Показатели функциональной АДФ-реактивности тромбоцитов у разных видов животных

Изучение функционального состояния тромбоцитарного звена гемостаза привлекает внимание многих научных групп [4, 5, 7].

Известно, что тромбоциты представляют собой возбудимую популяцию форменных элементов крови, ответственную за процессы коагуляции, репарации сосудистой стенки, депонирование и транспорт биологически активных веществ, осуществление иммунных реакций организма. Полифункциональность этих клеток связана с множественностью различных типов рецепторов на мембране и разнообразием механизмов переноса внутриклеточного сигнала [2, 9].

Закономерна постановка вопроса и об изменении функциональной чувствительности тромбоцитов при различных патологиях. Тромбоциты, являясь высоколабильными структурами, могут активироваться даже при небольших воздействиях, при этом повышается их чувствительность к различным стимулам.

Актуальным является и поиск лабораторных критериев оценки эффективности действия антиагрегантных препаратов. В настоящее время объяснить вариабельность ответа тромбоцитов на индукцию агонистами и ингибирование селективными блокаторами известными генетическими вариантами тромбоцитарных рецепторов невозможно. И здесь на первое место встают вопросы индивидуальной чувствительности к антитромботическим препаратам в числе фармакогенетических исследований [6].

В то же время, именно фундаментальные работы по биохимии и физиологии тромбоцитов позволять создать специальные лабораторные тесты диагностики нарушений тромбоцитарного гемостаза и разработать эффективные методы лечения тромботических патологий [8].

Цель и задачи исследования. С целью пополнения фундаментальных знаний по функционированию тромбоцитарного звена гемостаза у различных видов животных были поставлены следующие задачи:

изучить характер АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов у лошадей, коров, овец и коз;

сравнить АДФ-реактивность тромбоцитов у разных видов животных между собой.

Научная новизна. Впервые в условиях Вологодской области сделана попытка оценить функциональную активность тромбоцитов периферической крови у лошадей, коров, овец и коз при индукции АДФ.

Материалы и методы

Работа выполнена на кафедре внутренних незаразных болезней, хирургии и акушерства факультета ветеринарной медицины и биотехнологий Вологодской ГМХА имени Н. В. Верещагина.

Объектом исследования служили лошади (n=7), коровы (n=18), овцы (n=14) и козы (n=10); предметом исследования – кровь животных.

Кровь у животных брали из яремной вены в специализированные пробирки с 3,8% раствором цитрата натрия.

Агрегационную активность тромбоцитов определяли с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 по Howard M.A. с использованием активатора свёртывания АДФ.

У животных проверяли индекс агрегации тромбоцитов (ИАТ), скорость агрегации (САТ), индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ) [1, 3].

Полученные в ходе исследования результаты обрабатывались с помощью программного пакета Microsoft Excel. Значения полученных результатов в работе пред- ставлены в виде средней величины и стандартной ошибки средней (M±m). Сравнение между собой данных проводилось с применением t-критерия Стьюдента.

Результаты исследований

Агрегация тромбоцитов может быть индуцирована разнообразными факторами. Особую физиологическую значимость среди них имеет АДФ, что определяется его низкими действующими концентрациями, отсутствием лаг-периода, высокой скоростью индуцированной им агрегации кровяных пластинок. Степень агрегации тромбоцитов под действием АДФ определяется большим количеством факторов, исследование которых имеет большое значение для понимания механизмов нарушений тромбоцитарного звена гемостаза и клинических осложнений, индуцированных ими.

Сводные результаты по АДФ-индуцированной агрегации у животных разных видов представлены в таблице 1.

Таблица 1. АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов у животных разных видов

Исследуемые животные	САТ, ед.опт.пл/мин	ИАТ, %	ИДТ,%
Лошади	0,016 ± 0,01 p3≤0,05; p4≤0,05	6,99 ± 2,4 * p2≤0,05; p3≤0,05	2,06 ± 1,41 p2≤0,05; p3≤0,05 p4≤0,05
Коровы	0,04 ± 0,009* p3≤0,05	19,6 ± 2,7* p1≤0,05	16,8 ± 2,2* p1≤0,05; p3≤0,05 p4≤0,05
Овцы	0,116 ± 0,018* p1≤0,05; p2≤0,05 p4≤0,05	19,92 ± 2,36* p1≤0,05	9,13 ± 1,22* p1≤0,05; p2≤0,05
Козы	0,05 ± 0,01 * p3≤0,05; p1≤0,05	14,15 ± 2,6*	7,41 ± 1,99* p1≤0,05; p2≤0,05

*p ≤ 0,05; p1 – по сравнению с лошадьми, p2 – по сравнению с коровами; p3 – по сравнению с овцами, p4 – по сравнению с козами

Скорость агрегации - это скорость прилипания тромбоцитов к субстрату. Показатели скорости агрегации тромбоцитов, стимулированной АДФ, представлены на рисунке 1. Достоверно по сравнению со всеми группами животных наибольшую скорость агрегации тромбоцитов мы наблюдали у овец; у коров и коз скорость агрегации тромбоцитов была примерно на одном уровне и достоверно ниже по сравнению с овцами. У лошадей САТ была достоверно ниже по сравнению с мелким рогатым скотом.

Рисунок 1. Показатели скорости агрегации тромбоцитов, стимулированной АДФ у разных видов животных

Индекс агрегации тромбоцитов (ИАТ) с использованием АДФ в качестве индуктора позволяет более точно оценить способность тромбоцитов крови к склеиванию. Самая низкая способность тромбоцитов склеиваться была у лошадей (достоверно по сравнению с коровами и овцами). У коров и овец достоверно агрегация тромбоцитов была самой высокой. У коз индекс агрегации тромбоцитов по сравнению с другими группами был недостоверно выше, чем у лошадей и ниже, чем у коров и овец (рис. 2).

Рисунок 2. Индекс агрегации тромбоцитов при индукции АДФ у разных видов животных

Дезагрегация тромбоцитов - играет важную роль в механизмах антитромбо-тической защиты организма. Она активируется и потенцируется различными веществами, синтезируемыми эндотелием. Если первичный ответ на АДФ не будет поддержан вторичной реакцией, то в отсутствии фибриногена происходит десен-ситизация рецепторов, которая приводит к дезагрегации тромбоцитов.

Рисунок 3. Индекс дезагрегации тромбоцитов при индукции АДФ у разных видов животных

Степень дезагрегации тромбоцитов определяется как степень распада агрегатов, чем выше степень дезагрегации, тем большее число одиночных тромбоцитов оторвалось от агрегата.

Индекс дезагрегации тромбоцитов был самым низким у лошадей (достоверно по сравнению со всеми группами животных), т.е. агрегаты тромбоцитов были самыми прочными. У коров тромбоцитарные агрегаты были самые непрочные, на что указывает высокий ИДТ (достоверно по сравнению со всеми группами животных). У овец и коз агрегаты тромбоцитов достоверно по сравнению с лошадьми и коровами были средней прочности (рис. 2).

Таким образом, результаты проведенного исследования показали:

• -    У разных видов животных имеются свои видовые особенности в индуцированной способности тромбоцитов к прилипанию к субстрату и склеиванию друг с другом.

• -    Наибольшая способность тромбоцитов к прилипанию и склеиванию под влиянием АДФ по сравнению с другими группами животных была обнаружена у овец. Агрегаты из тромбоцитов были средней прочности.

• -    У коров способность тромбоцитов к склеиванию друг с другом при индукции АДФ превышает их способность прилипания к субстрату. Агрегаты из тромбоцитов были самыми непрочными.

• -    У коз способность тромбоцитов приклеиваться к субстрату при индукции АДФ превышает их способность склеиваться друг с другом. Агрегаты из тромбоцитов были средней прочности.

• -    У лошадей по сравнению с другими группами животных мы получили самую низкую АДФ-индуцированную способность тромбоцитов к прилипанию и склеиванию. Агрегаты из тромбоцитов были самыми прочными.