировке свободной ДНК). В другом эксперименте полученные от больного бластные клетки культивировали с ППС (24 часа), а после выделения в пробы и контроль добавляли различные водорастворимые противоопухолевые препараты (в моно-варианте и в различных сочетаниях), оценивали генотоксичность с применением микроядерного теста (МЯТ).

Результаты. В ограниченных по перечню исследуемых лекарственных препаратов экс-периментах,была показана высокая генотоксичность децитабина (по оценке количества жизнеспособных отсортированных клеток) а также даунорубицина и, особенно, даунору-бицина в сочетании с интерфероном-альфа (по оценке в МЯТ).

К сожалению, в описанном случае ОМЛ, результаты оценки химиочувствительности не были использованы в выборе терапии пациенту в связи с развитием тяжелых инфекционных осложнений и наступлением летального исхода. Однако полученный опыт в ближайшее время планируется использовать при планировании терапии в перспективной локальной практике,а с накоплением и обобщением данных и, возможно, рекомендовать к распространению. С позиций оценки точности метода, наибольшей прецизионностью обладают методики исследования однородных —

«чистых» клеточных суспензий, полученных при проточно-цитометрической сортировке бластных клеток с аберрантным фенотипом. Однако низкая доступность оборудования для сортировки,а также выявленное на практике снижение жизнеспособности отсортированных клеток, значительно ограничивают возможности их дальнейшей культивации и изучения без применения сложных многоцитокиновых сред и создания особых физических условий. При этом метод сортировки может быть использован для оценки качества культуральных методов выделения бластных клеток. Оказалось, что культуральный метод выделения обладает достаточной специфич-ностью,а выделенные бластные клетки ОМЛ остаются достаточно жизнеспособными и для определения генотоксичности лекарственных препаратов,и для создания экспериментальных клеточных линий.

Выводы. Адаптированные к локальным возможностям и апробированные нами методы определения генотоксичности как с применением микроядерного теста,так и подсчета «живых» клеток при проточно-цитометрическом анализе,обладают сопоставимой специфичностью и чувствительностью и могут рассматриваться в качестве перспективных методов определения химиочувствительности бластных клеток при миелоидных лейкозах.