Показатели иммунограмм собак при разной степени сенсибилизации Т-«активных» лимфоцитов к адреналину и гаммааминомасляной кислоте

Интегративные системы организма – нервная, иммунная и эндокринная – сопряжено функционируют в тесных взаимодействиях на всех иерархических уровнях в организации регуляторных процессов в организме и, учитывая такое единство, дезрегуляторная патология в какой либо из трех основных гомеостатических систем организма, инициированная негативным влиянием любых патологических факторов, вследствие дефектности механизмов адаптивного гемокинеза в организме животных будет отражаться на функции специализированных органов и тканей во всех биологических системах [4, 10].

В настоящее время доказана возможность абсорбции катехоламинов поверхностью активированных иммунокомпетентных клеток, что свидетельствует об экспрессии на мембрану этих клеток адренорецепторов во время иммунизации или других процессов [6]. Мишенями иммунной системы для влияния нейромедиатора адреналина являются Т-лимфоциты. Установлено, что уровень Т-адренорецепции отображает степень активности симпатоадреаловой системы в ответ на действие стресс-фактора. Это дает основания считать, что рецепция Т-«активных» лимфоцитов отображает стресорную реакцию организма [5].

Исследования, проведенные Беляевой С.С. (2004), показали иммунтропные эффекты некоторых производных гаммааминомасляной кислоты (ГАМК), что выражалось в повышении функциональной и фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови. По данным Трокоза А.В. и др (2012), отмечена взаимосвязь между подвижностью процессов возбуждения и торможения в коре большого мозга и содержанием гемоглобина в крови животных. Адаптативно направленная нейроиммуномодуляция при условии адекватного влияния на тонкий баланс возбуждающих и тормозящих функциональных процессов может обеспечить положительные лечебные эффекты. В доступных литературных источниках мы не нашли данных о иммунофизиологическом состоянии организма в зависимости от уровня сенсибилизации лимфоцитов к нейромедиаторам.

Материалы и методы исследований. Работа выполнена на кафедре физиологии, биохимии и микробиологии Одесского государственного аграрного университета совместно с лабораторией иммунологии института глазных болезней им. академика В.П. Филатова. Клинический осмотр собак и отбор проб крови проводили в условиях частной ветеринарной клиники г. Одессы. Материалом для исследований была предварительно стабилизированная периферическая кровь беспородных собак, возрастом 1-5 лет (n=62), которые имели одинаковые условия содержания и кормления. Кровь отбирали утром на голодный желудок из локтевой вены в пробирку с ЭДТА. В крови определяли абсолютное количество лейкоцитов, относительное количество лимфоцитов и их субпопуляций, а также количество фагоцитирующих нейтрофилов [3]. Количество лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева, лейкоцитарную формулу выводили в мазке, окрашенном по Романовскому-Гимза. В крови определяли относительное содержание лимфоцитов и их субпопуляций в реакции розеткообразования с эритроцитами барана (Э-тф.р.-РОЛ, Э-тф.ч.-РОЛ). В-лимфоциты определяли в реакции розеткообразования с эритроцитами мыши (М-РОЛ). Розеткообразующей считали клетку, которая присоединила три и более эритроцита. Степень сенсибилизации организма к нейромедиаторам адреналину и ГАМК определяли в нагрузочном тесте по проценту инверсии Т-«активных» лимфоцитов. Суть данного теста заключается в том, что во время предварительной инкубации лейкоцитарнолимфоцитарной смеси с нейромедиаторами адреналином и ГАМК часть активных рецепторов на поверхности лимфоцитов соединяются с этим нейромедиатором, что приводит к уменьшению «активных» розеткообразующих клеток в опытных пробах. Разница в количестве розеткообразующих клеток в опыте (с добавлением нейромедиатора) и контроле (с физраствором) является процентом инверсии Т-«активных» лимфоцитов и отображает уровень сенсибилизации организма к этим нейромедиаторам. Если процент инверсии <10% - это низкая степень сенсибилизации. Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли по способности захватывать пекарские дрожжи в пересчете на 50 клеток. Фагоцитирующим считали нейтрофил, который поглотил одну и более дрожжевых клеток. После оценки имунофизиологического состояния организма животных разделили по группам учитывая уровень сенсибилизации к нейромедиаторам: I группа (n=23) - у животных высокая сенсибилизация (больше

10%) к ГАМК и низкая к адреналину; II группа (n=18) - высокая сенсибилизация (больше 10%) к адреналину и низкая к ГАМК; III - группа (n=21) - степень сенсибилизации к ГАМК и адреналину одинаковая у всех животных.

Результаты    исследования    и обсуждение. Наличие влияния на иммунокомпетентные клетки постоянного тонического тормозного контроля со стороны    основных    интегративных гомеостатических систем обеспечивает нормальное функционирование клеток, возможность     восстановления     их внутриклеточных               структур, энергетического     и     пластического потенциала и отсутствие реакции на различные функциональные незначимые стимулы. При условии снятия тонического торможения происходит патологическое растормаживание       клеток,       что обуславливает             возникновение дезрегуляционной патологии вследствие дефицита              контролирующих экстраклеточных механизмов и приводит к изменению       экспрессии       генов, метаболических процессов, структуры рецепторного                   аппарата специализированных   клеток,   спектра ферментов и, возможно, частичному нарушению дефференцировки.

Влияние             повышенной сенсибилизации Т-«активных» лимфоцитов на адреналин у собак было подробно описанонами ранее [2]. В обобщенном виде результатыэтихисследований характеризовались следующим. Повышение больше, чем на 10   % степени сенсибилизации       организма       к нейромедиатору адреналину в реакции Т-«активных» лимфоцитов в большинстве случаев   обуславливает необходимость более     продолжительного     периода иммунокорекции, а также повторения этих курсов.     Высокий     уровень     Т- адренорецепции           сопровождался повышением относительного количества Т-хелперных и уменьшением Т-супрессорных клеток.

Оценка показателей иммунограмм с разной степенью сенсибилизации к нейромедиаторам (таблица) показала, что животные с большей сенсибилизацией Т-«активных» лимфоцитов к ГАМК (I группа) имеют в среднем на 2,0*106 меньше абсолютное количество лейкоцитов, при      сравнению с первой, на 4,6% (р<0,01)

этом      относительное     содержание      меньше.

лимфоцитов у животных второй группы, по

Таблица - Показатели иммунограмм собак в зависимости от степени сенсибилизации Т-«активных» лимфоцитов к нейромедиаторам

Груп пы живот ных	Иммунофизиологические показатели
	Лейкоци-ты,х106	Лимфоциты, %	Т-лимфоциты, %	Т-хелперы, индук-торы,%	Т-супре-ссоры, цитоток-сические,%	В-лим-фоциты, %	Иммуноре-гуляторный индекс, Тх\Тс	Фагоцитоз ней-трофи-лов,%	Натураль ные киллеры, %
І группа	8,6±	*33,6±	65,2±	48,0±	15,2±	16,0±	3,38±	43,2±	*6,6±
(n=23)	4,86	7,8	15,21	8,42	5,76	4,0	0,83	14,33	3,36
II	10,58±	29,0±	71,8±	52,0±	20,4±	14,4±	2,66±	41,6±	4,0±
группа (n=18)	6,19	4,07	14,26	13,49	1,67	2,61	0,69	7,26	0,71
III	8,68±	54,8±	65,2±	44,8±	20,4±	15,2±	2,28±	44,8±	7,4±
группа (n=21)	1,69	9,93	12,45	10,64	5,37	2,29	0,83	10,45	2,51

Примечание : *разница между 1-й и 2-й группами достоверна при р<0,01

Результаты иммунологических исследований у животных с одинаковой уровнем сенсибилизации к адреналину и ГАМК (III группа) показали, что при такой активности рецепторного аппарата Т-лимфоцитов отмечается более высокое содержание относительного количества лимфоцитов.

Следует отметить, что кроме более низкого относительного количества лимфоцитов, составляющих клеточное звено иммунной системы, у животных с повышенной сенсибилизацией к адреналину Т-лимфоцитов отмечаются определенные негативные изменения в функциональном статусе иммунокомпетентных клеток. В частности, у таких животных большее количество Т-хелперов.При этом число Т-супрессоров не изменяется, а относительное содержание естественных киллеров (ЕК) самое низкое, в сравнении с остальными группами.Учитывая тот факт, что продуктом активированных Т-хелперов является интерлейкин-2 (ИЛ-2), высокое содержание этого цитокина в организме часто приводит к развитию неадекватного иммунного ответа. Кроме того, ИЛ-2 влияет на функциональное состояние нейроструктур мозга, в частности таких специализированных клеток, как нейроциты сетчатки глаза [4]. Как отмечает В. Казмирчук (2012), дефицит ЕК является фактором риска возникновения частых вирусных заболеваний и формирования новообразований.

Количественная характеристика другой популяции лимфоцитов - В-клеток не показала строгой зависимости относительного показателя у животных всех трех групп. Полученные с помощью реакции розеткообразования с эритроцитами мыши результаты свидетельствовали об отсутствии прямого, рецепторноопосредованого влияния нейромедиаторов на данную популяцию лимфоцитов. На рисунке представлены показатели иммунограмм собак в зависимости от степени сенсибилизации «активных» Т-лимфоцитов к ГАМК. Результаты статистической обработки полученных данных показали, что при увеличении степени сенсибилизации к ГАМК абсолютное количество лейкоцитов уменьшается. Сравнивая полученные результаты с данными оценки степени сенсибилизации к антагонисту ГАМК -адреналину следует отметить, что с повышением Т-адренорецепции абсолютное количество лейкоцитов имеет тенденцию к увеличению. Более выраженные изменения отмечены в относительном количестве лимфоцитов. Так, при уровне сенсибилизации «активных» лимфоцитов к ГАМК до 10% относительное количество лимфоцитов, в среднем, на 8% больше, чем при степени сенсибилизации более 10%.

Рис. Показатели иммунограм собак при разном уровне сенсибилизации Т-"активных" лимфоцитов к ГАМК

– степень сенсибилизации лимфоцитов к ГАМК до 10%;

– степень сенсибилизации лимфоцитов более к ГАМК 10%.

У животных с высокой степенью сенсибилизации к ГАМК отмечается увеличение относительного количества лимфоцитов в основном за счет Т-хелпеных клеток, при этом относительное число Т-супресоров, наоборот, уменьшается. Следует отметить, что такойэффект приводит к нарушению имуногрегуляторного индекса (Тх\Тс), что может способствовать проявлению дезрегулятивгных изменений имунофизиологического состояния. Важным фактом является то, что независимо от уровня сенсибилизации лимфоцитов к ГАМК количество естественных киллеров практически не изменяется.

Выводы. Степень сенсибилизации «активных» Т-лимфоцитов к нейромедиаторам в нагрузочных тестах реакции розеткообразованиякоррелятивно отражает состояние нейроиммуннорегуляторных механизмов в организме собак. Так, повышение сенсибилизации лимфоцитов к адреналину сопровождается увеличением абсолютного количества лейкоцитов.В свою очередь повышение сенсибилизации к ГАМК происходит на фоне противоположного эффекта, т.е. снижения количества лейкоцитов. иммунофизиологические иммунограмм отмечены степени сенсибилизации как так и к ГАМК.

абсолютного Оптимальные показатели при равной к адреналину,

Резюме

Проведены исследования по изучению особенностей иммунограмм собак в зависимости от степени сенсибилизации «активных» Т-лимфоцитов на адреналин и гаммааминомасляную кислоту (ГАМК). Материалом для исследований была предварительно стабилизированная периферическая кровь беспородных собак, возрастом 1–5 лет (n=62), которые имели одинаковые условия содержания и кормления. Установлено, что у животных с большей сенсибилизацией Т-«активных» лимфоцитов к ГАМКколичество лейкоцитов меньше в среднем на 2,0×106. При этом относительное количество лимфоцитов у животных с высокой сенсибилизацией (больше 10%) к адреналину и низкой к ГАМК по сравнению с первыми на 4,6% (р<0,01) меньше. Результаты иммунологических исследований у животных с одинаковой уровнем сенсибилизации к адреналину и ГАМК показали, что при такой активности рецепторного аппарата Т-лимфоцитов отмечается более высокое относительное количество лимфоцитов. Повышение сенсибилизации лимфоцитов к адреналину способствует увеличению количества лейкоцитов, а повышение сенсибилизации к ГАМК способствует противоположному эффекту.