Поиск средств для использования в качестве адъювантов

Адъюванты для вакцин известны давно, но потребность в их использовании стимулируется уменьшением иммуногенных свойств современных антигенов [1]. Адъюванты могут быть классифицированы по отдельным семействам в соответствии с их химической природой и процессом создания вакцины. Всем семействам присущи как преимущества, так и недостатки в процессе соединения с антигенами при разработке рецептуры вакцины. Создание эффективных средств вакцинопрофилактики инфекционных заболеваний обусловило заметное возрастание интереса к адъювантам.

В настоящее время основными адъювантами, используемыми в технологии изготовления вакцин, являются эмульсии и соли алюминия. Также проводятся исследования тысяч различных веществ, которые, возможно, будут применяться в качестве адъювантов [2,3].

Материалы и методы. Целью доклинических токсикологических исследований фармакологических веществ является установление характера и выраженности их повреждающего действия на организм экспериментальных животных и оценка их безопасности.

Острую и хроническую токсичность препаратов определяли на беспородных крысах массой 153-167 г., содержащихся в стандартных условиях вивария. Каждая экспериментальная группа состояла из 9 крыс. Эмбриотоксичность и тератогенность исследовали на 75 беспородных крысах. Субстанции фармакологических средств вводили внутримышечно в дозах «Гемив»-120, «Герас»-423, «Грамо»-98, «Синтес»-420 мг/кг массы тела с 1 по 17 день беременности. Крысы контрольной группы получали эквиобъёмное количество растворителя. О степени токсичности фармакологических средств судили по общему состоянию животных, динамике массы тела, морфологическим, биохимическим показателям крови, функциональному состоянию печени, по пред- и постимплантационной смертности, массе и длине плодов, аномалии развития внутренних органов, состоянию костной системы. Влияние фармакологических средств в максимальных дозах на репродуктивную функцию оценивали на 30 самцах (вводили до скрещивания с интактными самками) и 45 самках. Исследуемые показатели регистрировали до введения субстанций (фон) и через 10, 20, 30 суток эксперимента. А затем после введения фармакологических средств, животных убивали в 2 срока: сразу после окончания введения и через 2 недели после его отмены; органы подвергали патологоанатомическому исследованию.

Результаты исследований. Влияние полисахаридов на воспроизводительную функцию самок белых крыспредставлено в таблице.

1. Влияние исследуемых полисахаридов на воспроизводительную функцию самок белых крыс

Установлено, что фармакологические средства не оказывают неблагоприятного воздействия на экскреторную функцию печени, однако «Синтес» в дозе 420 мг/кг к концу срока введения повышает активность аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови, не влияя на активность аланинаминоторансферазы и щелочной фосфатазы. У крыс, получавших фармакологические средства, отсутствовали изменения со стороны функции почек, сохранялся нормальный суточный диурез, близкий к норме значение рН мочи.

Через 10 суток после отмены препаратов достоверных различий в функции печени и почек у крыс опытных и контрольной групп не наблюдалось. Патоморфологические изменения во внутренних органах выявлены только у некоторых крыс, получивших полисахариды в максимальных дозах. В печени этих животных наблюдали различной степени выраженности дистрофические изменения. Эти изменения можно объяснить как мелкокапельное ожирение печени простого типа. Данный процесс является морфологически и функционально обратимым. В других внутренних органах крыс не обнаружено патологических отклонений, обусловленных токсическим действием препарата.

Препараты в вышеназванных дозах при внутримышечном введении беременным крысам не проявили эмбриотоксических и тератогенных свойств: не влияли на продолжительность беременности, пред- и постимплантационную гибель эмбрионов, количество желтых тел, мест имплантаций и живых плодов, их массу и краниокаудальный размер.

Показателем эмбриолетальности служили пред- и постимплантационная смертность, показателем тератогенности-анатомические пороки развития и общая задержка развития плодов. На 20 день беременности по 3 животных из каждой группы умерщвляли, вскрывали полость матки и оценивали эмбриотоксическое действие фармакологических средств. У эмбрионов, подвергшихся в пренатальном периоде воздействию препаратов не отмечено уродств или пороков развития внутренних органов, а также аномалий развития скелета. Во всех испытанных дозах полисахариды не влияли на число родившихся крысят, их массу, размеры, а также на смертность в течение первых двух месяцев постнатального развития. Остальных животных содержали до родов для выявления наличия или отсутствия нарушений эмбрионального развития, проявляющихся в постнатальном периоде жизни их потомства. В течение беременности клиническое состояние животных опытных групп не отличалось от контрольной группы. Животные хорошо поедали корм и адекватно реагировали на раздражители. Скорость созревания сенсорнодвигательных рефлексов у крысят, родившихся от матерей, получавших растворы полисахаридов в течение беременности в постнатальном периоде онтогенеза, не отличалось от таковых контрольной группы. Препараты не нарушают репродуктивную функцию самцов и самок: число желтых тел, мест имплантаций, живых плодов оказались на уровне контрольных величин. Роды прошли без осложнений. В контрольной группе на одну самку приходилось-7,0 живых новорожденных крысят. Установлено, что у самок, получавших растворы полисахаридов, увеличено количество приплода. От препарата «Гемив» этот показатель составил 8,3 , от «Герас»-7,6, от «Грамо»- 9,0 и от «Синтеса» – 8,0.

Средняя масса крысят при рождении во всех группах была сходна. Уже на 10 сутки жизни масса крысят менялась и была различной между опытными группами и контрольной. В месячном возрасте живая масса крысят, которым вводили «Гемив» составила 42,6г., при введении «Герас» - 39,48 г., «Грамо» -43,3г., «Синтеса» - 33,5г., против 31,91 г. в контрольной группе. Исследования показали, что потомство всех групп развивалось без видимых нарушений и сохранность приплода составила 100%.

Выводы . У крыс, на фоне применения полисахаридов, повышается не только количество приплода, но и интенсивность роста. Полисахариды обладают малой токсичностью как при однократном введении лабораторным животным, так и при длительном. «Гемив», «Герас», «Грамо» и «Синтес» не вызывают отдаленных отрицательных эффектов (эмбриотоксичность, тератогенность, аллергизирующие свойства).

ЛИТЕРАТУРА 1. Bowerstock, T.L. Vaccine delivery to animals / T.L. Bowerstock, S.martin// Advance Drug Delivery 38.- 1999.- P.167-194. 2. Kwark, L.W. et al. Modern vaccine adyuvants // Cans. Chemother.Biother.-1996.-P.749-

763. 3. Ханис, А.Ю. Эффективность иммуномодуляторов и адъюванта при иммунизации кроликов против микроспории /А.Ю.Ханис//Ветеринария.-2000.-№1.-С.21-23.

ПОИСК СРЕДСТВ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В КАЧЕСТВЕ АДЪЮВАНТОВ

Асрутдинова Р.А., Сагитова М.Г., Камалиев А.Р., Сунагатов Ф.Ф.

Резюме

Изучено эмбриотоксическое, тератогенное, аллергизирующее свойства полисахаридов Гемив, Герас, Грамо и Синтес.

SEARCH OF MATERIALS FOR USE AS AN ADJUVANT

Asrutdinova R.A., Sagitova MG, Kamaliyev, A.R., Sunagatov F.F.